ラベルの付いたTSAおよびSABセトリングプレートを作業エリアの近くに置きますが、テストを妨げないエリアに配置します。サンプリング開始時刻を文書化します。無菌的に両方のプレートを開き、寒天が乾燥するのを防ぐために、作業エリアから離れた生物学的安全キャビネットのきれいな表面に蓋を最大4時間置きます。
処理の最後にプレートの蓋を閉め、サンプリング停止時間を文書化します。ゆるく、プレートを袋に入れて培養物をインキュベートします。手袋をはめた指先のサンプリングのために、2つのラベル付きTSALTプレートを入手してください。
プレートの蓋を無菌的に取り外し、サンプリングエリアから離れた清潔な作業面に置きます。プレートの表面に各指と親指のパッドをそっと転がします。寒天表面にひびが入ることなく寒天にわずかなくぼみを作るのに十分な力を使用してください。
蓋を無菌的にプレートに戻します。サンプリングの完了時に手を消毒した後、プレートをゆるく袋に入れ、培養物をインキュベートします。直接接種する場合は、米国薬局方の方法に従って、TSAおよびSAB沈殿プレートをバイオセーフティキャビネットに入れます。
キャビネットを準備し、材料をステージングした後、サンプリング開始時間を文書化します。試験品および関連するトリプシン大豆ブロスおよび流動チオグリコール酸培地ボトルを入手する。ボトルにセプタムがある場合は、各ボトルから保護キャップを取り外し、滅菌アルコールワイプでセプタムを拭きます。
試験品をボルテックスして均質な懸濁液を確保し、滅菌注射器と皮下注射針を使用して検証された量の試験品をボトルに接種します。滅菌アルコールワイプでセプタムを拭き、滅菌ベントユニットを挿入して、インキュベーション中の空気交換を可能にします。そのセッションの各テスト記事に対して手順を繰り返します。
TSAおよびSABセトリングプレートを無菌的に閉じ、手袋をはめた指先サンプリングを実行する前にサンプリング終了時間を文書化します。手袋を70%滅菌イソプロピルアルコールで拭き、プレートをゆるく袋に入れて培養物をインキュベートします。すべての試験材料を生物学的安全キャビネットから移します。
同様に、直接接種の場合、NIHの代替無菌試験方法に従って、TSAおよびSABセトリングプレートをバイオセーフティキャビネットに入れ、サンプリング開始時間を文書化します。テスト品と関連するIFAプラスラベル、IFNプラスラベル、およびSABプレートを入手します。IFA PlusおよびIFN Plusボトルから保護キャップを取り外し、滅菌アルコールワイプでセプタムを拭きます。
試験品をボルテックスした後、滅菌注射器と皮下注射針を使用して、検証された量の試験品をボトルに接種し、セプタムを再度拭きます。BACT / ALERTデュアルT機器でボトルをインキュベートします。ピペッターを使用して、SABプレートに検証量の試験品とストリークを接種し、滅菌ループを使用して分離します。
インキュベーションのために反転したときにサンプルがプレートの蓋に流れ込まないように、10分間放置します 試験品を接種した各SABプレートをビニール袋に入れます。それらをゆるく結びます。TSAおよびSABセトリングプレートを無菌的に閉じます。
プレートにサンプリング終了時間を記録し、手袋をはめた指先のサンプリングを実行します。サンプリング後、手袋を70%アルコールで拭きます。手袋をアルコールで拭いた後、プレートをゆるく袋に入れ、培養物をインキュベートします。
生物学的安全キャビネット内のパッシブエアプロセスモニタリング中に培養された汚染物質の単一コロニーを示すTSA空気沈降プレートがここに示されています。2つの異なるコロニー形態の3つのコロニー形成単位を有するTSALT表面サンプリングプレートをこの図に示す。プレートの端に単一のコロニーがあるTSALT表面培養は、サンプリングプロセス中の無菌処理が不十分であることを示しています。
各指または親指の最大表面積を使用して手袋をはめた指先サンプルを取得するための正しい方法をこの画像に示します。指先だけをサンプリングする誤った処理をここに示します。肉眼で見えるモールドボールがBACT/ALERTシステムによって自動検出されなかった例を以下に示します。
これらの知見に基づいて、すべてのBACT/ALERTボトルの最終目視検査と、NIH代替無菌試験法を使用した真菌培養用のSABプレートの追加が推奨されます。
