Modello di aneurisma dell'aorta addominale del topo indotto dall'applicazione perivascolare dell'elastasi

Riepilogo

Il presente protocollo descrive un metodo chirurgico standardizzato per il modello AAA indotto da elastasi attraverso l'applicazione diretta di elastasi all'avventizia dell'aorta addominale infrarenale nei topi.

Abstract

L'aneurisma dell'aorta addominale (AAA), sebbene principalmente asintomatico, è potenzialmente pericoloso per la vita in quanto la rottura di AAA di solito ha un esito devastante. Attualmente, ci sono diversi modelli sperimentali distinti di AAA, ognuno dei quali enfatizza un aspetto diverso nella patogenesi di AAA. Il modello AAA indotto da elastasi è il secondo modello AAA di roditore più utilizzato. Questo modello prevede l'infusione diretta o l'applicazione di elastasi pancreatica suina (PPE) al segmento infrarenale dell'aorta. A causa di sfide tecniche, la maggior parte dei modelli AAA indotti da elastasi al giorno d'oggi viene eseguita con l'applicazione esterna piuttosto che con un'infusione intraluminale di DPI. L'infiltrazione di elastasi causerà la degradazione delle lamelle elastiche negli strati mediali, con conseguente perdita dell'integrità della parete aortica e successiva dilatazione dell'aorta addominale. Tuttavia, uno svantaggio del modello AAA indotto da elastasi è l'inevitabile variazione di come viene eseguito l'intervento chirurgico. In particolare, la tecnica chirurgica di isolamento del segmento infrarenale dell'aorta, il materiale utilizzato per l'avvolgimento dell'aorta e l'incubazione dei DPI, l'attività enzimatica dei DPI e la durata temporale dell'applicazione dei DPI possono essere tutti determinanti importanti che influenzano l'eventuale tasso di formazione dell'AAA e il diametro dell'aneurisma. In particolare, la differenza in questi fattori da diversi studi sull'AAA può portare a problemi di riproducibilità. Questo articolo descrive un processo chirurgico dettagliato del modello AAA indotto da elastasi attraverso l'applicazione diretta di DPI all'avventizia dell'aorta addominale infrarenale nel topo. Seguendo questa procedura, è possibile ottenere un tasso di formazione AAA stabile di circa l'80% nei topi maschi e femmine. La coerenza e la riproducibilità degli studi AAA che utilizzano un modello AAA indotto dall'elastasi possono essere significativamente migliorate stabilendo una procedura chirurgica standard.

Introduzione

L'aneurisma dell'aorta addominale (AAA) è definito come una dilatazione segmentale dell'aorta addominale con un aumento di almeno il 50% del diametro del vaso¹. L'AAA è potenzialmente fatale, in quanto la rottura può comportare un tasso di mortalità estremamente elevato, anche con l'intervento ^2,3,4. È stato riferito che aAA è responsabile di circa 13.000 morti all'anno negli Stati Uniti, il che lo rende la^10a causa di morte ^1,5.

La patogenesi dell'AAA non....

Protocollo

I protocolli sugli animali sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università del Michigan (PRO00010092). Per gli esperimenti sono stati utilizzati topi maschi e femmine C57BL / 6J wild-type (WT), a circa 7 settimane di età.

1. Preparazione animale

1. Nutrire i topi con la dieta standard chow (vedi Tabella dei materiali) prima e dopo l'intervento chirurgico.
   NOTA: È possibile utilizzare diversi ceppi ed età dei topi. Tuttavia, si raccomanda un'età compresa tra 5,5 e 12 settimane per raggiungere il tasso di incidenza massimo.
2. Per ogni topo, s....

Risultati

Un totale di ventitré topi wild-type (WT) di 7 settimane, tra cui 12 femmine e 11 maschi, sono stati operati seguendo il protocollo presentato. Il tasso di sopravvivenza è stato del 100% (mortalità chirurgica esclusa). Il diametro massimo dell'aorta addominale è stato misurato da una pinza.

L'AAA è stato definito come dilatazione dell'aorta addominale con un aumento del diametro del vaso del 50%. Pertanto, un aumento del 50% del diametro massimo dell'aorta addominale è stato selezionato .......

Discussione

Il modello AAA indotto da elastasi è stato riportato per la prima volta da Anidjar et al. usando ratti nel 1990¹⁷. Una varietà di versioni modificate sono state introdotte negli ultimi trent'anni, insieme a un significativo miglioramento delle tecniche chirurgiche 19,20,21,22. Centinaia di istituti utilizzano modelli AAA indotti da elastasi come secondo modello sperime.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
6-0 non-absorbable monofilament suture	Pro Advantage	P420697
Carprofen	Zoetis Inc.	NDC: 54771-8507
Chow Diet	LabDiet	3005659-220	PicoLab 5L0D
Cotton Applicator	Dynarex	4303
Cotton Pad	Rael	UPC: 810027130969
GraphPad Prism 8	GraphPad Software Inc.		Version 8.4.3
Grarfe Forceps	Fine Science Tools	11051-10
Halsted Mosquito Hemostats	Fine Science Tools	13009-12
Ketamine	Par Pharmaceutical	NDC: 42023-0115-10
Nitrile gloves	Fisherbrand	19-130-1597
Penicillin-Streptomycin	Thermo Fisher	15140122
Porcine pancreatic elastase	Sigma-Aldrich	E1250-100MG
Scissors	Fine Science Tools	14068-12
Sterile 0.9% saline solution	Baxter	2B1324X
Xylazine	Akorn	NDC: 59399-110-20