Iniziare posizionando gli strumenti chirurgici sterili sul banco di lavoro. Per fissare il topo anestetizzato nel telaio stereotassico, mescolare gli incisivi superiori con una pinza nasale e stabilizzare la testa con due barre auricolari. Usando le forbici per gli occhi, praticare un'incisione di 0,5 centimetri sul cuoio capelluto per esporre il cranio.
Con un batuffolo di cotone imbevuto di perossido di idrogeno al 3%, strofina il cranio esposto per rimuovere il periostio. Lasciare asciugare il cranio. Fissare il trapano allo strumento stereotassico e regolare le manopole del braccio stereotassico.
Con l'aiuto di una lente d'ingrandimento, posizionare la punta del trapano con precisione sulla bregma. Registrare il valore dell'asse Z alla bregma utilizzando il display digitale LCD. A questo punto, posizionare la punta del trapano in corrispondenza dell'espressione lambda e registrare il valore dell'asse Z.
Regolare il morsetto per il naso per ridurre al minimo la differenza tra i due valori Z. Posizionare il trapano alle coordinate meno 5,2 per X e più 0,8 per Y per misurare il valore dell'asse Z nella direzione ventrale dorsale. Riposizionare il trapano alle coordinate meno 5,2 per X meno 0,8 per Y e misurare nuovamente il valore dell'asse Z.
Regolare le barre auricolari su una scala specificata. Posizionare il trapano sulla bregma e impostare tre coordinate sul display digitale LCD a zero. Utilizzando le coordinate di riferimento, posizionare il trapano sopra la regione di interesse.
Avviare il trapano e abbassarlo gradualmente utilizzando il braccio verticale fino a quando il trapano non penetra nel cranio. Eliminare detriti e sangue utilizzando tamponi di cotone. Aggiungere 25 microlitri di tampone di caricamento SDS-PAGE contenente blu di bromofenolo e 50 microlitri di acqua a doppia distillazione in una provetta da 200 microlitri.
Copri la finestra cranica con un batuffolo di cotone inumidito con soluzione salina. Caricare 0,3 microlitri di colorante nella micro-siringa. Collegare la siringa e il microiniettore stereotassico motorizzato al braccio stereotassico.
Posizionare la punta della siringa sul bregma e impostare le coordinate su zero sul display digitale LCD. In base alle coordinate di riferimento, regolare l'ago nella regione di interesse. Impostare la velocità dell'iniettore su 0,1 microlitri al minuto e avviare il microiniettore motorizzato, erogando 0,3 microlitri di colorante nella regione target.
Dopo 10 minuti, estrarre lentamente l'iniettore.
