Prelievo sequenziale di sangue dalla vena cava inferiore seguito da vena porta per valutare i metaboliti microbici intestinali nei topi

Riepilogo

Il protocollo dimostra un metodo per raccogliere in sequenza il sangue dalle vene porta e dalla vena cava inferiore dai topi per valutare la produzione e l'assorbimento dei metaboliti microbici intestinali.

Abstract

È noto che i prodotti microbici intestinali agiscono sia localmente all'interno dell'intestino che vengono assorbiti in circolo, dove i loro effetti possono estendersi a numerosi sistemi di organi distanti. Gli acidi grassi a catena corta (SCFA) sono una classe di metaboliti prodotti dai microbi intestinali durante la fermentazione di fibre alimentari indigeribili. Ora sono riconosciuti come importanti contributori al modo in cui il microbioma intestinale influenza i sistemi di organi extra-intestinali attraverso gli assi intestino-polmone, intestino-cervello e altri assi intestino-organo in tutto l'ospite. Gli SCFA vengono assorbiti dal colon, attraverso il tessuto intestinale, nella vena porta (PV). Passano quindi attraverso il fegato e vengono consumati in vari organi come il cervello, i muscoli, il tessuto adiposo e i polmoni. Gli SCFA sono più facilmente misurabili nel materiale fecale espulso, tuttavia, misurazioni più accurate sono state ottenute dal contenuto fecale intra-colon. Qui proponiamo che il campionamento del PV e del plasma circolante sistemico di un singolo soggetto possa essere preferibile per studiare l'assorbimento, il trasporto e i livelli sistemici di SCFA nei topi. Presentiamo una nuova tecnica per un efficiente prelievo di sangue dalla PV e dalla vena cava inferiore (IVC) che consente la raccolta di volumi relativamente grandi di sangue dalla circolazione portale e sistemica. Ciò si ottiene legando il PV, consentendo così la dilatazione o l'allargamento del PV mentre si riempie dalle vene mesenteriche che drenano in esso. Utilizzando questo metodo, siamo stati in grado di migliorare il tasso di raccolta riuscita e la quantità totale di sangue raccolto (fino a 0,3 ml da IVC e 0,5 ml da PV).

Introduzione

Gli acidi grassi a catena corta (SCFA) sono una delle principali classi di metaboliti prodotti dal microbiota intestinale. Il loro ruolo critico nell'interazione tra il microbioma intestinale e altri organi distanti¹ è stato supportato da ricerche che descrivono come modulano l'infiammazione, segnalano attraverso recettori dedicati e fungono da substrati nel metabolismo cellulare ^2,3,4,5. Recenti lavori del nostro gruppo hanno proposto che gli SCFA siano regolatori infiammatori chiave....

Protocollo

Tutte le fasi di questa procedura di non sopravvivenza sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università della California di San Francisco. Il sesso e il ceppo di topo utilizzati erano topi maschi C57BL/6J (del peso di 25-35 g e di età compresa tra 12 e 15 settimane). Possono essere utilizzati anche ceppi di topi femminili e/o altri ceppi di topi standard.

1. Anestesia

1. Pulire la metà inferiore dell'addome del topo con tamponi di etanolo al 70%. Somministrare l'anestesia praticando un'iniezione intraperitoneale di tribromoetanolo (250-400....

Discussione

Questo articolo descrive un metodo innovativo in vivo per la raccolta quasi simultanea di campioni di sangue in sequenza dall'IVC e dal PV nello stesso topo sperimentale. Questo metodo è utile per misurare i livelli di prodotti generati dal microbiota intestinale, come gli SCFA, che transitano attraverso la circolazione portale. Il volume massimo medio di sangue che può essere raccolto durante una procedura terminale nei topi (del peso di 25-30 g) è di circa 1 ml/topo, che a .......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin)	Sigma Aldrich	T48402-25G	Anesthetic agent
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Analgesic agent
Dressing Forceps	Miltex	6-100	Dissection
Graefe Forceps	Roboz	RS-5136	Dissection
Hepatin sodium 1000 USP units/mL	Hikma	NDC 0641-0391-12	Blood sample syringes/tubes heparinization
Prolene 7-0	Ethicon	8696G	Portal vein ligature
Scissors	F.S.T	14058-11	Dissection
Student Halsted-Mosquito Hemostats	F.S.T	91308-12	Dissection
Surgical tape	3M Transpore	1527-1	Mouse limbs fixation
U-100 Insulin Syringe 28G1/2	EXEL	26027	Blood sample collection