Protokolümüz, LFPI cihazının nasıl düzgün bir şekilde korunacağını gösterir. Tutarsız yaralanmalarda cihazın arızalanmasını önlemek için rutin temizlik ve izlemenin önemini vurgulamaktadır. Yani LFPI, TBI'yı in vivo olarak değerlendirmek için kullanılan bir yaralanma modelidir.
İnsan TBI ile ilişkili patolojileri yakından üretir, böylece onu deneysel TBI'nın en iyi tanımlanmış yöntemlerinden biri haline getirir. LFPI'nin insan TBI semptomlarını çoğaltmak için kullanıldığı göz önüne alındığında, terapötik önlemler bulma umuduyla travmatik beyin yaralanmalarının farklı yönlerini araştıran deneyler yapmamıza izin verir. Dolum portundaki veya dönüştürücüdeki hava kabarcıklarının, bu alanlardaki sınırlı görünürlük nedeniyle çıkarılması özellikle zordur.
Bu alanları doldururken, hava girmemeye dikkat edin, sabırlı, yavaş ve dikkatli olun. Başlamak için, dönüştürücü muhafazasına ve dolum portuna bağlı şırıngaları ve basınç dönüştürücüsüne bağlı kabloyu dikkatlice çıkarın. Silindiri serbest bırakmak için cihazın arkasındaki el düğmelerini silindir kelepçelerinden sökün.
Silindirin, dönüştürücünün, dönüştürücü muhafazasının ve piston O-segmanlarının sonundaki pistonu çıkarın. Sıvıyı silindirden boşaltın, silindire bulaşık deterjanı gibi hafif bir deterjan ekleyin ve bir bulaşık veya şişe fırçası kullanarak hafifçe ovalayın. Tüm deterjanın tamamen durulandığından emin olmak için, silindiri suyla doldurun ve iyice durulayın.
Piston pistonuna ince bir petrol jölesi tabakası uygulayın ve piston pistonunu silindirden yaklaşık 32 milimetre çıkıntı yapan pistonla takın. Diğer O-ringlere de ince bir petrol jölesi tabakası uygulayın ve bunları dolum portundaki O-ring hariç silindire takın. Teflon bandı dönüştürücünün dişlerinin etrafına iki kez sarın.
Gazdan arındırılmış sıvı ile doldurulmuş ve hava kabarcıkları içermeyen 10 mililitrelik bir şırıngayı dönüştürücü muhafazasındaki Luer kilit göbeğine bağlayın. Transdüseri dişli ucu yukarı bakacak şekilde tutun ve transdüserin dişli bölgesinin içindeki kuyucuğu gazdan arındırılmış sıvı ile tamamen doldurun. Buradaki amaç, herhangi bir hava kabarcığı sokmadan dönüştürücüyü iyice doldurmaktır.
Kuyunun dibindeki hassas membrana zarar vermemeye dikkat edin. Silindir, havanın transdüser mahfazasına tekrar girmesini önlemek için bir açıyla yerleştirildiğinde, transdüser mahfazasını silindire takın ve sıkıca sıkmak için bir anahtar kullanın. Gazdan arındırılmış sıvı silindir kapasitesinin yaklaşık üçte ikisine ulaştığında kapağı dolum portundan ve silindirden çıkarın.
Silindiri yatay olarak yerleştirin ve silindiri gazdan arındırılmış sıvı ile doldurmayı bitirin. Dolum portundaki kapağı yerine takın ve tüm tapaları kapatın. Herhangi bir hava kabarcığını dolum portuna çalıştırmak için silindiri manipüle edin.
Dolum portundaki stopcock'u açın ve herhangi bir hava kabarcığını porttan dışarı itmek için transdüser muhafazasındaki şırıngayı kullanarak sıvı enjekte edin. Tüm cihazı inceleyin ve hava kabarcığı olmadığından emin olun. Dolum kapağındaki Luer kilit göbeğine gazdan arındırılmış sıvı ile doldurulmuş 10 mililitrelik bir şırınga ekleyin ve el vidalarını kullanarak silindiri tabana yeniden takın.
Silindirin yatay olduğundan ve sarkaç üzerindeki ağırlıklı çekicin merkezi ile sıralandığından emin olun. Düzgün temizlenmiş ve çalışan bir LFPI cihazı tarafından üretilen basınç dalga formunun görüntüsü bu şekilde gösterilmiştir. Bir yaralanma gerçekleştirirken veya LFPI cihazını test ederken, basınç dalga formu tek bir keskin tepe noktası göstermelidir.
Cihazdaki hava kabarcıklarının varlığı, birkaç kısa tepe noktasına sahip bir dalga formu ile sonuçlanacaktır. Kirlenmemiş, 5 mililitre hava enjeksiyonu, 10 mililitre hava enjeksiyonu ve 15 mililitre hava enjeksiyonu için osiloskop çıkışları burada gösterilmiştir. Bu videoda gösterilen teknikler, gazların cihaza girme olasılığını azaltır ve sıvıyı kirletebilecek küçük gaz ceplerinin giderilmesine yardımcı olur.
Bu nedenle, hava kabarcıklarının çıkarılması, LFPI cihazını kullanırken hatırlanması gereken en önemli adımdır. Bu prosedürden sonra, laboratuvarımız farelerde yaralanmalara neden olabilir ve nöronal aktiviteyi kaydetmek için canlı beyin dilimleri kullanabilir. Bu konudaki videolarımızdan birini JoVE'nin web sitesinde bulabilirsiniz.
Bu cihaz TBI dünyasında bir oyun değiştirici olmuştur. Şu anda hayvan modellerinde yaralanmaya neden olmak için en yaygın kullanılan yöntemdir ve insan TBI için daha iyi terapötikler bulmanın yolunu açmıştır.
