Stabilire tumori come parte posteriore dell'occhio è impegnativo. Questo metodo consente l'induzione di tumori riproducibili del melanoma coroideale nei topi e l'imaging dal vivo della crescita tumorale per la valutazione. Questo protocollo utilizza l'imaging live OCT per valutare la posizione dei tumori già al momento dell'inoculazione delle cellule tumorali e per seguire la crescita del tumore negli animali vivi.
Il melanoma uveale è una malattia devastante con un tasso vicino al 50% di metastasi. Lo sviluppo di modelli sperimentali è la chiave per far progredire la ricerca finalizzata a nuove possibilità terapeutiche. Un vantaggio di questo metodo è che la valutazione immediata del successo dell'iniezione consente di raggiungere gruppi di studio con tumori omogenei e seguirli continuamente tramite imaging dal vivo.
Per esaminare la progressione del tumore. L'iniezione negli occhi del piccolo topo richiede pratica. La capacità di visualizzare le cellule iniettate consente di valutare immediatamente il successo e ripetere con più topi, se necessario.
A dimostrare la procedura sarà il Dr.Dimitri Gaber del Laboratorio di Ricerca Oftalmologica presso il Kaplan Medical Center. Per iniziare, applicare 0,4% anestetico oftalmico topico, ossibuprocaina su entrambi gli occhi del topo anestetizzato. Quindi applicare localmente 0,5% Tropicamide su entrambi gli occhi per dilatare le pupille, seguito da 1,4% idrossietilcellulosa come lubrificante per evitare l'essiccazione degli occhi.
Osserva un occhio del mouse sotto un microscopio operatorio. Tenere le palpebre aperte con una pinza intraoculare sterile. Quindi tenere il limbo-congiuntiva temporale superiore e tirare verso una posizione infranasale.
Proteggi questa posizione tenendo il limbo-congiuntiva durante tutta la procedura. Utilizzando una punta dell'ago di calibro 30 fare una piccola peritomia congiuntivale nell'area temporale dorsale a circa uno o due millimetri posteriormente al limbus. Rimuovere la capsula dei tendini in eccesso dall'apertura della peritomia.
Inserire la punta dell'ago per penetrare nella sclera creando una traccia nello spazio subcoroideale fino a quando il colore marrone della coroide appare attraverso la sostanza bianca esposta della sclera. Caricare le celle in una siringa Hamilton sterile in vetro da 10 microlitri montata con un ago smussato calibro 32 attorcigliato con un angolo di 45 gradi. Inserire l'ago della siringa caricata di circa due millimetri nel tratto creato e iniettare due microlitri della sospensione cellulare.
Tenga l'ago in posizione dopo l'iniezione per due o tre secondi fino a quando tutto il liquido non si è eliminato. Rimuovere l'ago estraendolo delicatamente per evitare perdite dal tratto. Immediatamente dopo l'inoculazione delle cellule di melanoma, osservare l'occhio iniettato dell'animale mediante scansioni OCT.
Sulla base delle scansioni, classificare il distacco di retina o i modelli RD secondo tre categorie RD locali, Leakage Into The Vitreous o Extended RD. Aprire un software di analisi della segmentazione OCT per prevedere le dimensioni del tumore in base all'altezza RD. Misurare l'altezza della RD locale nelle scansioni dello Strumento di personalizzazione di Office e classificarle in tre gruppi. Nella fase postoperatoria, applicare 0,3% di Ofloxacina per via topica.
La previsione basata sull'OCT della crescita tumorale dopo iniezione di cellule subcoroidali è rappresentata in questa figura. I topi hanno mostrato tre modelli di RD, Focal, Leakage To The Vitreous e Extended RD. C'era un'associazione tra il modello di RD immediatamente dopo l'iniezione e la localizzazione dei tumori cinque giorni dopo l'iniezione. La RD focale era associata alla crescita delle cellule tumorali che era limitata alla coroide.
Tuttavia, l'osservazione delle cellule nel vitreo dopo l'iniezione in animali che mostravano RD focale ha indicato la crescita tumorale nella cavità vitreale e nella coroide. quando è stata osservata una RD estesa dopo l'iniezione, i tumori sono stati dispersi in tutta la coroide e vitrei dopo cinque giorni. La gamma di dimensioni tumorali indotte in questo modello può essere suddivisa in piccola, media e grande.
Qui sono mostrate immagini rappresentative della misurazione OCT dell'altezza RD dopo l'iniezione e l'immagine del fondo oculare corrispondente, una scansione OCT orizzontale dell'altezza e della larghezza del tumore il quinto giorno dopo l'iniezione e la sua immagine del fondo oculare corrispondente e la corrispondente sezione oculare colorata H & E che dimostra misurazioni tumorali comparabili. Qui vengono presentate le misurazioni del volume tumorale di topi che hanno presentato RD piccola, media o grande immediatamente dopo l'iniezione cellulare. La regolazione della forza di iniezione può influenzare le dimensioni e la posizione del tumore.
È importante calibrare questo e valutare il modello di distacco di retina indotto da OCT dopo l'iniezione. L'imaging dal vivo dei tumori coroideali è un importante strumento sperimentale che consente di esaminare l'effetto di diversi fattori o potenziali terapie sulla progressione del tumore.
