עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית המחקר והפיתוח, בית החולים לסטומטולוגיה של מערב סין, אוניברסיטת סצ'ואן (RD-02-202107), תוכנית התמיכה במדע וטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (2022NSFSC0743), ומענק הקרן למדע פוסט-דוקטורט בסצ'ואן (TB2022005) לה. הואנג.

כל ההליכים בבעלי חיים במחקר זה נבדקו ואושרו על ידי הוועדה האתית של בית הספר לסטומטולוגיה של מערב סין, אוניברסיטת סצ'ואן. עכברי C57BL/6 בוגרים (נקבה) שימשו במחקר הנוכחי.
1. הכנה כירורגית
<ol><li>אספו את כלי הניתוח הדרושים להליך: נביטה, צריבה אופתלמולוגית, מספריים מיקרו-כירורגיים, פינצטה מיקרו-כירורגית, מזרקים ומחטים (26 גרם x 0.63 אינץ') (איור 1A,B) (ראו טבלת חומרים). הערה: לפני ההליך הכירורגי, autoclave את כלי הניתוח, כולל צריבה אופתלמולוגית, פינצטה microsurgical ומספריים microsurgical , ב 102.9 kPa (1.05 ק"ג / ס"מ2) ו 121 ° C במשך 20 דקות.</li>
	<li>אספו את הציוד הכירורגי הדרוש: וילונות כירורגיים, כפפות לטקס, כותנה סטרילית, יריעות סטריליות, רדיד מתכת סטרילי, לוח קצף כפלטפורמה כירורגית, גומיות (שניתן להשיג על ידי קריעת כפפת לטקס רפואית) וסרט (איור 1C) (ראו טבלת חומרים). הערה: השתמש בערכת חומרים מתכלים נפרדת עבור כל עכבר, כולל מזרקים ויריעות סטריליות עבור שדה הניתוח.</li>
	<li>נקו את אזור הניתוח ואת מכשיר הניתוח (מקור אור, לוח קצף ומכשיר לתחזוקת טמפרטורה, ראו טבלת חומרים) באמצעות מגבוני אלכוהול. כסו את הידיות והידיות של מכשירים שעשויים להידרש במהלך ההליך ברדיד מתכת סטרילי.</li>
	<li>פתח את המכשירים הבודדים ומקם אותם בזהירות באזור הניתוח. הפעל את המביט (ראה טבלת חומרים) ואת האורות לשימוש במהלך ההליך. מניחים את הצריבה האופטלמולוגית לתוך הנבט ומחממים אותו ל 250 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות.</li>
</ol>2. הליך כירורגי
<ol><li>בצע קיבוע של העכבר ופתח את חלל הפה לפי השלבים הבאים.<ol><li>בחר עכבר נקבה C57BL/6J במשקל 20-25 גרם ובגילאי 8-12 שבועות. בית העכבר במשך 7 ימים לפני ביצוע הליכים כלשהם.</li>
		<li>הרדימו את העכבר על ידי הזרקה תוך צפקית של Zoletil50 (80 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (5 מ"ג/ק"ג) (ראו טבלת חומרים). החל משחת עיניים אופתלמית על העין של העכבר. חכו עד שלא תהיה תגובה של צביטת אצבע. הערה: העכבר מוכן להליך כאשר אין באפשרותו להתהפך באופן עצמאי.</li>
		<li>חבר את העכבר ללוח קצף מרופד ביריעות סטריליות. השתמשו בסרט הדבקה כדי לקשור את העכבר למשטח הניתוח במצב שכיבה (איור 2A).</li>
		<li>פתח את חלל הפה של העכבר. מקם שתי מחטים (26 גרם x 0.63 אינץ ') לפני מישור האוזן המסלולית ושתיים נוספות מאחוריו. מניחים גומייה סביב המחטים וחוצים את החותכות כדי להחזיק את הפה פתוח. השתמשו בפינצטה מיקרוכירורגית כדי לפתוח את זוויות הפה (איור 2B). הערה: ודא שהחיך הקשיח חשוף בבירור. קבע את הלשון מתחת לגומייה כדי למנוע חסימה של שדה הראייה וצריבה במהלך הניסויים הבאים.</li>
