Nuestro protocolo demuestra cómo mantener el dispositivo LFPI correctamente. Destaca la importancia de la limpieza y el monitoreo de rutina para evitar el mal funcionamiento del dispositivo en lesiones inconsistentes. Por lo tanto, LFPI es un modelo de lesión utilizado para evaluar TBI in vivo.
Reproduce de cerca las patologías que están asociadas con la LCT humana, lo que lo convierte en uno de los métodos mejor definidos de LCT experimental. Dado que el LFPI se utiliza para reproducir los síntomas de TBI humano, nos permite establecer experimentos que investigan diferentes aspectos de las lesiones cerebrales traumáticas con la esperanza de encontrar medidas terapéuticas. Las burbujas de aire en el puerto de llenado o el transductor son particularmente difíciles de eliminar debido a la visibilidad limitada en esas áreas.
Al llenar esas áreas, sea paciente, lento y tenga cuidado de no introducir aire. Para comenzar, separe cuidadosamente las jeringas conectadas a la carcasa del transductor y al puerto de llenado y el cable conectado al transductor de presión. Desenrosque las perillas de mano en la parte posterior del dispositivo de las abrazaderas del cilindro para liberar el cilindro.
Retire el pistón en el extremo del cilindro, el transductor, la carcasa del transductor y las juntas tóricas del émbolo. Drene el líquido del cilindro, agregue un detergente suave como detergente para lavar platos al cilindro y frote ligeramente con un cepillo para platos o botellas. Para asegurarse de que todo el detergente se enjuague completamente, llene el cilindro con agua y enjuague bien.
Aplique una capa delgada de vaselina al émbolo del pistón y fije el émbolo del pistón con el émbolo que sobresale aproximadamente 32 milímetros del cilindro. Aplique una capa delgada de vaselina a las otras juntas tóricas también y conéctelas al cilindro, excepto a la junta tórica en el puerto de llenado. Envuelva la cinta de teflón dos veces alrededor de las roscas del transductor.
Conecte una jeringa de 10 mililitros llena de líquido desgasificado y libre de burbujas de aire al cubo de bloqueo Luer en la carcasa del transductor. Sostenga el transductor con el extremo roscado apuntando hacia arriba y llene completamente el pozo dentro de la región roscada del transductor con el fluido desgasificado. El objetivo aquí es llenar bien el transductor sin introducir burbujas de aire.
Tenga cuidado de no dañar la delicada membrana en el fondo del pozo. Con el cilindro colocado en ángulo para evitar que el aire vuelva a entrar en la carcasa del transductor, fije la carcasa del transductor al cilindro y use una llave para apretarlo cómodamente. Retire la tapa del puerto de llenado y del cilindro una vez que el fluido desgasificado alcance aproximadamente dos tercios de la capacidad del cilindro.
Coloque el cilindro horizontalmente y termine de llenar el cilindro con líquido desgasificado. Vuelva a colocar la tapa en el puerto de llenado y cierre todas las llaves de paso. Manipule el cilindro para que las burbujas de aire se dirijan al puerto de llenado.
Abra la llave de paso en el puerto de llenado e inyecte líquido usando la jeringa en la carcasa del transductor para forzar cualquier burbuja de aire fuera del puerto. Inspeccione todo el dispositivo y asegúrese de que no haya burbujas de aire. Agregue una jeringa de 10 mililitros llena de líquido desgasificado al cubo de bloqueo Luer en la tapa de llenado y vuelva a colocar el cilindro a la base con los tornillos manuales.
Asegúrese de que el cilindro esté horizontal y alineado con el centro del martillo pesado en el péndulo. La imagen de la forma de onda de presión producida por un dispositivo LFPI correctamente limpiado y en funcionamiento se muestra en esta figura. Al realizar una lesión o probar el dispositivo LFPI, la forma de onda de presión debe mostrar un solo pico agudo.
La presencia de burbujas de aire en el dispositivo dará como resultado una forma de onda con varios picos cortos. Aquí se muestran las salidas del osciloscopio para la inyección de aire no contaminada, 5 mililitros de aire, 10 mililitros de inyección de aire y 15 mililitros de inyección de aire. Las técnicas que se muestran en este video reducen la probabilidad de que se introduzcan gases en el dispositivo y ayudan a eliminar cualquier pequeña bolsa de gas que pueda estar contaminando el fluido.
Por lo tanto, eliminar las burbujas de aire es el paso más importante para recordar cuando se usa el dispositivo LFPI. Entonces, después de este procedimiento, nuestro laboratorio puede inducir lesiones en ratones y usar cortes de cerebro vivos para registrar la actividad neuronal. De hecho, puede encontrar uno de nuestros videos sobre esto en el sitio web de JoVE.
Este dispositivo ha sido un cambio de juego en el mundo de TBI. Actualmente es el método más utilizado para inducir lesiones en modelos animales y ha allanado el camino para encontrar mejores terapias para la LCT humana.
