Il protocollo che segue descrive un sistema che funziona bene in 20-35 g topi. Il metodo può essere facilmente adattabile a topi grandi o più piccoli semplicemente modificando la dimensione del catetere. Tutti i protocolli di animali sono stati approvati dalla Università cura e l&#39;uso degli animali Comitato Johns Hopkins. 1. Lung instillazione <ol><li> Selezionare un lungo 20 g cannula commerciale un pollice endovenosa da utilizzare per l&#39;intubazione. </li><li> Modificare il catetere punta piegatura manualmente per generare una leggera curvatura all&#39;estremità come illustrato in figura 1. </li><li> Anestetizzare il mouse con una miscela di ketamina (100 mg / kg) e xilazina (15 mg / kg) iniettata IP, e confermare anestesia dall&#39;assenza di movimento riflesso. Applicare una pomata veterinaria sugli occhi subito dopo l&#39;anestesia. Subito dopo l&#39;anestesia applicano unguento veterinario per gli occhi e dare carprofen (5-10 mg / kg SQ) per l&#39;analgesia post-chirurgico e instillazione. </li><li> Posizionare il mouse in posizione supina su una piattaforma inclinata. Come mostrato in figura 2, un grande raccoglitore ufficio con anse sutura registrato on funziona perfettamente. </li><li> Radere la parte ventrale del collo e pulire e disinfettare la zona del collo con il 70% di alcol. Con i nuovi guanti senza senza lattice e a polvere, utilizzare strumenti chirurgici disinfettati con il 70% di alcol. </li><li> Utilizzo di forbici affilate fare una piccola incisione chirurgica nel collo circa 12 mm sotto l&#39;incisivo inferiore. </li><li> Con una pinza tirare delicatamente la pelle del collo caudale fino a quando la parete ventrale della trachea può essere visto. </li><li> Ritrarre delicatamente la lingua e inserire la cannula con la punta piegata inclinato verso la superficie ventrale del mouse. Come in 1.4, tirare delicatamente sulla pelle del collo, e inserire la cannula nella trachea. NOTA: Con una poca pratica, il catetere sarà visibile muoversi lungo la trachea. Se va nell&#39;esofago, allora non vi sarà alcuna segnalazione visiva del movimento del catetere. Nessun incisionisono realizzati nella trachea. </li><li> Una volta che il catetere è visto nella trachea del collo, avanzato è circa 5 mm di essere affidabile superato le corde vocali ma ancora ben al di sopra della carena. </li><li> Preparati a infondere fino a 50 ml di liquido iniettando attraverso il catetere con un puntale caricamento del gel. Posizionare la punta nel mozzo luer, ma prima di iniettare look particolarmente per osservare il movimento del fluido in sincrono con punta respirazione del mouse. Poi iniettare il instillate. </li><li> Con una siringa da 1 ml, immediatamente fare una relativamente rapida inflazione di 0,6 ml di aria nei polmoni attraverso il catetere per distribuire il liquido profondità nei polmoni. Rimuovere la cannula. </li><li> Rimuovere la cannula. </li><li> Utilizzare una piccola quantità di cianoacrilato per chiudere la piccola ferita chirurgica secondo le istruzioni foglietto illustrativo Vetbond. Mettere i topi in gabbie individuali e monitorare visivamente fino a quando si svegliano e si comportano normalmente, senza alcuna indicazione di discomfort. </li></ol> 2. Lung Fissazione NOTA: Una volta che tutte le procedure sperimentali sono fatte in un mouse, i polmoni per essere pronto per l&#39;elaborazione istologica da fissazione con formaldeide (o qualsiasi altro fissativo desiderato). <ol><li> Sacrifica il mouse con una procedura accettabile IACUC. Per il mouse rappresentante mostrato nel video, viene utilizzato dislocazione cervicale di un mouse anestetizzato. </li><li> Eseguire una tracheostomia (se non già fatto) chirurgicamente esponendo