	</ol></li>
	<li>צרו את הפיסטולה האורונזאלית (ONF) על החיך הקשה (איור 3A-F).<ol><li>אחזר את הצריבה אופתלמולוגית, אשר כבר מחומם ל 250 ° C במשך 20 דקות. מניחים את קצה הצריבה במרחק של 1 מ"מ מההצטלבות של קו האמצע של החיך וקו הטוחנת הקדם-טוחנת הראשונה, ויוצרים פגיעה ברירית בעובי מלא לחיך הקשה בקו האמצע. הערה: הימנע מצריבת לשון העכבר.</li>
		<li>לאחר מספר שניות, הסר את הצריבה האופטלמולוגית כאשר הרירית סביב קצה הצריבה הופכת לבנה.</li>
		<li>מניחים את הצריבה האופטלמולוגית בנבט וממשיכים לחמם אותה ל 250 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. חזור על השלב הקודם כדי להגדיל את הפצע סביב הקצוות עד שהוא מגיע לאורך של 2.0 מ"מ ורוחב של 1.5 מ"מ. הערה: כל הארכה צריכה לעקוב אחר קצה הפציעה האחרונה. השתמש בקליפר ורנייר כדי למדוד את אורך ורוחב הפציעה. הפציעה צריכה לכסות 10% מהחיך.</li>
		<li>השתמש מספריים microsurgical כדי להסיר כל רקמה רכה denatured עודף סביב הפצע. השתמש כותנה סטרילית כדי לעצור דימום ולמנוע שאיפה חנק של העכבר. מדדו את הפצע כדי לוודא שהוא יוצר פגיעה ברירית החיך הקשה בעובי מלא בגודל 2.0 x 1.5 מ"מ בקו האמצע.</li>
	</ol></li>
</ol>3. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>מתן Meloxicam לעכבר בזמן התעוררות לאחר הניתוח, במינון של 5 מ"ג / ק"ג / d במשך 3 ימים, תת עורית29.</li>
	<li>הניחו את העכבר על מכשיר לשמירת טמפרטורה עד שהוא חוזר להכרה מלאה. הערה: ודא שהעכבר ממוקם באופן המאפשר נשימה. סובבו את העכברים כל 10-15 דקות כדי למנוע איגום דם או קריסה של אונות ריאה. לאחר שהעכבר התחמם, החזירו אותו לכלוב שלו. לספק ג'לי סטרילי ומזון מוקרן בתחתית הכלוב עבור העכברים לצרוך.</li>
</ol>4. אימות יצירת פיסטולה אורונזאלית
הערה: ההצלחה של יצירת פיסטולה oronasal (ONF) מוערכת ביום השביעי לאחר ההליך הכירורגי.
<ol><li>הכינו את הציוד הכירורגי הדרוש: גומייה, סרט הדבקה, מזרקים, וילונות כירורגיים, כפפות לטקס, יריעות סטריליות, רדיד מתכת סטרילי וקרש קצף.</li>
	<li>יש ללבוש וילונות כירורגיים וכפפות סטריליות כדי לשמור על תנאים אספטיים. יש לחטא את לוח הקצף, מקור האור ומכשיר תחזוקת הטמפרטורה באלכוהול.</li>
	<li>יש לגרום להרדמה כללית על ידי הזרקה תוך צפקית של Zoletil50 (80 מ"ג/ק"ג). חכו עד שלא תהיה תגובה של צביטת אצבע. השתמש באותה שיטה כמתואר בשלב 2.1.3 ו- 2.1.4 כדי לשתק את העכבר ולחשוף את החיך הקשה.</li>
	<li>בצעו אימות אנטומי מבני על-ידי כך שתבטיחו שהמחיצה עדיין נראית לעין באתר הפצע, מה שמעיד על יצירת ONF מוצלחת (איור 4A,B).</li>
	<li>ביצוע אימות פונקציונלי: סגור את חלל הפה של העכבר והזריק מים סטריליים לחלל הפה שלו באמצעות מזרק סטרילי. היצירה המוצלחת של ONF מאושרת כאשר נוזל זורם מנחיריו של העכבר.</li>
	<li>הניחו את העכבר על מכשיר שמירת הטמפרטורה (37°C) עד שהוא חוזר להכרה מלאה. סובבו את העכברים כל 10-15 דקות כדי למנוע איגום דם או קריסה של אונות ריאה.</li>
</ol>

