La nostra tecnica è adatta per vari tipi di esperimenti, ma il nostro modello di topo è necessario per nutrire le zecche ed è necessario per mantenere le zecche in un'area chiusa per una facile raccolta e monitoraggio. Il vantaggio di questo semplice metodo è l'efficienza, la breve durata e la capacità di monitorare o raccogliere zecche in diversi punti di tempo di un esperimento. Il nostro sistema è adatto per studiare la biologia delle zecche, le interazioni patogene ospite-vettore o valutare diverse misure di controllo di questi artropodi di importanza medica.
Questo metodo richiede precisione e attenzione ai dettagli in quanto le fasi immature delle zecche sono piccole e nutrirle con topi richiede che la capsula chiusa sia saldamente attaccata al mouse per diversi giorni. Inizia attaccando insieme una schiuma EVA di due millimetri, una doppia schiuma adesiva appiccicosa. Utilizzare un foro in pelle di 20 millimetri di diametro per tagliare un cerchio dai pezzi di schiuma.
Quindi, utilizzare un perforatore di 12 millimetri per tagliare l'interno. Sbucciare la striscia di carta protettiva dalla doppia schiuma adesiva appiccicosa e attaccare un cerchio di plastica trasparente di 20 millimetri alla schiuma. Se si alimentano le larve, non rimuovere la striscia di carta protettiva dalla schiuma adesiva e procedere direttamente con il fissaggio della capsula.
Fai una fessura di un centimetro nella plastica trasparente, quindi usa un perno entomologico per creare almeno 10 piccoli fori per l'evaporazione dell'umidità durante l'esperimento. Dopo che il mouse è stato anestetizzato posizionarlo sul cuscinetto di manipolazione e attaccare un cono del naso per l'alimentazione continua di isoflurane. Assicurarsi che la frequenza respiratoria sia inferiore a 80 respiri al minuto regolando il livello di isoflurane.
Radere la parte anteriore del mouse da dietro le scapole fino all'area appena dietro le orecchie creando un'area rasata maggiore della superficie della capsula. Applicare la colla in lattice non irritante sull'intero sito di schiuma EVA della capsula e attendere un minuto. Posizionare la capsula sulla schiena del mouse e applicare una pressione costante per tre minuti soprattutto sul lato sinistro e destro della capsula.
Sollevare leggermente la capsula per controllare visivamente il suo attaccamento alla pelle. Per garantire l'attacco fermo della capsula applicare una leggera pressione costante di tre minuti con le dita soprattutto sul lato sinistro e destro della capsula. Se vengono trovate regioni non attaccate, applicare più colla con una spatola e premere per altri tre minuti.
Se durante l'esperimento si forma un'area non di attacco, correggerla nello stesso modo. Introdurre le singole ninfe nella capsula attraverso la fessura di un centimetro. Spremere leggermente la capsula da due lati per consentire alla plastica trasparente di piegarsi, quindi spingere la ninfa all'interno della capsula.
Ruotare le forcep di 90 gradi e tirarle fuori. Per l'infestazione delle larve, rimuovere lo scivolo di carta dalla capsula attaccata e posizionare la siringa con le larve direttamente all'interno. Depositare le zecche spingendo lo stantuffo della siringa, quindi ruotare delicatamente lo stantuffo verso la pelle per rimuovere le larve attaccate rimanenti.
Una volta depositate le larve sulla pelle, chiudere la capsula attaccando il cerchio di plastica trasparente. Tagliare una striscia di 3,5 millimetri della fascia di plastica protettiva e applicare la fascia di plastica protettiva intorno alla capsula, quindi riportare il mouse nella gabbia. Per raccogliere le zecche, creare un taglio a forma di croce nella plastica con un bisturi e utilizzare le forcelle per raccogliere le zecche.
Se necessario, richiudere la capsula attaccando un cerotto di plastica adesivo sulla plastica trasparente. lo stesso cerotto di plastica può essere utilizzato se è richiesta la raccolta di zecche in più punti di tempo. In alternativa, il mouse può essere eutanasiato e le zecche raccolte o staccate manualmente dopo la rimozione della capsula.
Per un recupero riuscito dei topi, tienili in gabbia per un'ulteriore settimana e lascia che le capsule si distaccno naturalmente. Una volta spenta la capsula, verificare la presenza di reazioni anomale sulla pelle. Applicare qualsiasi lozione emolliente in caso di irritazione.
Questo protocollo consente di alimentare zecche dure immature in capsule di schiuma EVA applicate sulla schiena di un topo. L'uso della colla in lattice ad asciugatura rapida e non irritante assicura che la capsula sia saldamente attaccata entro tre minuti e rimanga attaccata per almeno sette giorni. Attaccare due capsule consente di nutrire due diversi gruppi di zecche sullo stesso animale.
Inoltre, il completo recupero dei topi dopo gli esperimenti, consente di riutilizzare gli animali ed evitare l'eutanasia. Questo sistema è stato utilizzato con successo per nutrire le ninfe ixodes ricinus. Un tasso di successo da moderato ad alto engorgement è stato raggiunto in due diversi ceppi di topi.
In entrambi i ceppi, tutte le ninfe terminarono l'alimentazione entro quattro o cinque giorni, mentre la maggior parte lasciò il quarto giorno. Quando si tenta questo protocollo, è importante radere un'area sufficiente della pelle del mouse e attaccare efficacemente la capsula per evitare il suo distacco accidentale durante l'esperimento. Oltre allo studio della biologia delle zecche di base, questo metodo può essere utilizzato per esplorare la trasmissione patogena dal segno di spunta all'ospite o dall'ospite alle zecche.
Inoltre, l'opzione di riutilizzare il mouse offre la possibilità di più re-infestazioni che possono essere benefiche per studi immunologici o indagare diverse trasmissioni patogene trasmesse da zecche.