il lato ventrale della trachea, facendo un piccolo taglio, e l&#39;inserimento di uno stub punta dell&#39;ago 18 G nella trachea, e legandola con filo. </li><li> Aprire con cautela il torace con una incisione mediana, tagliare via il diaframma, e rimuovere le pareti laterali del torace per esporre i polmoni. </li><li> Collegare l&#39;estremità luer dell&#39;ago ad un serbatoio su un supporto ad anello contenente formaldeide. Vedere la Figura 3. </li><li> Impostare la superficie superiore della formaldeide 25 cm sopra il livello del mouse. Vedere Figura 3. Successiva assicurarsi che non vi sia aria nel tubo di fissazione eseguendo liquido verso la fine di un rubinetto. Collegare l&#39;estremità luer della cannula tracheale al tubo serbatoio. Aprire il rubinetto per gonfiare i polmoni con la formaldeide. Lasciare i polmoni sotto pressione per almeno 20 min. </li><li> Aprire il rubinetto per gonfiare i polmoni con la formaldeide. Lasciare i polmoni sotto pressione per almeno 20 min. </li><li> Avanti, legare la trachea oltre la fine dell&#39;ago stub. Essa può contribuire a tirare indietro lentamente sul ferro per esporre più della trachea uncannulated. Quando legato in modo sicuro, togliere il rubinetto. </li><li> Sezionare con cautela i polmoni. </li><li> Posizionare i polmoni di formaldeide durante la notte. Tempi più lunghi vanno bene, e alcune macchie o procedure possono specificare orari specifici. Anche altri fissativi liquidi, come z-correzione può essere utilizzato per l&#39;instillazione e l&#39;immersione. </li><li> Prima di ulteriori elaborazioni istologico, misurareil volume polmonare fissa come descritto in seguito. </li></ol> 3. Misurazione del volume polmonare fisso <ol><li> Misurare il volume polmonare utilizzando il principio di Archimede, come illustrato nella figura 4. Rimuovere il polmone fissato dalla formaldeide e sezionare il cuore e qualsiasi altro tessuto non-polmonare. </li><li> Utilizzare un semplice dispositivo di supporto filo casalingo costruito in precedenza che viene utilizzato per mantenere i polmoni completamente sott&#39;acqua. NOTA: Questo dispositivo deve essere reso compatibile con qualunque equilibrio viene utilizzato. Un tipico dispositivo di figura 5 è costituito da una pipetta in plastica e sottile (20 G) fili. Questo sistema funziona bene con la bilancia utilizzata nel video, ma potrebbe essere facilmente adattato alla maggior bilance da laboratorio. </li><li> Posizionare un becher con ≈200 ml di acqua sulla bilancia e tarare con la gabbia di supporto in posto in acqua. Vedere Figura 6 Rimuovere la gabbia metallica.; collocare il polmone sulla superficie dell&#39;acqua e premere sott&#39;acquacon la gabbia. </li><li> Registrare il peso sulla bilancia. Questo numero riflette il volume di acqua spostata ed è quindi una misura diretta del volume polmonare. Prestare attenzione per assicurarsi che il polmone o di sutura o di qualsiasi parte del gabbietta non toccare i lati o fondo del bicchiere. </li><li> Per la precisione, ripetere questa misura. Rimuovere il polmone dall&#39;acqua, e secco su un tessuto. Tarare di nuovo il bicchiere con gabbia in posizione e ripetere la misurazione del volume polmonare. Le due misure di volume devono quindi essere mediate. NOTA: Se i polmoni vengono lasciati in formalina per più di una settimana, l&#39;aria nei polmoni sarà dissolto nel liquido. Quando questo accade, il polmone affonderà, quindi non è più necessario utilizzare un qualsiasi dispositivo come in figura 5 per mantenere il polmone sommerso. In tal caso, il volume può essere misurata semplicemente tenendo il polmone da una delle stringhe sutura finché non è completamente sommerso come illustrato nella figura 4. </li></ol>

