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In questo articolo

  • Riepilogo
  • Abstract
  • Introduzione
  • Protocollo
  • Risultati
  • Discussione
  • Divulgazioni
  • Riconoscimenti
  • Materiali
  • Riferimenti
  • Ristampe e Autorizzazioni

Riepilogo

L'obiettivo di questo protocollo è quello di caratterizzare un nuovo modello di neurodegenerazione glaucomatosa basato sulla cauterizzazione termica a 360° del plesso vascolare limbare, inducendo ipertensione oculare subacuta.

Abstract

Il glaucoma, la seconda causa di cecità in tutto il mondo, è un gruppo eterogeneo di disturbi oculari caratterizzati da danni strutturali al nervo ottico e degenerazione delle cellule gangliari retiniche (RGC), con conseguente disfunzione visiva interrompendo la trasmissione delle informazioni visive dall'occhio al cervello. L'elevata pressione intraoculare è il fattore di rischio più importante; Pertanto, diversi modelli di ipertensione oculare sono stati sviluppati nei roditori con approcci genetici o sperimentali per indagare le cause e gli effetti della malattia. Tra questi, sono stati segnalati alcuni limiti come l'invasività chirurgica, l'inadeguata valutazione funzionale, la necessità di una formazione approfondita e l'estensione altamente variabile del danno retinico. Il presente lavoro caratterizza un metodo semplice, a basso costo ed efficiente per indurre l'ipertensione oculare nei roditori, basato sulla cauterizzazione a bassa temperatura e a cerchio completo del plesso vascolare limbare, una componente importante del drenaggio dell'umore acqueo. Il nuovo modello fornisce un'ipertensione oculare subacuta tecnicamente facile, non invasiva e riproducibile, associata a RGC progressiva e degenerazione del nervo ottico, e un tasso di recupero clinico post-operatorio unico che consente studi funzionali in vivo con metodi sia elettrofisiologici che comportamentali.

Introduzione

La letteratura medica comprende il glaucoma come un gruppo eterogeneo di neuropatie ottiche caratterizzate da una progressiva degenerazione delle cellule gangliari retiniche (RGC), dendriti, soma e assoni, con conseguente coppettazione strutturale (scavo) del disco ottico e deterioramento funzionale del nervo ottico, che porta all'amaurosi nei casi non controllati interrompendo la trasmissione delle informazioni visive dall'occhio al cervello1. Il glaucoma è attualmente la causa più comune di cecità irreversibile in tutto il mondo, e si prevede che raggiungerà circa 111,8 milioni di persone nel 20402, influenzando così p....

Protocollo

Tutte le procedure sono state eseguite in conformità con la Dichiarazione per l'Uso degli Animali nella Ricerca Oftalmica e Visiva dell'Associazione per la Ricerca sulla Visione e l'Oftalmologia (ARVO) e approvate dal Comitato Etico per l'Uso degli Animali nella Sperimentazione Scientifica del Centro di Scienze della Salute dell'Università Federale di Rio de Janeiro (protocollo 083/17). Nel presente lavoro sono stati utilizzati ratti Lister Hooded di entrambi i sessi, di età compresa tra 2 e 3 mesi e del peso di 180-320 g. Tuttavia, la procedura può essere adattata a diversi ceppi di ratti di varie fasce d'età.

1. Chirurgia dell'ipert....

Risultati

Le variabili quantitative sono espresse come media ± errore standard della media (SEM). Fatta eccezione per il confronto delle dinamiche IOP tra OHT e gruppi di controllo (Figura 1F), l'analisi statistica è stata eseguita utilizzando l'ANOVA a due vie seguita dal test di confronto multiplo di Sidak. Un valore p < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.

La Figura 1 illustra le fasi chirurgiche del modello di cauteriz.......

Discussione

La cauterizzazione del plesso limbare (LPC) è un nuovo modello post-trabecolare con il vantaggio di colpire strutture vascolari facilmente accessibili che non richiedono la dissezione congiuntivale o tenone17,28. A differenza del modello di cauterizzazione delle vene a vortice, un rinomato modello OHT basato sulla compromissione chirurgica del drenaggio venoso coroideo, non si prevede che la congestione venosa influenzi l'aumento della IOP nel modello LPC, poich.......

Divulgazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Riconoscimenti

Ringraziamo i nostri tecnici di laboratorio José; Nilson dos Santos, Daianne Mandarino Torres, José Francisco Tibúrcio, Gildo Brito de Souza e Luciano Cavalcante Ferreira. Questa ricerca è stata finanziata da FAPERJ, CNPq e CAPES.