פיתוח מודל עכברים יעיל לחקר פיסטולות אורונזאליות

<ol>
	<li>Alonso, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-layered+repair+with+a+collagen+membrane+and+a+mucosal+rotational+flap+reinforced+with+fibrine+for+palatal+fistula+closure+in+children.">Three-layered repair with a collagen membrane and a mucosal rotational flap reinforced with fibrine for palatal fistula closure in children.</a> International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology. 127, 109679 (2019).</li><li>Garg, R., Shah, S., Uppal, S., Mittal, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+incidence,+etiology,+and+management+of+palatal+fistula.">A statistical analysis of incidence, etiology, and management of palatal fistula.</a> National Journal of Maxillofacial Surgery. 10 (1), 43-46 (2019).</li><li>Mahajan, R. K., Kaur, A., Singh, S. M., Kumar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+analysis+of+incidence+and+management+of+palatal+fistula.">A retrospective analysis of incidence and management of palatal fistula.</a> Indian Journal of Plastic Surgery. 51 (3), 298-305 (2018).</li><li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+Chinese+Velopharyngeal+Insufficiency+Effects+on+Life+Outcomes+Instrument.">Validation of the Chinese Velopharyngeal Insufficiency Effects on Life Outcomes Instrument.</a> Laryngoscope. 129 (11), E395-E401 (2019).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Postoperative+Outcomes+in+Two+Cleft+Palate+Repair+Techniques+without+Relaxing+Incisions.">Evaluation of Postoperative Outcomes in Two Cleft Palate Repair Techniques without Relaxing Incisions.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. , (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+late+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions.">Evaluation of late cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> Journal of Stomatology, Oral and Maxillofacial Surgery. 124 (4), 101403 (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sommerlad-Furlow+modified+palatoplasty+technique:+postoperative+complications+and+implicating+factors.">The Sommerlad-Furlow modified palatoplasty technique: postoperative complications and implicating factors.</a> Laryngoscope. 133 (4), 822-829 (2023).</li><li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions.">Early cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> The Cleft Palate-Craniofacial Journal. , (2022).</li><li>Chen, J., Yang, R., Shi, B., Xu, Y., Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obturator+manufacturing+for+oronasal+fistula+after+cleft+palate+repair:+a+review+from+handicraft+to+the+application+of+digital+techniques.">Obturator manufacturing for oronasal fistula after cleft palate repair: a review from handicraft to the application of digital techniques.</a> Journal of Functional Biomaterials. 13 (4), 251 (2022).</li><li>Yussif, N., Wagih, R., Selim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propylene+mesh+versus+acrylic+resin+stent+for+palatal+wound+protection+following+free+gingival+graft+harvesting:+a+short-term+pilot+randomized+clinical+trial.">Propylene mesh versus acrylic resin stent for palatal wound protection following free gingival graft harvesting: a short-term pilot randomized clinical trial.</a> BMC Oral Health. 21 (1), 208 (2021).</li><li>Miron, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+and+soft+tissue+wound+healing:+a+systematic+review.">Platelet-rich fibrin and soft tissue wound healing: a systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 23 (1), 83-99 (2017).</li><li>Ballestas, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+hard+palate+wound+healing+using+immune+modulatory+autotherapies.">Improving hard palate wound healing using immune modulatory autotherapies.</a> Acta Biomaterialia. 91, 209-219 (2019).</li><li>Ferreira, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+stimulation+enhances+early+palatal+wound+healing+in+mice.">Electrical stimulation enhances early palatal wound healing in mice.</a> Archives of Oral Biology. 122, 105028 (2021).</li><li>Lindley, L. E., Stojadinovic, O., Pastar, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+Biomarkers+for+Wound+Healing.">Biology and Biomarkers for Wound Healing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 18s-28s (2016).