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Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2013).</li><li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> J Appl Physiol. 106, 984-987 (2009).</li><li>Lum, H., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+10%+formalin+fixation+on+fixed+lung+volume+and+lung+tissue+shrinkage.">Effects of 10% formalin fixation on fixed lung volume and lung tissue shrinkage.</a> American Reveiw of Respiratory Diseases. 132, 1078-1083 (1985).</li><li>Bishai, J., Fields, M. 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Le procedure qui descritte hanno diversi vantaggi. Innanzitutto l&#39;attrezzatura necessaria è semplice e poco costoso. In secondo luogo, l&#39;intubazione può essere rapidamente fatto con pochi errori. In terzo luogo, la possibilità di fissare i polmoni a pressione costante, e quindi misurare il volume polmonare numeri consente un&#39;adeguata quantificazione delle strutture o cellule nel polmone 10. Un possibile inconveniente: l&#39;intubazione è la chirurgia minore. Ciò p...

Per una serie di ragioni, cancro polmonare non è stata ampiamente studiata nel topo. Una ragione di ciò è che l&#39;accesso al polmone in vivo è molto difficile, e l&#39;analisi quantitativa dei polmoni fissi non viene comunemente fatto. I metodi descritti in questo documento sono stati progettati per porre rimedio a questa situazione. Gli obiettivi sono qui per descrivere i metodi semplici che sarà di grande aiuto nella messa a punto e l&#39;analisi dei polmoni del mouse con cancro ai polmoni o altre patologie. Anche se nessuno di questi approcci sono del tutto nuova, che non sono state presentate insieme come metodi autonomi in maniera semplificata come descritto qui. Ci sono stati una serie di manoscritti che sono descritti i metodi per l&#39;intubazione del polmone del mouse principalmente al fine di fare della funzione polmonare di ripetizione o lavaggio broncoalveolare nei singoli topi in studi longitudinali. Dato che la carta originale, ci sono stati diversi altri giornali che hanno descritto i diversi approcci per protocolli d&#39;intesae intubazione 1 -9. Mentre tutti questi metodi possono essere usati con successo, di solito richiedono un notevole addestramento, e non sono spesso senza un tasso di fallimento non banale. Inoltre, al fine di effettuare misure di funzionalità polmonare, la cannula deve misura trachea abbastanza saldamente in modo che non ci siano perdite di aria. Tuttavia, un altro uso pratico per intubazione è quello di fornire agenti specifici (le cellule del cancro o altri insulti) o di farmaci terapeutici direttamente al polmone. Tale procedura non richiede una cannula aderente né sofisticate apparecchiature di funzionalità polmonare. La caratteristica innovativa di questo metodo qui illustrato prevede una procedura chirurgica minore che consente intubazione senza possibilità di cannula entrare nell&#39;esofago. Questo semplice approccio consente intubazione di successo con relativamente poca formazione o esperienza. Fino a 30 topi / ora possono essere trattati con questo approccio con un tasso di fallimento si avvicina allo zero. Una volta che tegli topi sono pronti per essere sacrificato, i polmoni feriti o cancerose possono poi essere rimossi per istologico e l&#39;analisi patologica. Tuttavia, al fine di quantificare correttamente eventuali variabili istologiche per il confronto con altre polmoni, è essenziale standardizzare le procedure di fissaggio e quantificare correttamente il volume polmonare fisso 10. Questo documento descrive in dettaglio le semplici procedure che consentano procedure di fissaggio standardizzati, nonché un metodo per misurare il volume polmonare fisso. Il volume è una metrica essenziale nella quantificazione della istologia, poiché altrimenti la determinazione del volume, solo densità relative possono essere misurati 10. Una volta che il volume polmonare è noto, tuttavia, le misurazioni assolute di cellule e di altre misure strutturali nel polmone possono essere quantificati.

<table><tbody><tr><td>Laboratory Balance</td><td>Ohaus</td><td>Adventurer Pro Model AV 313&amp;nbsp;</td><td>Other balances can be used if they have a range of 1-300 g</td></tr><tr><td>20 g Luer intravenous catheter</td><td>Insylte</td><td></td><td>Several other possible vendors, &lt;em&gt;e.g.&lt;/em&gt;, Jelco Optiva</td></tr><tr><td>500 ml laboratory bottle</td><td>Various</td><td></td><td>Several other possible vendors</td></tr></tbody></table>

instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research

La capacità di infondere agenti dal vivo, cellule o sostanze chimiche direttamente nel polmone senza ferire o uccidere i topi è uno strumento importante per la ricerca sul cancro al polmone. Anche se ci sono una serie di metodi che sono stati pubblicati che mostra come intubare topi per le misure di funzionalità polmonare, nessuno è senza i potenziali problemi per una rapida instillazione tracheale in grandi coorti di topi. Nel presente lavoro, un metodo semplice e rapido è descritto che consente un investigatore effettuare tali instillazioni in modo efficiente. Il metodo non richiede utensili speciali o illuminazione e può essere appreso con molto poca pratica. Si tratta anestetizzante un mouse, una piccola incisione nel collo di visualizzare la trachea, e quindi inserendo direttamente un catetere endovenoso. La piccola incisione viene rapidamente chiuso con tessuto adesivo, ei topi sono autorizzati a recuperare. Uno studente qualificato o tecnico può fare instillazioni ad un tasso medio di 2 min / mouse. Una volta che tegli cancro è stabilito, vi è spesso una necessità di un&#39;analisi istologica quantitativa dei polmoni. Tradizionalmente patologi di solito non si preoccupano di standardizzare inflazione polmone durante la fissazione, e le analisi si basano spesso su un sistema di punteggio che può essere molto soggettiva. Mentre questo può talvolta essere sufficientemente adeguata stime grossolane delle dimensioni di un tumore del polmone, qualsiasi corretta quantificazione stereologica struttura polmone o cellule richiede una procedura di fissazione riproducibile e la successiva volume polmonare. Qui si descrive semplici procedure affidabili per entrambi, che fissa i polmoni sotto pressione e poi misurare con precisione il volume polmonare fisso. L&#39;unico requisito è una bilancia da laboratorio che è accurato in un range di 1 mg-300 g. Le procedure qui presentate quindi potrebbero migliorare notevolmente la capacità di creare, trattare e analizzare tumori polmonari nei topi.

Il procedimento descritto nel primo protocollo non di per sé portare ad alcun risultato generalizzati. Esso descrive solo un mezzo molto affidabili per infondere sostanze direttamente nella trachea. Figura 7 mostra un esempio di un polmone in cui è stato instillato trypan blu con il metodo qui descritto. Vi è un&#39;ampia distribuzione del colorante, simile a quanto già visto con altri coloranti o traccianti forniti direttamente in trachea o topi 11,12. Abbiamo usato questo metodo per for...

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Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

L&#39;obiettivo di questo lavoro è quello di descrivere i metodi semplici che sarà di grande aiuto nella messa a punto e l&#39;analisi dei polmoni del mouse con cancro ai polmoni o altre patologie. Vi presentiamo 3 protocolli modo semplice e affidabile per effettuare instillazioni polmone, la fissazione, e misurazioni del volume polmonare.

Instillazione e fissaggio Metodi utili in mouse Lung Cancer Research

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

28.3K Views.  Johns Hopkins University.  L'obiettivo di questo lavoro è quello di descrivere i metodi semplici che sarà di grande aiuto nella messa a punto e l'analisi dei polmoni del mouse con cancro ai polmoni o altre patologie. Vi presentiamo 3 protocolli modo semplice e affidabile per effettuare instillazioni polmone, la fissazione, e misurazioni del volume polmonare. 

Video: Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of micrometastases by radiologic imaging and the success in their therapeutic eradication remain limited.
While animal models have proven to be invaluable tools for cancer research1, the monitoring/visualization of micrometastases remains a challenge and inaccurate evaluation of metastatic spread in preclinical studies potentially leads to disappointing results in clinical trials2. Consequently, there is great interest in refining the methods to finally allow reproducible and reliable detection of metastases down to the single cell level in normal tissue. The main focus therefore is on techniques, which allow the detection of tumor cells in vivo, like micro-computer tomography (micro-CT), positron emission tomography (PET), bioluminescence or fluorescence imaging3,4. We are currently optimizing these techniques for in vivo monitoring of primary tumor growth and metastasis in different osteosarcoma models. Some of these techniques can also be used for ex vivo analysis of metastasis beside classical methods like qPCR5, FACS6 or different types of histological staining. As a benchmark, we have established in the present study the stable transfection or transduction of tumor cells with the lacZ gene encoding the bacterial enzyme &beta;-galactosidase that metabolizes the chromogenic substrate 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-galactopyranoside (X-Gal) to an insoluble indigo blue dye7 and allows highly sensitive and selective histochemical blue staining of tumor cells in mouse tissue ex vivo down to the single cell level as shown here. This is a low-cost and not equipment-intensive tool, which allows precise validation of metastasis8 in studies assessing new anticancer therapies9-11. A limiting factor of X-gal staining is the low contrast to e.g. blood-related red staining of well vascularized tissues. In lung tissue this problem can be solved by in-situ lung perfusion, a technique that was recently established by Borsig et al.12 who perfused the lungs of mice under anesthesia to clear them from blood and to fix and embed them in-situ under inflation through the trachea. This method prevents also the collapse of the lung and thereby maintains the morphology of functional lung alveoli, which improves the quality of the tissue for histological analysis. In the present study, we describe a new protocol, which takes advantage of a combination of X-gal staining of lacZ-expressing tumor cells and in-situ perfusion and fixation of lung tissue. This refined protocol allows high-sensitivity detection of single metastatic cells in the lung and enabled us in a recent study to detect "dormant" lung micrometastases in a mouse model13, which was originally described to be non-metastatic14.

