我々は、GRP細胞の使用に彼の洞察力とフィードバックのための博士デビンゲイリーに感謝したいと思います。

<ol>
	<li>Kalyani, A., Hobson, K., Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroepithelial+stem+cells+from+the+embryonic+spinal+cord:+isolation,+characterization,+and+clonal+analysis.">Neuroepithelial stem cells from the embryonic spinal cord: isolation, characterization, and clonal analysis.</a> Developmental biology. 186, 202-202 (1997).</li><li>Rao, M. S., Mayer-Proschel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial-restricted+precursors+are+derived+from+multipotent+neuroepithelial+stem+cells.">Glial-restricted precursors are derived from multipotent neuroepithelial stem cells.</a> Developmental biology. 188, 48-48 (1997).</li><li>Goldman, S. A., Lang, J., Roy, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+cell-based+myelination+as+a+model+for+cell-based+therapy+of+the+central+nervous+system.">Progenitor cell-based myelination as a model for cell-based therapy of the central nervous system.</a> Ernst Schering Research Foundation workshop. (60), 195-195 (2006).</li><li>Goldman, S. A., Schanz, S., Windrem, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-based+strategies+for+treating+pediatric+disorders+of+myelin.">Stem cell-based strategies for treating pediatric disorders of myelin.</a> Human molecular genetics. 17, 76-76 (2008).</li><li>Goldman, S. A., Windrem, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+replacement+therapy+in+neurological+disease.">Cell replacement therapy in neurological disease.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. 361, 1463-1463 (2006).</li><li>Walczak, P., All, A. H., Rumpal, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+glial-restricted+progenitors+survive,+proliferate,+and+preserve+electrophysiological+function+in+rats+with+focal+inflammatory+spinal+cord+demyelination.">Human glial-restricted progenitors survive, proliferate, and preserve electrophysiological function in rats with focal inflammatory spinal cord demyelination.</a> Glia. 59, 499-499 (2011).</li><li>Liu, S., Qu, Y., Stewart, T. 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J., Guo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+chimerization+with+human+glial+progenitor+cells+can+both+remyelinate+and+rescue+the+otherwise+lethally+hypomyelinated+shiverer+mouse.">Neonatal chimerization with human glial progenitor cells can both remyelinate and rescue the otherwise lethally hypomyelinated shiverer mouse.</a> Cell stem cell. 2, 553-553 (2008).</li><li>Groves, A. K., Barnett, S. C., Franklin, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+demyelinated+lesions+by+transplantation+of+purified+O-2A+progenitor+cells.">Repair of demyelinated lesions by transplantation of purified O-2A progenitor cells.</a> Nature. 362, 453-453 (1993).</li><li>Back, S. A., Han, B. H., Luo, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+vulnerability+of+late+oligodendrocyte+progenitors+to+hypoxia-ischemia.">Selective vulnerability of late oligodendrocyte progenitors to hypoxia-ischemia.</a> J. Neurosci. 22, 455-45 (2002).</li><li>Johnston, M. V., Trescher, W. H., Ishida, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobiology+of+hypoxic-ischemic+injury+in+the+developing+brain.">Neurobiology of hypoxic-ischemic injury in the developing brain.</a> Pediatric research. 49, 735-735 (2001).</li><li>Lepore, A. C., Han, S. S., Tyler-Polsz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+fate+of+multipotent+and+lineage-restricted+neural+precursors+following+transplantation+into+the+adult+CNS.">Differential fate of multipotent and lineage-restricted neural precursors following transplantation into the adult CNS.</a> Neuron glia biology. 1, 113-113 (2004).</li><li>Rothstein, J. D., Dykes-Hoberg, M., Pardo, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knockout+of+glutamate+transporters+reveals+a+major+role+for+astroglial+transport+in+excitotoxicity+and+clearance+of+glutamate.">Knockout of glutamate transporters reveals a major role for astroglial transport in excitotoxicity and clearance of glutamate.</a> Neuron. 16, 675-675 (1996).</li><li>Johnston, M. V., Ferriero, D. M., Vannucci, S. 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V., Marino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(2+)+influx+through+AMPA+or+kainate+receptors+alone+is+sufficient+to+initiate+excitotoxicity+in+cultured+oligodendrocytes.">Ca(2+) influx through AMPA or kainate receptors alone is sufficient to initiate excitotoxicity in cultured oligodendrocytes.</a> Neurobiology of disease. 