Наш протокол демонстрирует, как правильно обслуживать устройство LFPI. Это подчеркивает важность регулярной очистки и мониторинга, чтобы избежать неисправности устройства при непоследовательных травмах. Таким образом, LFPI — это модель травмы, используемая для оценки ЧМТ in vivo.
Он точно воспроизводит патологии, связанные с ЧМТ человека, что делает его одним из наиболее четко определенных методов экспериментальной ЧМТ. Учитывая, что LFPI используется для воспроизведения симптомов ЧМТ у человека, это позволяет нам проводить эксперименты, которые исследуют различные аспекты черепно-мозговых травм в надежде найти терапевтические меры. Пузырьки воздуха в заливном отверстии или датчике особенно трудно удалить из-за ограниченной видимости в этих местах.
Заполняя эти области, будьте терпеливы, медленны и осторожны, чтобы не вводить воздух. Для начала осторожно отсоедините шприцы, прикрепленные к корпусу датчика и заливному отверстию, а также кабель, подключенный к датчику давления. Открутите ручные ручки на задней панели устройства от зажимов цилиндра, чтобы освободить цилиндр.
Снимите поршень на конце цилиндра, преобразователь, корпус преобразователя и уплотнительные кольца плунжера. Слейте жидкость из цилиндра, добавьте в цилиндр мягкое моющее средство, например средство для мытья посуды, и слегка потрите щеткой для посуды или бутылки. Чтобы убедиться, что все моющее средство полностью смыто, наполните цилиндр водой и тщательно промойте.
Нанесите тонкий слой вазелина на поршневой плунжер и прикрепите поршень так, чтобы плунжер выступал примерно на 32 миллиметра из цилиндра. Нанесите тонкий слой вазелина на другие уплотнительные кольца и прикрепите их к цилиндру, за исключением уплотнительного кольца на заливном отверстии. Дважды оберните тефлоновую ленту вокруг нитей датчика.
Подсоедините 10-миллилитровый шприц, наполненный дегазированной жидкостью и свободный от пузырьков воздуха, к ступице замка Luer на корпусе преобразователя. Держите преобразователь резьбовым концом, направленным вверх, и полностью заполните колодец внутри резьбовой области преобразователя дегазированной жидкостью. Цель здесь состоит в том, чтобы заполнить датчик хорошо, не вводя пузырьков воздуха.
Будьте осторожны, чтобы не повредить нежную мембрану на дне колодца. Расположив цилиндр под углом, чтобы предотвратить повторное попадание воздуха в корпус преобразователя, прикрепите корпус датчика к цилиндру и плотно затяните его с помощью гаечного ключа. Снимите крышку с заливного отверстия и цилиндра, как только дегазированная жидкость достигнет примерно двух третей емкости баллона.
Поместите баллон горизонтально и завершите заполнение баллона дегазированной жидкостью. Установите на место крышку заливного отверстия и закройте все запорные краны. Манипулируйте цилиндром, чтобы направить пузырьки воздуха в заливное отверстие.
Откройте запорный кран на заливном отверстии и впрысните жидкость с помощью шприца на корпусе датчика, чтобы вытеснить пузырьки воздуха из порта. Осмотрите все устройство и убедитесь, что на нем нет пузырьков воздуха. Добавьте 10-миллилитровый шприц, наполненный дегазированной жидкостью, в ступицу замка Luer на крышке заливной полки и снова прикрепите цилиндр к основанию с помощью ручных винтов.
Убедитесь, что цилиндр горизонтальный и выровнен с центром утяжеленного молотка на маятнике. На этом рисунке показано изображение формы волны давления, создаваемой должным образом очищенным и функционирующим устройством LFPI. При выполнении травмы или тестировании устройства LFPI форма волны давления должна показывать один резкий пик.
Наличие пузырьков воздуха в устройстве приведет к форме волны с несколькими короткими пиками. Здесь показаны выходы осциллографа для незагрязненных, 5 миллилитров впрыска воздуха, 10 миллилитров впрыска воздуха и 15 миллилитров впрыска воздуха. Методы, показанные в этом видео, снижают вероятность попадания газов в устройство и помогают удалить любые небольшие карманы газа, которые могут загрязнять жидкость.
Поэтому удаление пузырьков воздуха является наиболее важным шагом, о котором следует помнить при использовании устройства LFPI. Таким образом, после этой процедуры наша лаборатория может вызывать травмы у мышей и использовать живые срезы мозга для записи активности нейронов. Вы можете найти одно из наших видео об этом на веб-сайте JoVE.
Это устройство изменило правила игры в мире TBI. В настоящее время это наиболее широко используемый метод причинения травм на животных моделях, который проложил путь к поиску лучших терапевтических средств для лечения ЧМТ человека.