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

The novel protocol reported in the present study allows selective detection of lung metastases at single cell resolution in mice by combined in-situ lung perfusion and fixation and X-Gal staining of lacZ-tagged tumor cells.

Una migliore visualizzazione delle metastasi polmonari a risoluzione singola cella in Mouse di combinata<em&gt; In-situ</emPerfusione&gt; del tessuto polmonare e X-Gal colorazione del<em&gt; LacZ</em&gt;-Tagged cellule tumorali

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

Ricerca

Medicina

Perfusion and Inflation of the Mouse Lung for Tumor Histology

The ability to evaluate lung histology is critical for the fields of lung cancer research and cancer metastasis. It is equally important to perform necropsies rapidly and efficiently from studies without sacrificing the quality of the tissues procured. The goal of this protocol is to present a method to rapidly perfuse, inflate, and fix mouse lungs for downstream histological analysis. This method does not standardize lung inflation; thus, it does not require any special procedures or equipment and instead simply instills fixative directly through the trachea following perfusion through the heart. This allows for sufficient estimation of tumor size, histology, and scoring. This also allows for the collection of frozen tissue prior to lung tissue fixation. This method is limited in that it does not allow for later morphometric quantification of the lung; however, it is more than sufficient for lung tumor analysis from genetically engineered mouse models (GEMMs), syngeneic models, as well as xenograft tumor and metastasis studies.

The purpose of this method is to present a simple and efficient method for the perfusion, inflation, and fixation of mouse lungs for the examination of lung tumor pathology and evaluation of metastases to the lung.

Perfusione e inflazione del polmone del topo per l'istologia tumorale

The ability to evaluate lung histology is critical for the fields of lung cancer research and cancer metastasis. It is equally important to perform ...

Ricerca sul cancro

Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung

Intratracheal instillations deliver solutes directly into the lungs. This procedure targets the delivery of the instillate into the distal regions of the lung, and is therefore often incorporated in studies aimed at studying alveoli. We provide a detailed survival protocol for performing intratracheal instillations in mice. Using this approach, one can target delivery of test solutes or solids (such as lung therapeutics, surfactants, viruses, and small oligonucleotides) into the distal lung. Tracheal instillations may be the preferred methodology, over inhalation protocols that may primarily target the upper respiratory tract and possibly expose the investigator to potentially hazardous substances. Additionally, in using the tracheal instillation protocol, animals can fully recover from the non-invasive procedure. This allows for making subsequent physiological measurements on test animals, or reinstallation using the same animal. The amount of instillate introduced into the lung must be carefully determined and osmotically balanced to ensure animal recovery. Typically, 30-75 &mu;L instillate volume can be introduced into mouse lung.

Intratracheal instillations deliver solutes directly into the lungs. This procedure targets the delivery of the instillate into the distal regions of the lung, and is therefore often incorporated in studies aimed at studying alveoli. We provide a detailed survival protocol for performing intratracheal instillations in mice.

Diretta instillazione tracheale di soluti in polmone mouse

Intratracheal instillations deliver solutes directly into the lungs.  This procedure targets the delivery of the instillate into the distal regions of the ...

