TGFR offre una valutazione in tempo reale delle funzioni renali. Rispetto ai marcatori tradizionali, TGFR può monitorare più volte i cambiamenti nella funzione renale negli stessi animali. Inoltre, la tecnica non richiede alcuna raccolta di sangue o urina.
Con i recenti progressi nello xenotrapianto, ulteriori ricerche saranno condotte utilizzando il modello suino. Quindi crediamo che questo strumento sarà essenziale per la ricerca traslazionale ed è più probabile che venga utilizzato clinicamente nei prossimi anni. L'esperimento è condotto su maialini di età compresa tra tre e sette giorni.
Gli animali sono inclini a ipotermia, ipovolemia e altre complicazioni derivanti dalla chirurgia. Pertanto, è necessario un attento monitoraggio durante tutta la procedura. Inoltre, la metodologia richiede pratica in quanto comporta tracheostomia e incannulamenti vascolari.
Dopo aver preparato l'animale per la procedura, utilizzare una lama chirurgica per creare un'incisione verticale paramediana sinistra da cinque a sei centimetri, poiché il cieco nei maiali si trova nella fossa paralombare sinistra. Sezionare gli strati della parete addominale, evitando lesioni ai vasi epigastrici superficiali. Una volta inciso lo strato peritoneale, utilizzare un divaricatore per migliorare l'accesso alle strutture intraaddominali e identificare il colon a spirale nel quadrante superiore sinistro dell'addome.
Per localizzare il cieco, tracciare il colon a spirale caudalmente e dorsalmente. Il colon a spirale alla base del cieco è unito all'ileo. Ligate il cieco appena distale alla giunzione ileocecale.
Utilizzando un ago calibro 18, effettuare sette forature nel cieco ed estrudere le feci nell'area peritoneale. Chiudere gli strati addominali con una sutura di seta 3/0, utilizzando semplici punti interrotti o continui. Una cucitrice può anche essere utilizzata per chiudere lo strato di pelle, se disponibile.
Dopo otto ore di legatura cecale, iniziare la misurazione transdermica della GFR. Utilizzare il software del servizio MB versione 3.0 per regolare la frequenza di campionamento sul dispositivo GFR. Utilizzando il connettore USB, collegare il dispositivo GFR transdermico al computer.
Aprire il software del servizio MB. Fare clic su Connetti e regolare la temporizzazione su 4.000 millisecondi. Fare clic su Scrivi per salvare le impostazioni, quindi fare clic su Disconnetti.
Fissare i cerotti adesivi bifacciali con una finestra trasparente su un lato del dispositivo. Collegare la batteria al dispositivo, assicurandosi che il diodo a emissione luminosa si sovrapponga alla finestra trasparente per consentire il rilevamento del tracciante. Una volta collegata la batteria, attaccare immediatamente il cerotto adesivo con il dispositivo in posizione.
Assicurati che sia ben protetto. Poiché i suinetti sono profondamente anestetizzati, il nastro potrebbe non essere necessario per tenere il dispositivo in posizione. Preparare 50 milligrammi per millilitro di soluzione di FITC-sinistrin con soluzione salina e aspirare il dosaggio appropriato in una siringa.
Attaccare la siringa con il farmaco su un lato di un rubinetto a tre vie e un filo salino sull'altro lato del rubinetto. Spingere la FITC-sinistrina, immediatamente seguita da cinque millilitri di bolo salino prima di chiudere il rubinetto a tre vie nella vena del maialino. Tenere il dispositivo attaccato al maialino per quattro ore.
Per evitare artefatti di movimento durante questo periodo, tenere il maialino sotto anestesia come descritto nel manoscritto. Al termine delle quattro ore, rimuovere il dispositivo e scollegare immediatamente la batteria. Collegare il dispositivo GFR transdermico al computer utilizzando il connettore USB fornito dal fornitore.
Aprire il software MB lab per recuperare i dati dal dispositivo. Per salvare i dati non elaborati, fare clic su Connetti e selezionare Lettura. Quindi, attendere che il dispositivo finisca di leggere.
Fare clic su Rinomina e, infine, fare clic su Salva. Elaborare e valutare i dati salvati nel software di analisi secondo le istruzioni del manuale. In breve, aprire MB Studio e fare clic su carica per importare i dati salvati.
Regola le posizioni di offset, inizio e arresto utilizzando i marcatori automatici. Rimuovere gli artefatti se necessario. Selezionare il modello a tre scomparti e fare clic su Adatta per ottenere una lettura che mostra il gioco FITC-sinistrin in minuti e calcolare il TGFR utilizzando questa equazione.
Sia gli animali finti che quelli della sepsi avevano pesi comparabili. Dopo 12 ore di sepsi, nel gruppo sepsi sono stati osservati aumenti dei livelli sierici di proteina C-reattiva, un marker per la sepsi. Le curve di clearance FITC-sinistrina sono state mostrate per suinetti finti e settici 12 ore dopo l'intervento.
I suini settici con funzionalità renale compromessa hanno dimostrato un aumento dell'area sotto la curva. I suinetti con sepsi hanno mostrato una clearance compromessa della FITC-sinistrina, indicando un danno renale acuto. L'emivita media per FITC-sinistrin nei gruppi sham e sepsi è stata rispettivamente di 114 e 537 minuti.
La GFR media nel gruppo sham era significativamente più alta rispetto al gruppo sepsi. Il livello di creatinina sierica a zero e 12 ore era simile nel gruppo sham. Tuttavia, è stato osservato un aumento significativo del livello di creatinina nei suini settici dopo 12 ore.
Assicurarsi che la batteria sia collegata correttamente ai suinetti. Se le batterie vengono rimosse, il dispositivo non funzionerà. Prova a iniettare la FITC-sinistrina in un bolo fluido per prevenire picchi multipli.
Inoltre, assicurarsi che il dispositivo sia collegato correttamente ai suinetti per evitare artefatti di movimento. Con una misurazione in tempo reale della GFR, possiamo valutare correttamente la funzionalità renale per rilevare l'AKI in fase iniziale ed eventualmente valutare gli agenti terapeutici in esame.