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Additive+Manufacturing+of+a+Superlight+Obturator+for+Large+Oronasal+Fistula+in+Pediatric+Patient.">Rapid Additive Manufacturing of a Superlight Obturator for Large Oronasal Fistula in Pediatric Patient.</a> Laryngoscope. 133 (6), 1507-1512 (2022).</li><li>Leenstra, T. S., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+healing+process+of+palatal+tissues+after+palatal+surgery+with+and+without+implantation+of+membranes:+an+experimental+study+in+dogs.">The healing process of palatal tissues after palatal surgery with and without implantation of membranes: an experimental study in dogs.</a> Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 9 (5), 249-255 (1998).</li><li>In de Braekt, M. M., van Alphen, F. A., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+wound+contraction+after+palatal+surgery+and+implantation+of+poly-(L-lactic)+acid+membranes+in+beagle+dogs.">Wound healing and wound contraction after palatal surgery and implantation of poly-(L-lactic) acid membranes in beagle dogs.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 50 (4), 359-365 (1992).</li><li>Suragimath, G., Krishnaprasad, K. R., Moogla, S., Sridhara, S. U., Raju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+carbonated+drink+on+excisional+palatal+wound+healing:+A+study+on+Wistar+rats.">Effect of carbonated drink on excisional palatal wound healing: A study on Wistar rats.</a> Indian Journal of Dental Research. 21 (3), 330-333 (2010).</li><li>Zhu, T., Park, H. C., Son, K. M., Yang, H. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+dimethyloxalylglycine+on+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+a+rat+model.">Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model.</a> BMC Oral Health. 15 (1), 60 (2015).</li><li>Kirschner, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulae+with+acellular+dermal+matrices.">Repair of oronasal fistulae with acellular dermal matrices.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (6), 1431-1440 (2006).</li><li>Rohleder, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulae+by+interposition+of+multilayered+amniotic+membrane+allograft.">Repair of oronasal fistulae by interposition of multilayered amniotic membrane allograft.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (1), 172-181 (2013).</li><li>Kesting, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+oronasal+fistulas+with+human+amniotic+membrane+in+minipigs.">Repair of oronasal fistulas with human amniotic membrane in minipigs.</a> British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 131-135 (2010).</li><li>Ayvazyan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-gelatin+scaffold+impregnated+with+bFGF+accelerates+palatal+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+dogs.">Collagen-gelatin scaffold impregnated with bFGF accelerates palatal wound healing of palatal mucosa in dogs.</a> Journal of Surgical Research. 171 (2), e247-e257 (2011).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model.">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).</li><li>Shan, L., Flavell, R. A., Herndler-Brandstetter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+humanized+mouse+models+for+studying+human+NK+cells+in+health+and+disease.">Development of humanized mouse models for studying human NK cells in health and disease.</a> Methods in Molecular Biology. 2463, 53-66 (2022).</li><li>Keswani, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+salivary+vascular+endothelial+growth+factor+(VEGF)+in+palatal+mucosal+wound+healing.">Role of salivary vascular endothelial growth factor (VEGF) in palatal mucosal wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (4), 554-562 (2013).</li><li>Amanso, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+delivery+of+FTY720+induces+neutrophil+activation+through+chemokine+signaling+in+an+oronasal+fistula+model.">Local delivery of FTY720 induces neutrophil activation through chemokine signaling in an oronasal fistula model.</a> Regenerative Engineering and Translational Medicine. 7 (2), 160-174 (2021).</li><li>Antiorio, A. T. F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+meloxicam+to+improve+the+welfare+of+mice+in+research:+a+systematic+review+(2000+-+2020).">Administration of meloxicam to improve the welfare of mice in research: a systematic review (2000 - 2020).</a> Veterinary Research Communications. 46 (1), 1-8 (2022).</li></ol>

