Isolamento di nuclei dal tessuto adiposo intermuscolare umano e sequenziamento dell'RNA a singolo nucleo a valle

Il nostro gruppo di ricerca sta cercando di comprendere la composizione cellulare e i profili trascrizionali specifici delle cellule del tessuto adiposo intermuscolare o IMAT nell'uomo. L'IMAT è in realtà un deposito adiposo ectopico che risiede tra e intorno alle fibre muscolari. La tomografia computerizzata e la risonanza magnetica sono state in grado di quantificare il volume dell'IMAT e hanno recentemente dimostrato che aumenta sia con l'età che con l'IMC, ed è anche associato a malattie degenerative muscolari.

Studi sul secretoma in vitro hanno recentemente dimostrato che le proteine secrete da IMAT hanno la capacità di influenzare la sensibilità all'insulina, i profili infiammatori e anche l'espressione proteica contrattile nel muscolo scheletrico umano. La quantità limitata di tessuto IMAT raccolto durante le biopsie e la natura lipidica degli adipociti rendono questo tessuto incompatibile con la digestione dei tessuti e l'RNA-Seq a singola cellula. Pertanto, volevamo sviluppare un protocollo che eseguisse l'isolamento dei nuclei su piccole quantità di tessuto che potessero poi essere utilizzati nell'RNA-Seq a singoli nuclei a valle.

Questo protocollo consentirà ai ricercatori di determinare le alterazioni trascrizionali composizionali e cellulo-specifiche che si verificano nell'IMAT in diversi stati di malattia metabolica e in risposta agli interventi. Ci auguriamo che queste informazioni siano cruciali nello sviluppo di nuove strategie terapeutiche per aiutare ad alleviare la malattia metabolica prendendo di mira direttamente l'IMAT o i suoi fattori secreti. Il campo manca gravemente di dati sulla biologia di IMAT, sulle sue origini cellulari e sulla comunicazione con altre cellule, residenti sia all'interno che all'esterno di IMAT, nonché sulle sue risposte molecolari agli interventi sullo stile di vita, come la dieta e l'esercizio fisico o la farmacoterapia.

Tutte queste sono domande chiave per la ricerca del nostro gruppo.