マウスにおける腎臓移植は、急性および慢性同種移植片拒絶反応のメカニズムの研究に不可欠である。ここでは、マウスの腹部腎臓移植モデルにおける血管吻合と尿管移植のための新しい手術技術を紹介します。従来のマウス腎臓移植モデルでは、大動脈の上部は腎動脈に近似して結紮される。
ドナーの左腎静脈は大静脈でトランスジェクトされ、ドナー大動脈は腎動脈の下に均等に分割され、後にレシピエントの腹部大動脈に吻合される。マウス腎臓移植のこの改変技術では、ドナー左腎静脈も大静脈でトランステクトされるが、ドナー大動脈は腎動脈の子孫の上に切断され、その吻合はレシピエント腹部大動脈に切除される。大動脈のドナー末端が結紮されている間、尿管動脈は意図的に保存される。
今、私たちは外科的処置のデモンストレーションを開始します。麻酔のために、無意識を誘発するために約40〜60秒間イソフルランを吸入するための箱にマウスを置く。マウスを麻酔したら、マウスの重量を量ります。
マウス重量に応じて、ケタミン、キシラジン、アセプロマジンの腹腔内注射が麻酔されたマウスに与えられる。麻酔が効いたら、腹部の毛皮をクリップで留めます。次に、操作テーブル上のマウスを固定して消毒します。
十字腹部切開部を用いて皮膚を切断する。腹壁の筋肉を切断する。次に、生理食塩水を吸収したガーゼで内臓を慎重に動かして覆います。
左腎臓、大動脈、下大静脈を露出させる。左腰椎静脈を焼灼し、その根底にある枝や左副腎血管を含む他の小さな血管を慎重に灼する。長さ約2ミリメートルの左右腎動脈の間の大動脈領域を動員する。
下大静脈と大動脈を分離する。そして、大動脈の下に湾曲した鉗子を通し、この血管の周りに7.06縫合糸の緩いネクタイを置きます。2つの5ミリメートルの微小血管クランプを使用して、右腎動脈および下大静脈の下の大動脈の領域をクロスクランプする。
大静脈から左腎静脈をトランセクトする。大動脈を1ミリリットルのヘパリン溶液で洗い流す。結紮を締め、結紮の下と近位クランプの下大動脈を切断します。
繊細な尿管動脈が完全に保存されるように、慎重に準備してください。組織を取り囲むすべての血管を慎重に焼灼することによって、左腎臓および関連する血管を完全に解放する。腎臓を取り出し、細胞株溶液に4度保存する。
最初の操作ステップは、麻酔および消毒を含むドナーマウスについて以前に示されたものと同様である。中央切開を介して腹部を開き、次いで生理食塩水を使用して湿ったガーゼで腹部器官を覆う。内膜大動脈を慎重に保存し、すべての大きな血管枝が焼灼されていることを確認してください。
電気焼灼を使用して、腎臓骨盤に近い位置で左尿管を慎重に解剖する。その後、左腎臓を取り除きます。下大静脈と腹部大動脈を露出させ、長さ約4ミリメートル以上の周囲の脂肪組織から剥離する。
次に、2つの微小血管クランプでそれぞれをクロスクランプし、それらの約および遠位にクランプします。マイクロニードルホルダーを使用して、大動脈壁を通って近位から遠位まで配置される10/0モノフィラメント縫合針をガイドします。約1ミリメートルの楕円形動脈切除術は、縫合糸の穏やかな上向きの牽引によって達成され、針の下面の真下を細かい湾曲したはさみで切断する。
ドナー-レシピエント大動脈吻合をエンドツーサイド方式で行う。吻合の近位端と遠位端をステッチする。最後のステッチは、2つの別々の10.0縫合糸を使用した。
結んだ後、針を含む2つの長い縫合糸を所定の位置に置きます。吻合の大動脈壁の左側を、遠位 - 近位方向に等間隔に2本のステッチで連続的に縫い付ける。最後の縫合の後、上部のステイ縫合糸タイの上の血管壁の部分的な厚さを通して縫合糸を導き、同時に下部縫合糸タイの短い端に穏やかな牽引力を発揮する。
この新しい結び目のないテクニックでは、最後のステッチは上部のネクタイの短い端に結び付けられていないことに注意してください。移植した腎臓を正常な位置にひっくり返します。次に、近位から遠位までの方法で3本のステッチを用いて大動脈吻合の右壁を近位から遠位まで連続的に縫い付ける。
なお、従来の外科的技術と比較して、最後の縫合糸は、近くの遠位結びと合体される。下の縫合糸の端に縛らず、代わりに約2〜3ミリメートルの自由長を残すようにカットしてください。下大静脈を縦方向に約1.5ミリメートルの十分な長さで切断する。
この切開部を大動脈の対応する部分の少し下に置きます。吻合の両側に4〜5本の縫合が必要であるという違いを伴って、前述ののと同じ縫合手順を使用して静脈吻合を行う。最終的なステッチは、上述の大動脈吻合に類似した長さの自由端として残される。
そして新しい結び目のない吻合技術、最後のステッチは結ばれていませんが、自由に残されます。これにより、手術時間が短縮され、外科医は吻合のサイズを増減することができます。この改善は、血管吻合の困難さおよび手術後の合併症を軽減する。
両方の吻合を完了した後、乾燥綿棒を使用して、縫合された領域に向かって約10〜20秒間穏やかな圧力をかける。その後、両方のクランプを取り外すことができます。10.0本の縫合糸でまっすぐな針を使ってレシピエントの尿膀胱を貫通し、21Gの針の内腔に挿入して指導します。
次に、21 G針をガイドして、前の針塗布の場所に穴をあけ、針を引き抜きます。トリミングされた尿管端をステッチし、この10.0縫合糸で膀胱をその入り口の場所に再び穿孔する。10.0フィラメントと尿管を、構築された穴を通って尿膀胱に牽引する。
ドナーの尿管をレシピエントの尿膀胱にアナストモースする。ここでは、尿管の外膜を膀胱壁の外膜に接続し、3~4本の縫合で断続的な縫合を行う。牽引縫合糸を引き抜きます。
腸を腹腔に戻します。2層の縫合を行い、最初に腹筋に続いて皮膚を腹部創傷を閉じる。移植したマウスを酸素および温度制御されたチャンバーに入れ、手術後に回復させる。
術後4日連続で十分な術後鎮痛を行う。移植麻酔の5日後にレシピエントマウスの対側腎摘出術を行う。マウスの状態を上げて記録します。
我々は、移植された等移植片腎臓と天然のレシピエント対側腎臓の組織学的変化を評価することによって、従来の移植技術および改変移植技術を比較した。腎尿細管および腎間質線維症のトロフィーの程度はいずれも、移植後4週目および12週目でそれぞれ有意に異なることは見出されなかった。我々は以前、この新しい結び目のない技術の結果を調査し、術間および術後の合併症の手順の技術的側面の観点から古典的なアプローチと比較した。
ここに示されている改変された技術は、移植片内動脈静脈血栓イベントの発生の低減と関連していた。狭窄を行う時間が有意に少なく、優れた腎臓等移植片であり、長期生存率を達成した。マウスの腎臓移植は複雑で最先端の手順です。
これは、全体的な成功率を向上させることを約束した血管吻合および腎移植のための新しい外科的技術であり、腎臓移植後の自己免疫応答を研究するための信頼できるツールとなっている。