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Materiali

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetoneIsofar201Used for electron microscopy tissue preparation (step 5)
Active electrode for electroretinographyHansol Medical Co-Stainless steel needle 0.25 mm × 15 mm
AnestalconNovartis Biociências S/AMS-1.0068.1087Proxymetacaine hydrochloride 0.5%
Calcium chlorideVetec560Used for electron microscopy tissue preparation (step 5)
Cautery Low Temp Fine Tip 10/bxBovie Medical CorporationAA00Low-temperature ophthalmic cautery
CetaminSyntec do Brasil Ltda000200-3-000003Ketamine hydrochloride 10%
DAKODako North AmericaS3023Antifade mounting medium
DAPIThermo Fisher Scientific28718-90-3diamidino-2-phenylindole; blue fluorescent nuclear counterstain; emission at 452±3 nm
EcofilmCristália Produtos Químicos Farmacêuticos LtdaMS-1.0298.0487Carmellose sodium 0.5%
EPON ResinPolysciences, Inc.-Epoxy resin used for electron microscopy, composed of a mixture of four reagents: Poly/Bed 812 Resin (CAT#08791); DDSA - Dodecenylsuccinic Anhydride (CAT#00563); NMA - Nadic Methyl Anhydride (CAT#00886); DMP-30 - 2,4,6-tris(dimethylaminomethyl)phenol (CAT#00553)
GlutaraldehydeElectron Microscopy Sciences16110Used for electron microscopy tissue preparation (step 5)
HyabakUnião Química Farmacêutica Nacional S/AMS-8042140002Sodium hyaluronate 0.15%
Icare TonolabIcare Finland OyTV02 (model number)Rebound handheld tonometer
IgG donkey anti-mouse antibody + Alexa Fluor 555Thermo Fisher ScientificA31570Secondary antibody solution
LCD monitor 23 inchesSamsung Electronics Co. Ltd.S23B550Model LS23B550, for electroretinogram recording
LSM 510 MetaCarl Zeiss-Confocal epifluorescence microscope
MaxifloxCristália Produtos Químicos Farmacêuticos LtdaMS-1.0298.0489Ciprofloxacin 3.5 mg/g
MEB-9400KNihon Kohden Corporation-System for electroretinogram recording
monoclonal IgG1 mouse anti-Brn3aMilliporeSigmaMAB-1585Brn3a primary antibody solution
Neuropack Manager v08.33Nihon Kohden Corporation-Software for electroretinogram signal processing
OptomotryCerebralMechanics-System for optomotor response analysis
Osmium tetroxideElectron Microscopy Sciences19100Used for electron microscopy tissue preparation (step 5)
Potassium ferrocyanideElectron Microscopy Sciences20150Used for electron microscopy tissue preparation (step 5)
Reference and ground electrodes for electroretinographyChalgren Enterprises110-63Stainless steel needles 0.4 mm × 37 mm
Sodium cacodylate bufferElectron Microscopy Sciences12300Used for electron microscopy tissue preparation (step 5)
Ster MDUnião Química Farmacêutica Nacional S/AMS-1.0497.1287Prednisolone acetate 0.12%
TerolacCristália Produtos Químicos Farmacêuticos LtdaMS-1.0497.1286Ketorolac trometamol 0.5%
TerramicinaLaboratórios Pfizer LtdaMS-1.0216.0024Oxytetracycline hydrochloride 30 mg/g + polymyxin B 10,000 U/g
Tono-Pen XLReichert Technologies230635Digital applanation handheld tonometer
TO-PRO-3Thermo Fisher ScientificT3605Far red-fluorescent nuclear counterstain; emission at 661 nm
Triton X-100Sigma-Aldrich9036-19-5Non-ionic surfactant
Uranyl acetateElectron Microscopy Sciences22400Used for electron microscopy tissue preparation (step 5)
XilazinSyntec do Brasil Ltda7899Xylazine hydrochloride 2%
Carl Zeiss-Stereo microscope for surgery and retinal dissection

Riferimenti

  1. Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. The Pathophysiology and Treatment of Glaucoma A Review. JAMA. 311 (8), 1901-1911 (2014).
  2. Tham, Y. C., et al. Global prevalence of glaucoma ....

Ristampe e Autorizzazioni

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