Biologia

Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis. Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or prevention are lacking. We report a method for the establishment of pulmonary metastases in mice, useful for the study of this phenomenon. Tail vein injection of B57BL/6J mice with B16-BL6 is among the most used models for melanoma metastases. Some of the circulating tumor cells establish themselves in the lungs of the mouse, creating "experimental" metastatic foci. With this model it is possible to measure the relative effects of therapeutic agents on the development of cancer metastasis. The difference in enumerated lung foci between treated and untreated mice indicates the efficacy of metastases neutralization. However, prior to the investigation of a therapeutic agent, it is necessary to determine an optimal number of injected B16-BL6 cells for the quantitative analysis of metastatic foci. Injection of too many cells may result in an overabundance of metastatic foci, impairing proper quantification and overwhelming the effects of anti-cancer therapies, while injection of too few cells will hinder the comparison between treated and controls.

Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

Iniezione di cellule singenici del topo melanoma per determinare il loro potenziale metastatico nei polmoni

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis.  Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or ...

Pre-Conditioning the Airways of Mice with Bleomycin Increases the Efficiency of Orthotopic Lung Cancer Cell Engraftment

Lung cancer is a deadly treatment refractory disease that is biologically heterogeneous. To understand and effectively treat the full clinical spectrum of thoracic malignancies, additional animal models that can recapitulate diverse human lung cancer subtypes and stages are needed. Allograft or xenograft models are versatile and enable the quantification of tumorigenic capacity in vivo, using malignant cells of either murine or human origin. However, previously described methods of lung cancer cell engraftment have been performed in non-physiological sites, such as the flank of mice, due to the inefficiency of orthotopic transplantation of cells into the lungs. In this study, we describe a method to enhance orthotopic lung cancer cell engraftment by pre-conditioning the airways of mice with the fibrosis inducing agent bleomycin. As a proof-of-concept experiment, we applied this approach to engraft tumor cells of the lung adenocarcinoma subtype, obtained from either mouse or human sources, into various strains of mice. We demonstrate that injuring the airways with bleomycin prior to tumor cell injection increases the engraftment of tumor cells from 0-17% to 71-100%. Significantly, this method enhanced lung tumor incidence and subsequent outgrowth using different models and mouse strains. In addition, engrafted lung cancer cells disseminate from the lungs into relevant distant organs. Thus, we provide a protocol that can be used to establish and maintain new orthotopic models of lung cancer with limiting amounts of cells or biospecimen and to quantitatively assess the tumorigenic capacity of lung cancer cells in physiologically relevant settings.

We describe a method to significantly enhance orthotopic engraftment of lung cancer cells into the murine lungs by pre-conditioning the airways with injury. This approach may also be applied to study stromal interactions within the lung microenvironment, metastatic dissemination, lung cancer co-morbidities, and to more efficiently generate patient derived xenografts.

Pre-condizionamento delle vie aeree dei topi con bleomicina aumenta l'efficienza di Orthotopic del polmone cancro Engraftment delle cellule

Lung cancer is a deadly treatment refractory disease that is biologically heterogeneous. To understand and effectively treat the full clinical spectrum of ...

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung fixation to produce reliable histological specimens of the lung. Due to the nature of the lung&rsquo;s structural composition, which consists largely of air and tissue, there is a risk that it collapses or deflates during the fixation process. Various lung fixation methods exist, each of which has its own advantages and disadvantages. The lung fixation method presented here utilizes constant pressure to enable optimal tissue evaluation for studies using an emphysematous mouse lung model. The main advantage is that it can fix many lungs with the same condition at one time. Lung specimens are obtained from chronic cigarette smoke-exposed mice. Lung fixation is performed using specialized equipment that enables the production of constant pressure. This constant pressure maintains the lung in a reasonably inflated state. Thus, this method generates a histological specimen of the lung that is suitable to evaluate cigarette smoke-induced mild emphysema.

Presented here is a useful protocol for lung fixation that creates a stable condition for histological evaluate of lung specimens from a mouse model of emphysema. The main advantage of this model is that it can fix many lungs with the same constant pressure without lung collapse or deflation.

Fissazione polmonare sotto pressione costante per la valutazione dell'enfisema nei topi

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung ...