9, 234-234 (2002).</li><li>Volpe, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+injury+in+premature+infants:+a+complex+amalgam+of+destructive+and+developmental+disturbances.">Brain injury in premature infants: a complex amalgam of destructive and developmental disturbances.</a> Lancet neurology. 8, 110-110 (2009).</li><li>Warf, B. C., Fok-Seang, J., Miller, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+the+ventral+origin+of+oligodendrocyte+precursors+in+the+rat+spinal+cord.">Evidence for the ventral origin of oligodendrocyte precursors in the rat spinal cord.</a> J. Neurosci. 11, 2477-2477 (1991).</li><li>Deng, W., Poretz, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodendroglia+in+developmental+neurotoxicity.">Oligodendroglia in developmental neurotoxicity.</a> Neurotoxicology. 24, 161-161 (2003).</li><li>Deng, W., Rosenberg, P. A., Volpe, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-permeable+AMPA/kainate+receptors+mediate+toxicity+and+preconditioning+by+oxygen-glucose+deprivation+in+oligodendrocyte+precursors.">Calcium-permeable AMPA/kainate receptors mediate toxicity and preconditioning by oxygen-glucose deprivation in oligodendrocyte precursors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, 6801-6801 (2003).</li><li>Karadottir, R., Cavelier, P., Bergersen, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+are+expressed+in+oligodendrocytes+and+activated+in+ischaemia.">NMDA receptors are expressed in oligodendrocytes and activated in ischaemia.</a> Nature. 438, 1162-1162 (2005).</li><li>Pleasure, D., Soulika, A., Singh, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+in+white+matter:+clinical+and+pathophysiological+aspects.">Inflammation in white matter: clinical and pathophysiological aspects.</a> Mental retardation and developmental disabilities research reviews. 12, 141-141 (2006).</li><li>Gregori, N., Proschel, C., Noble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tripotential+glial-restricted+precursor+(GRP)+cell+and+glial+development+in+the+spinal+cord:+generation+of+bipotential+oligodendrocyte-type-2+astrocyte+progenitor+cells+and+dorsal-ventral+differences+in+GRP+cell+function.">The tripotential glial-restricted precursor (GRP) cell and glial development in the spinal cord: generation of bipotential oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cells and dorsal-ventral differences in GRP cell function.</a> J. Neurosci. 22, 248-248 (2002).</li><li>Rao, M. S., Noble, M., Mayer-Proschel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tripotential+glial+precursor+cell+is+present+in+the+developing+spinal+cord.">A tripotential glial precursor cell is present in the developing spinal cord.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95, 3996-3996 (1998).</li><li>Raff, M. C., Miller, R. H., Noble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glial+progenitor+cell+that+develops+in+vitro+into+an+astrocyte+or+an+oligodendrocyte+depending+on+culture+medium.">A glial progenitor cell that develops in vitro into an astrocyte or an oligodendrocyte depending on culture medium.</a> Nature. 303, 390-390 (1983).</li><li>Strathmann, F. G., Wang, X., Mayer-Proschel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+novel+glial-restricted+cell+populations+in+the+embryonic+telencephalon+arising+from+unique+origins.">Identification of two novel glial-restricted cell populations in the embryonic telencephalon arising from unique origins.</a> BMC developmental biology. 7, 33-33 (2007).</li><li>Nunes, M. C., Roy, N. S., Keyoung, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+isolation+of+multipotential+neural+progenitor+cells+from+the+subcortical+white+matter+of+the+adult+human+brain.">Identification and isolation of multipotential neural progenitor cells from the subcortical white matter of the adult human brain.</a> Nature. 9, 439-439 (2003).</li><li>Roy, N. S., Wang, S., Harrison-Restelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification,+isolation,+and+promoter-defined+separation+of+mitotic+oligodendrocyte+progenitor+cells+from+the+adult+human+subcortical+white+matter.">Identification, isolation, and promoter-defined separation of mitotic oligodendrocyte progenitor cells from the adult human subcortical white matter.</a> J. Neurosci. 19, 9986-9986 (1999).</li><li>Chen, Y., Balasubramaniyan, V., Peng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+rat+and+mouse+oligodendrocyte+precursor+cells.">Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells.</a> Nature protocols. 2, 1044-1044 (2007).</li></ol>

