肝外胆道系を評価した多くの報告では、サンプルを入手したが、どのように入手したかは報告されておらず、比較可能性に関する問題が提起されている。この技術の主な利点は、肝外胆道系全体を解剖し、汚染細胞を非外傷的に除去できることです。私たちの解剖プロトコルは、一般的にマウス新生児胆管疾患に取り組む実験的アプローチに適用でき、肝外胆道系の解剖を目指しています。
プロトコルのいくつかの特徴、例えば、胃を十二指腸に付着させたままにすることは、胃によって発現される部分的に消化されたミルクによる正しい方向を可能にする十二指腸閉鎖症の研究において有用であり得る。最初は、このテクニックはトレーニングに時間がかかる場合があります。段階的なアプローチを実践し、それに従うことで、スピードと結果が向上します。
まず、消毒およびオートクレーブ処理した器具を手術台の横の無菌面に置きます。腹膜を切った後、左前頭腋窩線に沿って、断頭の位置に切り傷を広げます。非外傷性鉗子で左側から右側に皮膚を取り除きます。
顕微鏡下で、脾臓を囲む腹膜を保持します。腹膜がテントのような構造に似るまでゆっくりと持ち上げ、中央に1ミリメートルの穴を開けます。腹膜テントが空気で満たされるのを待ちます。
下肋骨、両方の外側腹部領域、および下部膀胱領域で囲まれた窓で腹膜を切り取ります。肝臓、胆管系、胃、小腸、結腸へのフルアクセスを確保します。剣状突起を頭蓋腹側位置で慎重に引っ張ることによって胆嚢および胆管を調べる。
胆管系からの胆嚢の裂傷につながる可能性のある鷹状靭帯の裂傷を避けてください。次に、剣状突起のプルを解除します。十二指腸をそっと引き下げて、胆管系を解放します。
次に、胆管系を十二指腸に接続する十二指腸乳頭を特定することにより、下部エンブロック動員を行う。乳頭の右側に約2センチメートルの十二指腸を切ります。次に、幽門領域を切り取ります。
胃の内容物が切断位置と十二指腸乳頭の間の幽門領域に存在することを確認してください。上部エンブロック動員を実行するには、剣状突起を静かに引っ張り、鷹状靭帯にアクセスします。胆嚢と剣状突起の間の鷹状靭帯を1センチメートル切ります。
食道、下大静脈、胸部大動脈、肝臓の裸の領域を囲むすべての靭帯など、肝臓と胸部の間の接続構造を切り取ります。また、背側に残っているすべての組織接続を切断します。顕微鏡倍率20倍で、En-Blocサンプルをフォームパッドの上に置きます。
サンプルを正しい解剖学的位置に再編成して組み立てます。穏やかな動きを使用して、十二指腸の口腔部分と口腔部分を平らにします。非外傷性鉗子を使用して、十二指腸乳頭で平坦化運動を開始し、刃先まで続けます。
次に、十二指腸の口腔部分の胃の白い果肉の内容物を滑らかにします。十二指腸の口腔部分と口腔部分を特定して、胆管の回転の可能性を除外します。胆管を解剖する前に、肝組織の大きな残りを切り取ります。
数回こすった後、サンプルをフォームマットのよりきれいな位置に移します。バックグラウンドで圧迫されていない肝臓組織を使用して、EBDSと不要な細胞との分化のためのビューを最適化します。孤立したEBDSが残るまで肝十二指腸靭帯を処理します。
十二指腸乳頭から約3〜5ミリメートルの経口で、白くて非常に繊細なフィラメントとして生じる肝動脈と門脈を観察します。この繊細なフィラメントを慎重に取り外し、左側の側面を軽く引っ張ります。掻き取りの動きが胆管系から始まり、肝臓の境界につながることを確認してください。
このプロトコルを使用して、EBDSを9日齢のマウス新生児から解剖しました。胆嚢から十二指腸乳頭までの単離されたEBDSの長さは10ミリメートル未満であり、繊細な胆管の直径は0.05〜0.2ミリメートルの範囲で変化した。ヘマトキシリンエオジン染色は、開いた内腔を有するEBDSの縦断面で行った。
胆管細胞は内腔の周囲を単層として同定され、より暗く染色された。研究者は、解剖や注射プロトコルなどの操作技術を共有および標準化して、研究と結果の比較可能性と迅速な使いやすさを向上させる必要があります。先行解剖は、細胞培養汚染の減少をもたらすため、胆管内および胆管周囲外の単離などの組織学的および単一細胞アプローチに有利であろう。
