Fabbricazione di griglia di affinità streptavidina per la preparazione di campioni di microscopia crioelettronica

Ci sono stati molti recenti progressi tecnologici nella crio-EM, compresi i progressi nell'hardware del microscopio stesso che migliorano la qualità complessiva delle immagini, e anche gli sviluppi nel software utilizzato per elaborare le immagini crio-EM che possono iniziare a gestire le grandi quantità di eterogeneità presenti in molti dei campioni. La preparazione del campione rimane uno dei maggiori colli di bottiglia nella crio-EM. La quantità di campione può essere limitante e le proteine tendono ad assorbire l'interfaccia idrofobica aria-acqua durante la vetrificazione.

Ciò può portare alla denaturazione del campione, alla rottura di complessi proteici più grandi e agli orientamenti preferiti delle particelle presenti nelle immagini crio-EM. Queste griglie sfruttano l'interazione ad alta affinità tra streptavidina e biotina per legare i campioni biotinilati e proteggerli dall'interfaccia idrofobica aria-acqua. Siamo in grado di lavorare con quantità di campione molto basse e la biotina casuale dei campioni offre una strategia per superare i problemi di orientamento preferenziale che possono essere osservati quando si utilizzano altri strati di supporto.