意識性ラットの鎖骨下静脈からの反復採血

薬物動態およびトキシコキネティクス研究では、薬物曝露を検出するために、ラットの特定の時点で一定量の血液を採取する必要があります。この研究では、このプロトコルでラットの鎖骨下静脈から血液を採取するための簡単で効率的な方法について説明します。この技術は、麻酔なしで繰り返し、タイムリーで、簡単に識別できるサンプリングを可能にし、繰り返しのサンプル収集によって高品質の血液を取得します。

鎖骨下静脈の解剖学的構造、有能なラット拘束、針先を知っておく必要があります。この方法は危険であり、資格のある専門家が必要です。はじめに、ラットの首と前肢の間の鎖骨下三角窩の最下点を見つけます。

頭に向かって約2〜3ミリメートル移動し、採血部位の針先に到達します。電気かみそりを使用して髪を取り除きます。ラットの頭、首、胸を直立させるには、片手で首の後ろの皮膚をつかみ、注射部位を露出させます。

注射部位の側面の前肢をまっすぐにして、そのレベルを維持します。もう一方の手で注射器をラットの頭と平行に保ち、注射器を外側に5〜10度傾けて、先端が腹側に傾くようにします。針を前腔に完全に挿入します。

シリンジを引き戻して、チューブで負圧を維持します。針をゆっくりと深いものから浅いところに動かし、同じ経路に戻ります。血液が注射針に入ったら、針の位置を固定します。

ラットの体重と健康状態に応じて、施設の動物管理および使用委員会によって設定された基準に従って採取される最大血液量を監視します。他の要件がない場合は、24時間以内に動物の総血液量の20%以上を取り除かないでください。十分な血液サンプルが採取されたら、すぐにシリンジを引き出し、血液治療の準備をします。

ラットの注射部位を1〜2分間加圧して、出血を止めます。採取部位は首の下部にあるので、鎖骨下静脈の皮膚をつまんで押して出血を止めます。注射器から針を取り外し、鋭利な工具容器に捨てます。

血液を注射器から1.5ミリリットルのチューブにゆっくりと移します。気泡の形成を避けるために、シリンジを壁に押し付けます。マイクロ遠心チューブの蓋を閉め、そっとフリックします。

血液と抗凝固剤を少なくとも5回ひっくり返して完全に混ぜます。血漿を収集してから120分以内に、全血サンプルを室温で10〜15分間2, 000 RCFで遠心分離します。ピペットガンを使用して、上部プラズマを新しいマイクロ遠心チューブに移します。

下部の全血でピペットヘッドに触れないでください。赤血球で汚染された血漿を廃棄するか、再遠心分離します。.鎖骨下静脈から正確に採取した血漿試料は、半透明の淡黄色であった。

不適切な採血または操作は溶血を引き起こしました。最初のサンプリング中、オスの動物の体重は268〜297グラム、メスの体重は約214〜239グラムでした。最後のサンプリングでは、雄の動物の体重は376〜462グラム、雌の体重は約254〜300グラムでした。

トキシコキネティック採血の間には28日のギャップがありました。動物の体重は毎週着実に増加し、臨床観察は正常でした。正確な針の挿入方法と角度により、スムーズな採血を確保し、リスクを回避できます。

この操作には繰り返し練習が必要です。