ملاحظة السلوك الضوئي في الكلاميدوموناس reinhardtii

السؤال الرئيسي الذي تعالجه هذه الطريقة هو ، إذا كانت سلالة من الكلاميدومونا المثيرة للاهتمام تحتفظ بالقدرة على سلوكيات الصور أم لا. هذه الطريقة بسيطة وسريعة وسهلة الاختبار إذا كانت سلالة من السلوكيات المثيرة للاهتمام تعرض الصور. يمكن أن تساهم هذه الطريقة في علم الأحياء الضوئي وبيولوجيا الخلية للحركة الهدبية.

سيوضح الإجراء أتسوكو إيسو ، فني مختبر من مختبري. للبدء ، أضف من اثنين إلى ثلاثة ملليلترات من تعليق الخلايا في طبق بتري 3.5 سم وضع الطبق على صندوق خفيف. رج الطبق بلطف لتوزيع الخلايا بشكل موحد والحصول على صورة قبل الإضاءة.

قم بإضاءة الطبق من جانب واحد باستخدام صمام ثنائي أو LED باعث للضوء الأخضر في غرفة مظلمة على سطح المكتب. اترك الطبق لمدة خمس دقائق تقريبا قبل الحصول على الصور. بالنسبة لفحص التاكسي الضوئي باستخدام قطرات زراعة الخلايا ، ضع 25 ميكرولتر من قطرات تعليق الخلايا مباشرة على لوحة بلاستيكية بيضاء باستخدام ماصة صغيرة.

قم بإضاءة القطرات من جانب واحد باستخدام مصباح LED أخضر في غرفة مظلمة لسطح المكتب واتركها لمدة ثلاث دقائق قبل الحصول على الصور. ضع 30 ميكرولتر من تعليق الخلايا على شريحة زجاجية وضع شريحة غطاء 18 × 18 ملم مع فواصل على الجانب. قم بإلقاء الضوء على العينات من جانب واحد من انزلاق الغطاء بدون فاصل باستخدام مصباح LED أخضر ، وراقب الخلايا تحت مجهر دارك فيلد باستخدام عدسة موضوعية 10X تحت الضوء الأحمر الخافت.

بعد إضاءة الضوء، سجل إضاءة الخلية لمدة 20 ثانية باستخدام مجهر مجهز بالكاميرا. لفحص استجابة الصدمة الضوئية ، ضع 30 ميكرولتر من تعليق الخلايا على شريحة زجاجية ، وضع شريحة غطاء مع فواصل أعلى الشريحة. راقب الخلية تحت المجهر بضوء أحمر خافت.

قم بتطبيق إضاءة الفلاش باستخدام فلاش الكاميرا أثناء تسجيل حركة الخلية. يظهر هنا مثال تمثيلي لسيارات الأجرة الضوئية السلبية في Chlamydomonas reinhardtii بعد خمس دقائق من الإضاءة الجانبية. معظم الخلايا المتراكمة على الجانب الآخر من مصدر الضوء.

في فحص استجابة الصدمة الضوئية ، أظهرت جميع الخلايا تقريبا استجابة الصدمة الضوئية. سبحت الخلايا إلى الخلف لفترة قصيرة وتعافت إلى الأمام وهي تسبح. لتنفيذ هذا الإجراء ، استخدم خلايا aridimigudolphase وتعريضها للضوء الأحمر قبل الفحص.

إذا لم تتعرض للضوء الأحمر ، فستصبح الخلايا غير حساسة للضوء. هذه التقنية تعزل مختلف الطفرات مع التاكسي الضوئي غير طبيعي من استجابات الصدمة الضوئية. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد العديد من العوامل داخل الخلايا وخارجها التي تؤثر على سلوكيات الصورة.