この研究は国立衛生研究所[NICHD P30HD024061（AWP）、NINDS K08NS063956（AF）、およびR01NS028208（MVJ）]と子の神経財団によって資金を供給された。このレポートの内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしも国立衛生研究所、DHHSの公式見解を表すものではありません。著者らは、この研究に関連する利害の衝突はありません。

<p class="jove_content"中枢神経系白質の&gt;障害は、遺伝的炎症、虚血性および毒性の原因を含む病因の多数を含む<sup&gt; 19,21,22,23,24</sup&gt;。多発性硬化症とvasculopathiesは、成人の白質疾患の主要原因であるが、未熟児に関連付けられている脳室周囲白質軟化症は、小児集団における白質損傷の最も一般的な原因です。さらに大幅に周産期の侮辱の影響を受けている細胞ofoligodendrocytic系統の病気のメカニズムをさらに研究を線引きするために、必要とされる。のGRPは、げっ歯類の胚の脊髄から単離され、自然の中でtripotentialであることが示され、オリゴデンドロサイトとアストロサイトの二つの異なる集団を生じさせるが、ニューロンに分化していないた<sup&gt; 2,25,26</sup&gt;。同様に、ラット視神経および後期胚または早期の生後ラット脳由来のオリゴデンドロサイト前駆細胞（OPC）は、適切なメディアの状況で機能するオリゴデンドロサイトに成熟することが実証されています<sup&gt; 27,28</sup&gt;さらに、胎児または成体由来のヒトOPCはより一層成熟したオリゴデンドロサイト表現型に操作されている<sup&gt; 29,30</sup&gt;。</p&gt;<p class="jove_content"&gt; GRP細胞はE13.5ラットおよびマウスのE12-13.5の脊髄の両方から分離されている。ラットの違いに腹由来のGRPは、より成熟した表現型に分化するように大きい傾向を示すとオリゴデンドロサイト、またはアストロサイトの生成を促進する条件への応答で背と腹から派生したGRP細胞との間で報告されている<sup&gt; 25,26,28</sup&gt;。これは、分化の手がかりが少ない受け入れることができる新生GRP細胞の背腹側への移行が原因である可能性があります。 Immunopanningを単離し、培養中のメンテナンスのために収集されるA2B5を表現する集団を可能にします。</p&gt;<p class="jove_content"&gt;私たちのマウスGRPの文化は、GRP細胞は化学物質（媒体）と抗体ベースの手法で選択され、そこから細胞の異種、プールされた人口をもたらし、総脊髄組織から派生しています。我々の研究は、脊髄由来のマウスGRP細胞を利用しているが、それが最近ではまた、成熟オリゴデンドロサイトへと発展が可能である脳由来のマウスオリゴデンドロサイト前駆細胞の誘導が報告されている<sup&gt; 31</sup&gt;。ここから派生した細胞は、最初に適切な培地を使用して濃縮PDGFαR+、OPCの人口に操作されていることをoligospheresとして培養される<sup&gt; 31</sup&gt;。我々の研究は、A2B5 +、PDGFαR-GRPの前駆体から（MBP +）成熟オリゴデンドロサイトに発現しているミエリン塩基性タンパク質へのオリゴデンドロサイト系譜スペクトルの細胞の低酸素性虚血発作の我々のモデルの効果に焦点を当てている。確かに私たちの<em&gt; in vitroで</em&gt;特性は、モノカルチャーや皮質ニューロンの共培養のいずれかMBP発現する細胞にこれらの未熟GRP細胞の成熟を示している。これらの細胞は、周産期の白質損傷に関与するメカニズムを研究するための特定の分化経路に文化の中で操作することができます。オリゴデンドロサイト系譜と、この集団の可用性の細胞を含む白質疾患のいくつかのマウスモデルがあります可能な細胞療法のオプションの有用性を探索するだけでなく、けがの原因となるメカニズムに徹底的な調査が可能になります。</p

