我们的协议演示了如何正确维护LFPI设备。它强调了日常清洁和监控的重要性,以避免设备在不一致的伤害中出现故障。因此,LFPI是一种用于评估体内TBI的损伤模型。
它密切再现与人类TBI相关的病理,因此使其成为实验性TBI最明确的方法之一。鉴于LFPI用于重现人类TBI症状,它允许我们建立实验来研究创伤性脑损伤的不同方面,以期找到治疗方法。由于填充口或换能器中的气泡能见度有限,因此特别难以去除。
填充这些区域时,请耐心、缓慢且小心不要引入空气。首先,小心地拆下连接到传感器外壳和填充口的注射器以及连接到压力传感器的电缆。从气缸夹上拧下设备背面的手柄以释放气缸。
拆下气缸末端的活塞、传感器、传感器外壳和柱塞 O 形圈。将液体从气缸中排出,向气缸中加入温和的洗涤剂,例如餐具洗涤剂,然后用盘子或瓶刷轻轻擦洗。为确保完全冲洗掉所有洗涤剂,请用水填充滚筒并彻底冲洗。
在活塞柱塞上涂上一层薄薄的凡士林,并在柱塞从气缸伸出约 32 毫米处连接活塞柱塞。在其他O形圈上也涂上一层薄薄的凡士林,并将它们连接到气缸上,除了加注口上的O形圈。将特氟龙胶带缠绕在换能器的螺纹上两次。
将装满脱气液体且无气泡的 10 毫升注射器连接到传感器外壳上的鲁尔锁轮毂。握住探头,螺纹端朝上,并用脱气液完全填充探头螺纹区域内的孔。这里的目标是在不引入任何气泡的情况下很好地填充传感器。
注意不要损坏井底的脆弱膜。将气缸放置在一定角度以防止空气重新进入传感器外壳的情况下,将传感器外壳连接到气缸上并使用扳手将其紧紧拧紧。一旦脱气液达到气瓶容量的大约三分之二,就从加注口和气缸上取下盖子。
水平放置气瓶并用脱气液填充气瓶。装回加注口处的盖子并关闭所有旋塞阀。操纵气缸以将任何气泡工作到填充口。
打开填充端口上的旋塞阀,使用传感器外壳上的注射器注入液体,以迫使任何气泡从端口中排出。检查整个设备并确保没有气泡。将装满脱气液体的 10 毫升注射器添加到填充盖上的 Luer 锁定轮毂中,并使用手动螺钉将气缸重新连接到底座上。
确保圆柱体水平并与摆锤上的加重锤子的中心对齐。正确清洁且正常运行的LFPI设备产生的压力波形图像如图所示。在进行伤害或测试LFPI设备时,压力波形应显示单个尖锐的峰值。
器件中气泡的存在将导致具有几个短峰值的波形。此处显示了无污染、5 毫升空气喷射、10 毫升空气喷射和 15 毫升空气喷射的示波器输出。本视频中显示的技术降低了将气体引入设备的可能性,并有助于去除可能污染流体的任何小气体袋。
因此,去除气泡是使用LFPI设备时要记住的最关键步骤。因此,在此过程之后,我们的实验室能够诱导小鼠受伤并使用活脑切片来记录神经元活动。您实际上可以在JoVE的网站上找到我们的视频之一。
该设备改变了TBI领域的游戏规则。它是目前在动物模型中诱导损伤的最广泛使用的方法,并为寻找更好的人类TBI治疗方法铺平了道路。