למחברים אין מה לחשוף.

חוקרים חקרו חומרים שונים, תרופות וטכניקות חדשניות לטיפול ב- ONF 10,11,12,13,14,15,16,17. עם התקדמות בהליכים כירורגיים, השכיחות וההישנות של ONF הופחתו. עם זא...

פיסטולה אורונזאלית (ONF), פתח לא תקין בין חלל הפה והאף, מתבטאת קלינית בפגם באזור מבני מתהליך הנאדיות ועד האובולה, המתרחש בדרך כלל כסיבוך לאחר תיקון חיך שסוע1. חולים עם ONF חווים ריפלוקס מזון, הפרעות ביטוי ותפקוד וולופרינגיאלי לקוי, המשפיעים באופן משמעותי על איכות חייהם 2,3,4. שיעור ONF לאחר הניתוח נע בין 2.4% ל -55% בשל גורמים כגון רוחב שסוע, סוג Veau ושיטה כירורגית 5,6,7,8. בנוסף, שיעור ההישנות לאחר תיקון ONF גבוה, ונע בין 0% ל-43%9.
מספר טיפולים חדשניים הראו לאחרונה הבטחה בתחום ONF, כולל חומרים שונים, תרופות וטכניקות חדשניות 10,11,12,13,14,15,16,17. הערכה מדויקת של השפעות טיפוליות היא חיונית מכיוון שהיא מספקת את הבסיס לבחירה ופיתוח נוסף של טיפולי ONF. עם זאת, קבלת הערכה תקפה בטווח הקצר עבור השפעות טיפוליות שאינן ניתוח היא מאתגרת, שכן המאפיינים של ONFs משתנים בין חולים שונים. לכן, הקמת מודל מחלת ONF נחוצה כדי לוודא את היעילות של שיטות טיפול אלה.
במשך כמה עשורים, חוקרים יצרו את מודל הפיסטולה האורונזאלית (ONF) במינים שונים של בעלי חיים, כולל חולדות18,19, חזירונים 20,21, מיני-חזירים 22 וכלבים 23, שכן למינים אלה יש חיך קשה משמעותי המתאים למניפולציה כירורגית. עם זאת, לעכברים יש רצף גנטי וגנום שלם הדומה לזה של בני אדם, מה שהופך אותם למודל חשוב למחקר ופיתוח תרופות חדשות24,25,26. יתר על כן, עכברים מציעים שונות קטנה מאצווה לאצווה, מה שהופך אותם לבחירה חיובית להקמת מודל ONF12,13,27.
עם זאת, השלבים המפורטים ליצירת ONF לא תוארו, והיציבות של גודל ONF לא נלקחה בחשבון. בנוסף, אימות היווצרות ONF הסתמך אך ורק על תצפית28, מבלי להבטיח תקשורת ישירה בין חלל הפה והאף. זה לא הודגם באמצעים אחרים, כגון אובדן משקל הגוף של העכבר עקב קשיי אכילה שנגרמו על ידי ONF. יתר על כן, שונות נורמלית בגודל הפצע לא נלקחה בחשבון, וזה חיוני למחקרים על תרופות או חומרים המקדמים או מעכבים ריפוי פצעים. לכן, יש צורך חזק להקים מודל ONF יציב ומאומת.
מטרת מחקר זה הייתה לפתח מודל ONF מעשי המתייחס לסוגיות הנ"ל, בתקווה שפרוטוקול זה ישמש בסיס למחקר עתידי על מנגנוני ריפוי פצעי החיך וטיפולים חדשניים ל- ONF.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Germinator</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences&#160;</td>
			<td>66118-20</td>
			<td>Heating and disinfection equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex gloves</td>
			<td>Allmed</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lights</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>A1813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>MedChemExpress</td>
			<td>HY-B0261</td>
			<td>crushed; 5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical instruments (scissors and tweezers)</td>
			<td>Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.</td>
			<td>M-Y-0087</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmologic cautery</td>
			<td>Suqian Wenchong Medical Equipment Co.</td>
			<td>1.00234E+13</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cotton,</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile metal foil</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile sheets</td>
			<td>3M</td>
			<td>XH003801129</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes</td>
			<td>Yancheng Begu Technology Co.</td>
			<td>S-015301</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>Bkmamlab</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature maintenance device</td>
			<td>Harvard Apparatus&#160;</td>
			<td>LE-13-2104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil50</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>80 mg/kg</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of an oronasal fistula mice model

מחקר זה מציג שיטה המשתמשת בצריבה אופתלמולוגית מחוממת לפיתוח מודל בר קיימא לחקר פיסטולות אורונזאליות. עכברי C57BL/6 שימשו לביסוס מודל הפיסטולה האורונזאלית (ONF). כדי ליצור את ONF, העכברים הורדמו, שותקו, והחיך הקשה שלהם נחשף. במהלך ההליך הכירורגי נגרמה פגיעה ברירית בעובי מלא של 2.0 x 1.5 מ"מ בקו האמצע של החיך הקשה באמצעות צריבה אופתלמולוגית. היה חיוני לשלוט בגודל ה-ONF ולמזער דימום כדי להבטיח את הצלחת הניסוי. אימות יעילות מודל ONF נערך ביום השביעי שלאחר הניתוח, וכלל הערכות אנטומיות ותפקודיות כאחד. נוכחותה של מחיצת האף בתוך חלל הפה ויציאת המים הסטריליים מהנחיריים עם הזרקתם לחלל הפה אישרו את הקמתו המוצלחת של מודל ONF. המודל הדגים פיסטולה אורונזאלית מעשית ומוצלחת, המאופיינת בשיעור תמותה נמוך, שינויים משמעותיים במשקל ושונות מינימלית בגודל ONF. מחקרים עתידיים עשויים לשקול לאמץ מתודולוגיה זו כדי להבהיר את מנגנוני ריפוי פצעי החיך ולחקור טיפולים חדשניים לפיסטולות אורונזאליות.

