私たちのプロトコルは、LFPIデバイスを適切に維持する方法を示しています。一貫性のない怪我でのデバイスの誤動作を回避するために、定期的なクリーニングと監視の重要性を強調しています。したがって、LFPIは、in vivoでTBIを評価するために使用される損傷モデルです。
ヒトTBIに関連する病状を厳密に再現するため、実験的TBIの最も明確に定義された方法の1つになります。LFPIがヒトTBI症状を再現するために使用されることを考えると、治療法を見つけることを期待して、外傷性脳損傷のさまざまな側面を調査する実験を設定することができます。充填ポートまたはトランスデューサ内の気泡は、これらの領域の視界が制限されているため、除去が特に困難です。
これらの領域を埋めるときは、辛抱強く、ゆっくりと、空気を入れないように注意してください。まず、トランスデューサハウジングと充填ポートに取り付けられているシリンジと、圧力トランスデューサに接続されているケーブルを慎重に取り外します。デバイスの背面にあるハンドノブをシリンダーclから緩めますampsシリンダーを解放して、シリンダーを解放します。
シリンダー、トランスデューサー、トランスデューサーハウジング、プランジャーOリングの端にあるピストンを取り外します。シリンダーから液体を排出し、食器用洗剤などの中性洗剤をシリンダーに追加し、食器用またはボトルブラシを使用して軽くこすります。すべての洗剤が完全に洗い流されるようにするには、シリンダーに水を入れ、完全にすすいでください。
ピストンプランジャーにワセリンを薄く塗り、シリンダーから約32mm突き出たプランジャーでピストンプランジャーを取り付けます。ワセリンの薄層を他のOリングにも塗布し、充填ポートのOリングを除いてシリンダーに取り付けます。テフロンテープをトランスデューサーのネジ山に2回巻き付けます。
脱気液で満たされ、気泡のない10ミリリットルのシリンジを、トランスデューサハウジングのルアーロックハブに接続します。ねじ端を上に向けて探触子を持ち、探触子のねじ領域内のウェルに脱気液を完全に満たします。ここでの目標は、気泡を導入せずに探触子を十分に充填することです。
井戸の底にある繊細な膜を傷つけないように注意してください。空気がトランスデューサハウジングに再入らないようにシリンダーを斜めに配置した状態で、トランスデューサーハウジングをシリンダーに取り付け、レンチを使用してぴったりと締めます。脱気された流体がシリンダー容量の約3分の2に達したら、充填ポートとシリンダーからキャップを取り外します。
シリンダーを水平に置き、脱気液でシリンダーを満たします。充填ポートのキャップを元に戻し、すべての活栓を閉じます。シリンダーを操作して、気泡を充填ポートに流します。
充填ポートの活栓を開き、トランスデューサハウジングのシリンジを使用して液体を注入し、気泡をポートから押し出します。デバイス全体を検査し、気泡がないことを確認します。脱気液で満たされた10ミリリットルのシリンジを充填キャップのルアーロックハブに追加し、手ねじを使用してシリンダーをベースに再度取り付けます。
シリンダーが水平で、振り子の加重ハンマーの中心と揃っていることを確認します。適切に洗浄され機能しているLFPIデバイスによって生成される圧力波形の画像をこの図に示します。怪我をしたり、LFPIデバイスをテストしたりするとき、圧力波形は単一の鋭いピークを示すはずです。
デバイスに気泡が存在すると、いくつかの短いピークを持つ波形が得られます。このスライドは、汚染されていない5ミリリットルのエアインジェクション、10ミリリットルのエアインジェクション、15ミリリットルのエアインジェクションのオシロスコープの出力を示しています。このビデオに示されている技術は、ガスがデバイスに導入される可能性を減らし、流体を汚染している可能性のあるガスの小さなポケットを取り除くのに役立ちます。
したがって、気泡を除去することは、LFPIデバイスを使用するときに覚えておくべき最も重要なステップです。したがって、この手順の後、私たちの研究室はマウスに損傷を誘発し、生きた脳スライスを使用して神経活動を記録することができます。あなたは実際にJoVEのウェブサイトでこれに関する私たちのビデオの1つを見つけることができます。
このデバイスは、TBIの世界でゲームチェンジャーとなっています。これは現在、動物モデルで損傷を誘発するために最も広く使用されている方法であり、ヒトTBIのより良い治療法を見つける道を開いています。
