Questa tecnica aumenta i livelli di glucosio del liquido cerebrospinale o del liquido cerebrospinale nei topi senza influenzare la loro concentrazione di glucosio nel sangue. Questo aiuta a studiare gli effetti diretti di alti livelli di glucosio nel liquido cerebrospinale sulla funzione cerebrale dell'animale. Questa tecnica può stabilire modelli animali per esplorare il ruolo teologico del glucosio CSF superiore sulla disfunzione cognitiva.
Portando alla scoperta di nuovi bersagli molecolari per migliorare la funzione cognitiva. Il metodo aiuterà anche a determinare se alti livelli di glucosio nel CSF sono sufficienti per mediare i fenotipi dei disturbi neurodegenerativi nei topi. È necessario prestare attenzione al corretto assemblaggio e adescamento della configurazione della cannula e all'inserimento della cannula nel cervello con le coordinate corrette.
Per iniziare l'intervento chirurgico per l'impianto di minipompa osmotica posizionare il topo anestetizzato sul telaio stereotassico. Montare la testa dell'animale sulla barra incisiva. Coprire il naso con il cono del naso per mantenere l'anestesia e collegare il flusso di isofluorato al cono del naso ad una velocità compresa tra l'1,5 e il 2%Posizionare una piastra riscaldante sotto il mouse per mantenere la temperatura corporea.
Dopo aver disinfettato l'area chirurgica e praticato un'incisione, esporre la superficie del cranio con una spatola e pulire il sangue, se presente, con punte di cotone. Utilizzare un cauterizzatore se sanguina abbondantemente. Strofinare con una punta di cotone immersa nel 3% di perossido di idrogeno per esporre le suture craniche.
Lavorando al microscopio, prendi nota di bregma e lambda per navigare nelle coordinate del cranio. Imposta tutte le coordinate a zero su bregma. Utilizzando un trapano elettrico con attenzione e senza rompere la dura madre fare un foro alle coordinate 0,5 millimetri posteriormente al bregma e 1 millimetro lateralmente alla linea mediana verso destra.
Inserire un emostatico e aprirlo e chiuderlo delicatamente per creare una tasca per la mini pompa. Tenendo la pompa dalla punta del modulatore di flusso, spingerla attraverso la pelle incisa nella tasca creata. Applicare un po 'di colla sul lato inferiore della cannula e fissarla nel supporto della cannula.
Assicurarsi che la cannula non sia ostruita e che la soluzione scorra correttamente. Quindi abbassare lentamente la cannula attraverso il foro praticato, due millimetri ventrale alla superficie del cranio. Lasciarlo lì per almeno cinque minuti per consentire alla colla di solidificarsi.
Con l'aiuto delle forbici, agganciare la parte superiore della cannula assicurandosi che non si stacchi dalla superficie del cranio. Coprire la cannula con uno strato di cemento dentale per un supporto extra. Per la raccolta del liquido cerebrospinale o del liquido cerebrospinale, posizionare il mouse correttamente anestetizzato sul telaio stereotassico.
Dopo aver fissato la testa sul telaio come dimostrato in precedenza ruotare le manopole per inclinare la testa in modo che il naso sia rivolto verso il basso. Dopo aver disinfettato l'area chirurgica e praticato un'incisione, rimuovere il supporto dal corpo del topo e lasciare riposare il topo verticalmente in modo che il collo sia completamente esteso dorsalmente. Utilizzando una pinza smussata curva, tagliare delicatamente in due i muscoli posteriori del collo dalla linea mediana per creare una piccola finestra.
Quindi utilizzare un applicatore di punta di cotone bagnato per spostare delicatamente i muscoli del collo dalla linea mediana alla periferia. Osservare se la cisterna magna è esposta come una finestra triangolare con una membrana dura trasparente. Posizionare il gruppo micro manipolatore sul telaio stereotassico accanto al mouse assicurandosi che la punta capillare non tocchi alcuna superficie.
Rompere delicatamente la punta capillare senza disturbare la configurazione. Ruotare le manopole corrispondenti sul micro manipolatore per allineare lentamente e spostare la punta capillare verso la cisterna magna. Una certa resistenza si avverte una volta che la punta capillare tocca la membrana della cisterna magna.
Spingere molto lentamente la punta contro la membrana con l'aiuto delle manopole facendo attenzione a non danneggiare i vasi sanguigni nella membrana. Quando la membrana viene perforata, il liquido cerebrospinale scorre immediatamente nel capillare a causa della pressione capillare negativa. Lasciare la configurazione per alcuni minuti fino a quando circa 10 microlitri di CSF si raccolgono nel capillare.
Rimuovere con cautela il capillare dalla siringa e collegarlo a un distributore di lampadine a microcap. Premere il bulbo per trasferire il liquido cerebrospinale in una provetta sterile per microcentrifuga. Posizionare il supporto sotto il mouse e ruotare le manopole stereotassiche per livellare la testa.
Chiudere la ferita con punti di sutura in nylon. Iniettare 300 microlitri di soluzione salina sterile per via sottocutanea prima di rimuovere il topo dall'apparecchio. Dare assistenza postoperatoria agli animali fino al momento di rimuovere le suture, circa 7-10 giorni dopo l'intervento.
Il liquido cerebrospinale raccolto 10 giorni dopo l'intervento chirurgico ha mostrato un aumento di circa sei volte del livello di glucosio nei topi, infuso con il 50% di glucosio rispetto a quello nei topi infusi con CSF. Tuttavia, i livelli di glucosio nel sangue non erano diversi tra i gruppi. Mentre si abbassa la cannula nel cervello, ritrarla indietro e controllare se il liquido cerebrospinale esce dal foro.
È anche fondamentale identificare correttamente la cisterna magna e prevenire la contaminazione del liquido cerebrospinale con il sangue. Questa tecnica può anche essere utilizzata per fornire qualsiasi farmaco che non è in grado di attraversare la barriera emato-encefalica per testare il suo effetto sulla funzione cerebrale. Esiste un numero molto limitato di modelli animali di diabete e disturbano l'omeostasi del glucosio nell'ambiente periferico.
Questo modello, tuttavia, aiuta a studiare i cambiamenti specifici del cervello nella regolazione del glucosio sulla funzione neurale.
