Il nostro protocollo dimostra come mantenere correttamente il dispositivo LFPI. Sottolinea l'importanza della pulizia e del monitoraggio di routine per evitare malfunzionamenti del dispositivo in caso di lesioni incoerenti. Quindi LFPI è un modello di lesione utilizzato per valutare TBI in vivo.
Riproduce da vicino le patologie associate al trauma cranico umano, rendendolo così uno dei metodi più ben definiti di TBI sperimentale. Dato che l'LFPI viene utilizzato per riprodurre i sintomi del trauma cranico umano, ci consente di impostare esperimenti che indagano diversi aspetti delle lesioni cerebrali traumatiche nella speranza di trovare misure terapeutiche. Le bolle d'aria nella porta di riempimento o nel trasduttore sono particolarmente difficili da rimuovere a causa della visibilità limitata in tali aree.
Quando riempi quelle aree, sii paziente, lento e attento a non introdurre aria. Per iniziare, staccare con attenzione le siringhe collegate all'alloggiamento del trasduttore e alla porta di riempimento e al cavo collegato al trasduttore di pressione. Svitare le manopole sul retro del dispositivo dai morsetti del cilindro per liberare il cilindro.
Rimuovere il pistone all'estremità del cilindro, del trasduttore, dell'alloggiamento del trasduttore e degli O-ring dello stantuffo. Drenare il liquido dal cilindro, aggiungere un detergente delicato come detersivo per piatti al cilindro e strofinare leggermente con un piatto o una spazzola per bottiglie. Per assicurarsi che tutto il detersivo sia completamente risciacquato, riempire il cilindro con acqua e risciacquare abbondantemente.
Applicare un sottile strato di vaselina allo stantuffo del pistone e collegare lo stantuffo del pistone con lo stantuffo che sporge di circa 32 millimetri dal cilindro. Applicare un sottile strato di vaselina anche agli altri O-ring e collegarli al cilindro ad eccezione dell'O-ring sulla porta di riempimento. Avvolgere il nastro di teflon due volte attorno ai fili del trasduttore.
Collegare una siringa da 10 millilitri riempita di fluido degassato e priva di bolle d'aria al mozzo Luer lock sull'alloggiamento del trasduttore. Tenere il trasduttore con l'estremità filettata rivolta verso l'alto e riempire completamente il pozzetto all'interno della regione filettata del trasduttore con il fluido degassato. L'obiettivo qui è quello di riempire bene il trasduttore senza introdurre bolle d'aria.
Fare attenzione a non danneggiare la delicata membrana sul fondo del pozzetto. Con il cilindro posizionato ad angolo per impedire all'aria di rientrare nell'alloggiamento del trasduttore, collegare l'alloggiamento del trasduttore al cilindro e utilizzare una chiave per stringerlo saldamente. Rimuovere il tappo dalla porta di riempimento e dal cilindro una volta che il fluido degassato raggiunge circa i due terzi della capacità del cilindro.
Posizionare il cilindro orizzontalmente e terminare di riempire il cilindro con fluido degassato. Riposizionare il tappo nella porta di riempimento e chiudere tutti i rubinetti di arresto. Manipolare il cilindro per far funzionare eventuali bolle d'aria fino alla porta di riempimento.
Aprire il rubinetto di arresto sulla porta di riempimento e iniettare fluido utilizzando la siringa sull'alloggiamento del trasduttore per forzare eventuali bolle d'aria fuori dalla porta. Ispezionare l'intero dispositivo e assicurarsi che non ci siano bolle d'aria. Aggiungere una siringa da 10 millilitri riempita di fluido degassato al mozzo Luer lock sul tappo di riempimento e riattaccare il cilindro alla base utilizzando le viti a mano.
Assicurarsi che il cilindro sia orizzontale e allineato con il centro del martello appesantito sul pendolo. L'immagine della forma d'onda della pressione prodotta da un dispositivo LFPI correttamente pulito e funzionante è mostrata in questa figura. Quando si esegue un infortunio o si testa il dispositivo LFPI, la forma d'onda della pressione dovrebbe mostrare un singolo picco acuto.
La presenza di bolle d'aria nel dispositivo si tradurrà in una forma d'onda con diversi picchi brevi. Le uscite dell'oscilloscopio per il non contaminato, 5 millilitri di iniezione d'aria, 10 millilitri di iniezione d'aria e 15 millilitri di iniezione d'aria sono mostrati qui. Le tecniche mostrate in questo video riducono la probabilità che i gas vengano introdotti nel dispositivo e aiutano a rimuovere eventuali piccole sacche di gas che potrebbero contaminare il fluido.
Pertanto, la rimozione delle bolle d'aria è il passo più cruciale da ricordare quando si utilizza il dispositivo LFPI. Quindi, dopo questa procedura, il nostro laboratorio è in grado di indurre lesioni nei topi e utilizzare fette di cervello vive per registrare l'attività neuronale. Puoi effettivamente trovare uno dei nostri video su questo sul sito web di JoVE.
Questo dispositivo è stato un punto di svolta nel mondo del TBI. Attualmente è il metodo più utilizzato per indurre lesioni nei modelli animali e ha spianato la strada alla ricerca di terapie migliori per il trauma cranico umano.
