Questo protocollo è tra i primi a descrivere l'uso di un apparato autoiniettore nell'allotrapianto del tumore Drosophila. Un argomento che è cresciuto in popolarità negli ultimi anni. Il vantaggio principale di questo metodo è che aumenta l'efficienza della ricerca sul cancro in Drosophila migliorando la velocità, la consistenza e la resa dell'allotrapianto tumorale.
L'allotrapianto tumorale in Drosophila è una tecnica delicata che può essere difficile da padroneggiare. Sii paziente e fidati che la pratica rende perfetti. Dopo aver attraversato le mosche e incubato le uova per sei giorni a 18 gradi Celsius, trasferire le fiale contenenti le larve tratteggiate in un'incubatrice a 29 gradi Celsius.
Ordina il tipo selvatico anestetizzato o le mosche adulte mutanti in base al loro sesso. Fissare un pezzo di nastro adesivo lungo cinque centimetri a un vetrino per microscopio con il lato appiccicoso verso l'alto. Immobilizzare le mosche aderendo le ali al nastro con una pinza.
Posizionare la scatola del controller e l'autoiniettore sui lati opposti del microscopio ottico. Elaborare un'estremità del capillare di vetro utilizzando un estrattore di micro pipetta a quattro fasi, riscaldandolo su un'estremità chiusa stretta. Utilizzare una pinza per agganciare il capillare con un angolo di circa 60 gradi per preparare un capillare di vetro da 3,5 pollici.
Svitare leggermente il cappuccio dell'iniettore. Tenere premuto il pulsante vuoto per far avanzare l'ago dell'iniettore fino a quando non viene visualizzato dal 70 all'80% della sua lunghezza totale. Utilizzare una siringa per riempire il capillare di vetro con olio minerale.
Selezionare una delle larve e trasferirla in una piastra di dissezione riempita con 100 microlitri del Medium di Schneider per prepararsi alla dissezione del tumore dell'anello immaginale SG. Usando un paio di pinze per tenere la sezione centrale del corpo larvale, pizzicare la testa larvale usando un altro paio di pinze e applicare una forza di allungamento longitudinalmente. Individuare e isolare il SG a forma di Y delle larve, quindi sezionare il tumore dell'anello immaginale SG rimuovendo il tessuto adiacente.
Riempi il capillare di vetro con il Medium di Schneider fino al segmento superiore di 0,5 centimetri tenendo premuto il pulsante di riempimento. Individuare un tumore primario e premere il pulsante di riempimento fino a quando il tumore viene aspirato nel capillare. Assicurarsi che il tumore si trovi sulla punta del capillare o a diversi millimetri di distanza dalla punta del capillare.
Individua una mosca adulta immobilizzata al nastro. Quindi utilizzare una pinza per tenere delicatamente premuto l'addome inferiore e perforare la cuticola laterale inferiore dell'addome con il capillare. Premere il pulsante vuoto fino a quando il tumore entra nel nuovo addome ospite.
Usando la pinza, pizzicare delicatamente le ali dell'ospite per rimuoverlo dal nastro. Quindi metterlo in una nuova fiala con cibo fresco. Esaminare i tumori che sono cresciuti nell'addome ospite utilizzando un microscopio a fluorescenza intorno a 10-14 giorni dopo l'allografo e sezionare il tumore allografato cresciuto dall'ospite usando due paia di pinze.
Utilizzare un paio di pinze per tenere premuto l'addome e l'altra coppia per incidere aprire la cuticola addominale, esponendo il tumore allografato. Isolare accuratamente il tumore dai tessuti ospiti attaccati. Utilizzare aghi sterili e sezionare i tumori in pezzi più piccoli che sono appropriati per le dimensioni del capillare.
Ripeti questo processo per una nuova generazione di ospiti adulti per completare l'allotrapianto del tumore. Il processo di sviluppo del tumore è stato monitorato dall'imaging dal vivo di un tumore ad anello immaginale SG di prima generazione che cresce in un addome ospite adulto il giorno 10, dopo l'allotrapianto. Un tumore dell'anello immaginale SG di sesta generazione che occupa una grande porzione dell'addome ospite il giorno 10, post-allotrapianto è mostrato qui.
L'imaging in questa fase può aiutare a rivelare i modelli di crescita del tumore e i suoi comportamenti di migrazione e invasione. Il trapianto di tumore è un'ottima tecnica per studi longitudinali per la progressione del tumore, l'evoluzione e una metastasi. Risultati di grande importanza, per lo studio delle interazioni dell'ospite tumorale.
Questo proto ha un grande potenziale negli schermi di farmaci antitumorali che utilizzano i farmaci Temodal. Utilizzando questa tecnica, i ricercatori saranno in grado di risparmiare tempo e sforzi significativi nell'indagine.
