In vitro組織灌流システムを使用して、単離された腸管の機能活性をリアルタイムで検出する

要約

ラットの腸管を分離し、 in vitroでラットの張力、頻度、振幅に対する薬物の影響を評価する方法を紹介します。この方法は、腸管を調査する研究者にとって貴重なアプローチを提供します。

要約

罹患率の高い胃腸疾患は、人間にとって大きな課題となっています。小腸は、食品や薬物の消化吸収に不可欠であり、これらの疾患の治療に重要な役割を果たしています。腸管運動実験は、一般的で不可欠な in vitro 法であり、胃腸のダイナミクスを研究するために利用されています。これには、単離された腸管の調製、ならびに調製された腸管の浴中の懸濁液および信号検出器へのその接続が含まれる。これに続いて、腸の運動機能を評価するために使用できる張力などの一連のパラメーターの記録と分析、 およびin vitroで腸管を活動的に保つための考慮事項が続きます。サンプリングからデータ収集までの標準化されたプログラムにより、実験データの再現性が大幅に向上し、生理学的、病理学的、薬物的介入後の腸の緊張の記録の信頼性が確保されます。ここでは、実験操作における主要な問題と、胃腸の運動性を調節する薬物を研究するための貴重な参照実験プロトコルを紹介します。

概要

一般的な状態である胃腸疾患は、人間の生活と健康に深刻な影響を及ぼします¹.胃腸運動障害は、機能性胃腸疾患の重要な部分であり、主に衰弱症状、胃内容排出の遅延、および重度の胃の問題に現れます²。胃腸の協調を乱し、胃内容排出を妨げ、腸の食物不耐症に影響を与え、さらには小腸または大腸の機能閉塞を引き起こす可能性があります³。胃腸手術を受けている患者にとって、この障害は腸の失敗に直接つながる可能性があります。また、腸の病気は胃腸疾患だけでなく、肝炎や中枢神経系疾患など、さまざまな疾患の病原性因子にも関連しています。腸内微生物群集は、運動性を含む腸の生理機能において重要な調節的役割を果たしており、その後、微生物生態系内のコロニー形成に影響を与えます⁴。B型肝炎ウイルスの感染が慢性B型肝炎に進行するにつれて、腸内細菌叢にはさまざまな程度の変化があります。腸内細菌叢の調節は、B型肝炎ウイルスの治療に有益であることが実証されています⁵。さらに、中枢神経系は腸に影響を与え、その微生物組成を変化させる可能性があります。近年のミクロフローラシーケンシング技術の進歩により、腸内細菌叢と中枢神経系機能との間の双方向の相互作用が明らかになり、中枢神経系疾患の....

プロトコル

このプロトコルは、以前に発表された文献14,15,16,17から導き出されます。本研究では、雄のSprague Dawley(SD)ラット(260-300 g、8-10週齢)を使用しました。動物実験のプロトコルは、成都中医薬大学の管理委員会によって審査され、承認されました（記録第2023017号)。実験に先立ち、ラットは24時間絶食するように指示されました。実験中、ラットは動物の部屋で飼われ、餌と水に自由にアクセスできました。

1. 溶液の調製

1. 118 mM NaCl、4.7 mM KCl、2.5 mM CaCl₂、1.2 mM KH₂PO₄、1.2 mM MgCl₂・6H₂O、25 mM NaHCO₃、11 mM D-グルコース、および5 mM HEPESを含む生理学的塩溶液(PSS)を調製します( 材料表を参照)。
2. ....

ディスカッション

胃腸の運動性は、正確に調整された一連の平滑筋の収縮と弛緩によって達成されます。このプロセスには、筋肉群の1つのグループのリズミカルな収縮、複数のグループの協調的な収縮、および特別な推進収縮が含まれます^20,21。胃腸運動障害の発生は、中枢神経系、自律神経系、腸管神経系、胃腸平滑筋など、さまざまな?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetylcholine	Sigma, USA	A6625
atropine	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	IA06501
Barium chloride	Macklin Biochemical Co.,Ltd.,Shanghai, China	B861682
CaCl2	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A501330
D-glucose	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A610219
drawing software	GraphPad Software, San Diego, California, USA	—
Epinephrine	Sigma, USA	E4642
HEPES	Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China	S3872
In vitro tissue perfusion system	PowerLab, ADInstruments, Australia	ML0146
KCl	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100395
KH2PO4	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100781
LabChart Professional version 8.3	ADInstruments, Australia	—
MgCl2·6H2O	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100288
NaCl	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100241
NaHCO3	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100865
nifedipine	Macklin Biochemical Co.,Ltd.,Shanghai, China	N5087
statistical analysis software	GraphPad Software, San Diego, California, USA	—
Surgical sutures	Johnson, USA	—