Использование системы перфузии тканей in vitro для обнаружения функциональной активности изолированных кишечных трубок в режиме реального времени

Резюме

Представлен метод выделения кишечных трубок крыс и оценки влияния лекарственных препаратов на их натяжение, частоту и амплитуду in vitro. Этот метод предлагает ценный подход для исследователей, изучающих кишечные трубки.

Аннотация

Желудочно-кишечные заболевания, которые имеют высокую распространенность, представляют собой значительные проблемы для человека. Тонкий кишечник является неотъемлемой частью переваривания и всасывания пищи и лекарств и играет решающую роль в лечении этих заболеваний. Эксперимент по движению кишечной трубки, распространенный и важный метод in vitro , используется для изучения динамики желудочно-кишечного тракта. Сюда входит подготовка изолированной кишечной трубки, а также суспензия подготовленной кишечной трубки в ванне и ее подключение к детектору сигналов. Затем следует запись и анализ ряда параметров, таких как напряжение, которое может быть использовано для оценки моторной функции кишечника, а также соображений по поддержанию активности кишечной трубки in vitro. Стандартизированная программа от отбора проб до сбора данных значительно улучшает повторяемость экспериментальных данных и обеспечивает достоверность регистрации напряжения кишечника после физиологического, патологического и медикаментозного вмешательства. Здесь мы представляем ключевые проблемы экспериментальной эксплуатации и ценный эталонный экспериментальный протокол для изучения лекарственных средств, регулирующих моторику желудочно-кишечного тракта.

Введение

Желудочно-кишечные заболевания, являющиеся распространенным заболеванием, оказывают серьезное воздействие на жизнь и здоровье человека¹. Расстройство моторики желудочно-кишечного тракта является важной частью функциональных заболеваний желудочно-кишечного тракта, проявляясь в первую очередь в изнурительных симптомах, задержке опорожнения желудка и серьезных проблемах с желудком². Он может нарушить координацию желудочно-кишечного тракта, затруднить опорожнение желудка, повлиять на пищевую непереносимость кишечника и даже вызвать функциональную непроходимость в тонком или толстом кишечнике....

протокол

Этот протокол основан на ранее опубликованной литературе 14,15,16,17. Для настоящего исследования использовались самцы крыс Sprague Dawley (SD) (260-300 г, возраст 8-10 недель). Протокол для животных был рассмотрен и одобрен Управляющим комитетом Университета традиционной китайской медицины в Чэнду (запись No 2023017). Перед началом эксперимента крысам было поручено голодать в течение 24 часов. Во время эксперимента крысы содержались в камере для животных и имели свободный доступ к пище и воде.

Результаты

Первая часть исследования посвящена процессу отделения изолированных кишечных трубок от организма и преобразования их в 2-сантиметровые трубки in vitro. Этот процесс подробно проиллюстрирован на рисунке 1. Вторая часть включает в себя суспензию и ст.......

Обсуждение

Моторика желудочно-кишечного тракта достигается серией точно скоординированных сокращений и расслаблений гладких мышц. Этот процесс включает в себя ритмичное сокращение одной группы мышечных групп, скоординированное сокращение нескольких групп и специальное проп.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetylcholine	Sigma, USA	A6625
atropine	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	IA06501
Barium chloride	Macklin Biochemical Co.,Ltd.,Shanghai, China	B861682
CaCl2	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A501330
D-glucose	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A610219
drawing software	GraphPad Software, San Diego, California, USA	—
Epinephrine	Sigma, USA	E4642
HEPES	Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China	S3872
In vitro tissue perfusion system	PowerLab, ADInstruments, Australia	ML0146
KCl	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100395
KH2PO4	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100781
LabChart Professional version 8.3	ADInstruments, Australia	—
MgCl2·6H2O	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100288
NaCl	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100241
NaHCO3	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100865
nifedipine	Macklin Biochemical Co.,Ltd.,Shanghai, China	N5087
statistical analysis software	GraphPad Software, San Diego, California, USA	—
Surgical sutures	Johnson, USA	—