Oronasal fistula (ONF), an abnormal opening between the oral and nasal cavities, clinically manifests as a defect in a structural area from the alveolar process to the uvula, which commonly occurs as a complication following cleft palate repair1. Patients with ONF experience food reflux, articulation disorders, and impaired velopharyngeal function, significantly impacting their quality of life2,3,4. The rate of post-operative ONF ranges from 2.4% to 55% due to factors such as cleft width, Veau type, and surgical method5,6,7,8. Additionally, the recurrence rate after ONF repair is high, ranging from 0% to 43%9.
Several novel treatments have recently shown promise in the field of ONF, including different materials, drugs, and novel techniques10,11,12,13,14,15,16,17. Accurate evaluation of therapeutic effects is essential as it provides the basis for selecting and further developing ONF treatments. However, obtaining a valid assessment in the short term for therapeutic effects other than surgery is challenging, as the characteristics of ONFs vary among different patients. Therefore, establishing an ONF disease model is necessary to verify the effectiveness of these treatment methods.
For several decades, researchers have generated the oronasal fistula (ONF) model in various animal species, including rats18,19, piglets20,21, minipigs22, and dogs23, as these species possess a substantial hard palate suitable for surgical manipulation. However, mice have a genetic sequence and whole genome similar to that of humans, making them an important model for researching and developing new drugs24,25,26. Furthermore, mice offer little variation from batch to batch, making them a favorable choice for establishing the ONF model12,13,27.
However, the detailed steps for creating ONF were not described, and the stability of the ONF size was not taken into consideration. Additionally, the verification of ONF formation relied solely on observation28, without ensuring direct communication between the oral and nasal cavities. It was not demonstrated through other means, such as the mouse&#39;s loss of body weight due to difficulties in eating caused by the ONF. Furthermore, normal variation in wound size was not considered, which is crucial for studies on drugs or materials that promote or inhibit wound healing. Therefore, there is a strong need to establish a stable and validated ONF model.
The objective of this study was to develop a practical ONF model that addresses the aforementioned issues, with the hope that this protocol will serve as the foundation for future research on the mechanisms of palatal wound healing and novel treatments for ONF.

מחבר זרקור: חקירת ריפוי פצעים בעכברים מודלים של פיסטולות Oronasal 

הקמת מודל עכברי פיסטולה אורונזלית

Our research has focused on how to establish the stable and standardized mouse model of oronasal fistula. This protocol has also demonstrated the body weight changes, wound size changes, and the histologic features of the oral nasal fistula formation. The current experimental challenges of establishing oronasal fistula models are the mice mortality by suffocation or blood loss as well as the standardization of the wound size.Our protocol significantly reduces the amount of bleeding in mice during surgery relative to the traditional use of a biopsy punch. This reduces the risk of suffocation due to severe bleeding. Additionally, our experimental method is also simpler and less technically sensitive.Our future research aims to focus on observing the inflammatory response during oronasal fistula formation. We also plan on developing novel strategies to reduce the inflammatory response while promoting palatal wound healing to reduce the incidence of oronasal fistula.

כדי להעריך את ההיתכנות והיציבות של שיטה ניסיונית זו, בוצע אותו הליך על עשרה עכברים, ונעשו תצפיות לגבי תמותה, שינויים בגודל הפצע, משקל הגוף וניתוח היסטולוגי. העכברים הומתו ביום השביעי.
ההליך הציג שיעור תמותה נמוך. הצריבה האופטלמולוגית והנביט, המתוארים באיור 1A-C</stron...

Watch this Scientific Journal Video about Investigating Wound Healing in Mice Models of Oronasal Fistulas at JoVE.com

מאמר זה מתאר הליך שלב אחר שלב להקמת מודל עכברים עם פיסטולה אורונזאלית. הפיסטולה האורונזאלית נוצרה על ידי שימוש בצריבה אופתלמולוגית מחוממת כדי לפגוע בחלק קו האמצע של החיך הקשה, וכתוצאה מכך נוצר פתח בין חלל הפה והאף.

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used ...