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th></tr><tr><td> DMEM / F12午前1時01分</td><td>インビトロジェン</td><td> 11320033 </td></tr><tr><td> B27 </td><td>インビトロジェン</td><td> 17504044 </td></tr><tr><td> N2 </td><td>インビトロジェン</td><td> 17502048 </td></tr><tr><td> RH-FGF-基本</td><td>インビトロジェン</td><td> PHG0026 </td></tr><tr><td>トリプシン（0.05％）EDTA </td><td>質生物学株式会社</td><td> 118-087-721 </td></tr><tr><td>ポリ-L-リジン臭化水素</td><td>シグマ</td><td> P1274-25mgを</td></tr><tr><td>ラミニン</td><td>シグマ</td><td> L2020-1mgの</td></tr><tr><td> DNase処理1 </td><td>シグマ</td><td> DN25 </td></tr></tbody></table>

derivation of glial restricted precursors from e13 mice

これは、E13のマウス胎児の脊髄から神経膠限定前駆（GRP）細胞の誘導するためのプロトコルです。これらの細胞は、オリゴデンドロサイト細胞系譜内で早期の前駆体である。最近では、これらの細胞は、白質疾患の修復治療の潜在的な源として研究されている。脳室周囲白質軟化症（PVL）は、小児期に非遺伝白質疾患の主要な原因であると非常に未熟児の50％まで影響を与えます。データは、低酸素虚血脳の発達、酸化ストレスと選択的に初期の白質を標的と興奮の高まり感受性を示唆している。グリア制限された前駆体（GRP）、オリゴデンドロサイト前駆細胞（OPC）と未熟なオリゴデンドロサイト（preOL）はPVLの開発におけるキープレーヤーであるように見えると継続的な研究の対象となります。さらに、先行研究として興奮をグルタミン酸に対する感受性を増加しているCNS組織のサブセットを同定したこの感受性の発達パターンも。当研究室では、現在開発中のGRPの段階でPVLと使用細胞のオリゴデンドロサイト前駆細胞の役割を調査しています。我々は、PVLと一貫性の応力を選択するには、それらの応答をテストするためにいくつかの実験パラダイムでこれらの派生したGRP細胞を利用しています。 GRP細胞は、マウスPVLモデルとし、低酸素虚血を含むPVLのような侮辱のin vitroモデルの移植実験のためにOPCのとpreOLにin vitroで操作することができます。培養細胞を使用し、in vitro試験データの解釈を容易に実験間のばらつきが存在削減されるだろう。非GRP表現型の細胞の混入の影響を最小限に抑えながら、培養細胞はまた、GRP人口の濃縮が可能になります。

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Derivation of Glial Restricted Precursors from E13 mice

このプロトコルは、胎児の脊髄からグリア制限前駆体の導出の概要を説明し、移植またはオリゴデンドロサイト系譜の研究のいずれかをin vitroで維持されます。

E13マウスからグリア制限前駆体の導出

This is a protocol for derivation of glial restricted precursor (GRP) cells from the spinal cord of E13 mouse fetuses. These cells are early precursors ...

derivation-of-glial-restricted-precursors-from-e13-mice

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.2K ビュー.  Johns Hopkins University. このプロトコルは、胎児の脊髄からグリア制限前駆体の導出の概要を説明し、移植またはオリゴデンドロサイト系譜の研究のいずれかをin vitroで維持されます。