<meta charset="utf8"></head><body>Conservazione della localizzazione delle spore fungine nei polmoni per l'analisi al microscopio a fluorescenza

Efficient Method for Imaging Murine Lungs that Preserves Spatial Dynamics of Fungal Spores in the Airways

Fungi infect humans when environmental spores are inhaled into the lungs. The lung is a heterogeneous organ. Conducting airways, including bronchi and bronchioles, branch until terminating in the alveolar airspace where gas exchange occurs. Infections originating in the bronchioles or alveoli elicit distinct host responses and disease manifestations. Therefore, understanding precisely where spores naturally localize in the lungs, particularly soon after infection, expands opportunities for investigation of host-pathogen interactions. Herein, we detail an in-situ analysis of lungs from mice infected with Coccidioides posadasii cts2/ard1/cts3&#916; arthroconidia. Conventional methods for histological preservation involve liquid inflation of the airways with a fixative solution, which displaces the natural location of aspirated fungal particles, pushing spores from proximal bronchioles to terminal airspaces.
Conversely, this method of air-inflation with blood vasculature perfusion-fixation preserves the physiologic position of fungal spores within the bronchioles. Moreover, we describe a simple approach to cryopreserving, embedding, and imaging lung specimens. We also share high-throughput computational techniques via the open-source QuPath program to analyze the spatial distribution of fungal spores within the lung. The method presented here is simple and quick, requires minimal equipment to perform, and can be easily adapted for use with many respiratory fungal infection models.

<meta charset="utf8"></head><body>Metodo efficiente per l'imaging dei polmoni murini che preserva la dinamica spaziale delle spore fungine nelle vie aeree

We present a method for a fungal pathogenesis model that preserves the natural positioning of fungal spores in the lung airways for analysis via fluorescent microscopy.

Metodo efficiente per l'imaging dei polmoni murini che preserva la dinamica spaziale delle spore fungine nelle vie aeree

Fungi infect humans when environmental spores are inhaled into the lungs. The lung is a heterogeneous organ. Conducting airways, including bronchi and ...

Immunologia e infezioni

Using Nicotine in a Silica-Exposed Mouse Model to Promote Lung Epithelial-Mesenchymal Transition

Smoking and exposure to silica are common among occupational workers, and silica is more likely to injure the lungs of smokers than non-smokers. The role of nicotine, the primary addictive ingredient in cigarettes, in silicosis development is unclear. The mouse model employed in this study was simple and easily controlled, and it effectively simulated the effects of chronic nicotine ingestion and repeated exposure to silica on lung fibrosis through epithelial-mesenchymal transition in human beings. In addition, this model can help in the direct study of the effects of nicotine on silicosis while avoiding the effects of other components in cigarette smoke.
After environmental adaptation, mice were injected subcutaneously with 0.25 mg/kg nicotine solution into the loose skin over the neck every morning and evening at 12 h intervals over 40 days. Additionally, crystalline silica powder (1-5 &#181;m) was suspended in normal saline, diluted to a suspension of 20 mg/mL, and dispersed evenly using an ultrasonic water bath. The isoflurane-anesthetized mice inhaled 50 &#181;L of this silica dust suspension through the nose and were awoken via chest massage. Silica exposure was administrated daily on days 5-19.
The double-exposed mouse model was exposed to nicotine and then silica, which matches the exposure history of workers who are exposed to both harmful factors. In addition, nicotine promoted pulmonary fibrosis through epithelial-mesenchymal transformation (EMT) in mice. This animal model can be used to study the effects of multiple factors on the development of silicosis.

This study describes a mouse model to study the synergistic effect of nicotine on the progression of pulmonary fibrosis in experimental silicosis mice. The dual-exposure mouse model simulates the pathological progression in the lung after simultaneous exposure to nicotine and silica. The methods described are simple and highly reproducible.

Utilizzo della nicotina in un modello murino esposto alla silice per promuovere la transizione epitelio-mesenchimale polmonare

Smoking and exposure to silica are common among occupational workers, and silica is more likely to injure the lungs of smokers than non-smokers. The role ...

Instillazione e fissaggio Metodi utili in mouse Lung Cancer Research

Riepilogo

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Metodo efficiente per l'imaging dei polmoni murini che preserva la dinamica spaziale delle spore fungine nelle vie aeree

Metodo efficiente per l'imaging dei polmoni murini che preserva la dinamica spaziale delle spore fungine nelle vie aeree

Metodo efficiente per l'imaging dei polmoni murini che preserva la dinamica spaziale delle spore fungine nelle vie aeree

Utilizzo della nicotina in un modello murino esposto alla silice per promuovere la transizione epitelio-mesenchimale polmonare