המחקר שלנו התמקד כיצד לבסס את מודל העכבר היציב והסטנדרטי של פיסטולה אורונזאלית. פרוטוקול זה הדגים גם את השינויים במשקל הגוף, שינויים בגודל הפצע ואת המאפיינים ההיסטולוגיים של היווצרות פיסטולה באף הפה. האתגרים הניסיוניים הנוכחיים של הקמת מודלים של פיסטולה אורונזאלית הם תמותת עכברים מחנק או איבוד דם, כמו גם סטנדרטיזציה של גודל הפצע.הפרוטוקול שלנו מפחית משמעותית את כמות הדימום בעכברים במהלך הניתוח ביחס לשימוש המסורתי בניקוב ביופסיה. זה מקטין את הסיכון לחנק עקב דימום חמור. בנוסף, השיטה הניסיונית שלנו היא גם פשוטה יותר ורגישה פחות מבחינה טכנית.המחקר העתידי שלנו מתמקד בהתבוננות בתגובה הדלקתית במהלך היווצרות פיסטולה אורונזאלית. אנו מתכננים גם לפתח אסטרטגיות חדשניות להפחתת התגובה הדלקתית תוך קידום ריפוי פצעי החיך כדי להפחית את ההיארעות של פיסטולה אורונזאלית.

establishment-of-an-oronasal-fistula-mice-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment of an Oronasal Fistula Mice Model

817 Views.  Sichuan University. המחקר שלנו התמקד כיצד לבסס את מודל העכבר היציב והסטנדרטי של פיסטולה אורונזאלית. פרוטוקול זה הדגים גם את השינויים במשקל הגוף, שינויים בגודל הפצע ואת המאפיינים ההיסטולוגיים של היווצרות פיסטולה באף הפה. האתגרים הניסיוניים הנוכחיים של הקמת מודלים של פיסטולה אורונזאלית הם תמו...

Video: מחבר זרקור: חקירת ריפוי פצעים בעכברים מודלים של פיסטולות Oronasal 

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used to establish the oronasal fistula (ONF) model. To create the ONF, the mice were anesthetized, immobilized, and their hard palates were exposed. During the surgical procedure, a 2.0 x 1.5 mm full-thickness mucosal injury was induced in the midline of the hard palate using ophthalmologic cautery. It was crucial to control the size of the ONF and minimize bleeding in order to ensure the success of the experiment. Verification of the ONF model's effectiveness was conducted on the 7th-day post-operation, encompassing both anatomical and functional assessments. The presence of the nasal septum within the oral cavity and the outflow of sterile water from the nostrils upon injection into the oral cavity confirmed the successful establishment of the ONF model. The model demonstrated a practical and successful oronasal fistula, characterized by a low mortality rate, significant weight changes, and minimal variation in ONF size. Future studies may consider adopting this methodology to elucidate the mechanisms of palate wound healing and explore novel treatments for oronasal fistulas.

This article outlines a step-by-step procedure for establishing a mice model with an oronasal fistula. The oronasal fistula was created by employing heated ophthalmologic cautery to damage the midline portion of the hard palate, resulting in the formation of an opening between the oral and nasal cavities.

Development of a Mouse Model for Studying Oronasal Fistula Using Opthalmologic Cautery

Begin by securing an anesthetized female mouse to a foam board covered with sterile sheets. Then, carefully tape the mouse in a supine position to a surgical platform. Position two needles in front of the orbital airplane.Place two more needles behind it. Next, place a rubber band around the needles and cross the incisors to hold the mouth open. Use microsurgical tweezers to prop open the corners of the mouth.Proceed to retrieve the heated ophthalmologic cautery. Now position the cautery tip one millimeter from the midline intersection of the palate and first premolar to create a full thickness mucosal injury to the hard palate. Remove the cautery when the mucosa around the tip turns white.Heat the ophthalmologic cautery to 250 degrees Celsius in the germinator for 10 minutes. Then, place it on the hard palate and enlarge the wound around the edges. Finally, use microsurgical scissors to excise any excess denatured soft tissue surrounding the wound.Afterward, apply sterile cotton to stop bleeding and prevent inhalation asphyxiation in the mouse. Notable variability was observed in the size of the generated oral nasal fistula. The wound size showed a significant variation on the seventh day post-surgery.A significant reduction in the body weights of the mice was also observed on day seven, which is approximately 25%Histological analysis of the oral nasal fistula revealed a loss of hard palate mucosa, denuded bone, and oronasal fistula formation.