Notre protocole montre comment entretenir correctement le périphérique LFPI. Il souligne l’importance d’un nettoyage et d’une surveillance de routine pour éviter les dysfonctionnements de l’appareil en cas de blessures incohérentes. Le LFPI est donc un modèle de blessure utilisé pour évaluer les traumatismes crâniens in vivo.
Il reproduit étroitement les pathologies associées au TCC humain, ce qui en fait l’une des méthodes les mieux définies de TCC expérimental. Étant donné que le LFPI est utilisé pour reproduire les symptômes du TCC humain, il nous permet de mettre en place des expériences qui étudient différents aspects des lésions cérébrales traumatiques dans l’espoir de trouver des mesures thérapeutiques. Les bulles d’air dans l’orifice de remplissage ou le transducteur sont particulièrement difficiles à éliminer en raison de la visibilité limitée dans ces zones.
Lorsque vous remplissez ces zones, soyez patient, lent et prudent pour ne pas introduire d’air. Pour commencer, détachez délicatement les seringues attachées au boîtier du transducteur et à l’orifice de remplissage et le câble connecté au transducteur de pression. Dévissez les poignées à l’arrière de l’appareil des pinces de cylindre pour libérer le cylindre.
Retirez le piston à l’extrémité du cylindre, du transducteur, du boîtier du transducteur et des joints toriques du piston. Égoutter le liquide hors du cylindre, ajouter un détergent doux tel que du détergent à vaisselle dans le cylindre et frotter légèrement à l’aide d’une brosse à vaisselle ou d’une brosse à bouteille. Pour vous assurer que tout le détergent est complètement rincé, remplissez le cylindre d’eau et rincez abondamment.
Appliquez une fine couche de vaseline sur le piston du piston et fixez le piston du piston avec le piston dépassant d’environ 32 millimètres du cylindre. Appliquez également une fine couche de vaseline sur les autres joints toriques et fixez-les au cylindre, à l’exception du joint torique sur l’orifice de remplissage. Enroulez deux fois le ruban téflon autour des filetages du transducteur.
Connectez une seringue de 10 millilitres remplie de liquide dégazé et exempte de bulles d’air au moyeu de verrouillage Luer sur le boîtier du transducteur. Tenez le transducteur avec l’extrémité filetée pointant vers le haut et remplissez complètement le puits à l’intérieur de la région filetée du transducteur avec le fluide dégazé. Le but ici est de bien remplir le transducteur sans introduire de bulles d’air.
Veillez à ne pas endommager la membrane délicate au fond du puits. Avec le cylindre placé à un angle pour empêcher l’air de pénétrer à nouveau dans le boîtier du transducteur, fixez le boîtier du transducteur au cylindre et utilisez une clé pour le serrer solidement. Retirez le bouchon de l’orifice de remplissage et de la bouteille une fois que le liquide dégazé atteint environ les deux tiers de la cylindrée.
Placez le cylindre horizontalement et finissez de remplir le cylindre avec du liquide dégazé. Replacez le bouchon au niveau de l’orifice de remplissage et fermez tous les robinets d’arrêt. Manipulez le cylindre pour faire travailler les bulles d’air vers l’orifice de remplissage.
Ouvrez le robinet d’arrêt sur l’orifice de remplissage et injectez du liquide à l’aide de la seringue sur le boîtier du transducteur pour forcer les bulles d’air hors de l’orifice. Inspectez l’ensemble de l’appareil et assurez-vous qu’il n’y a pas de bulles d’air. Ajoutez une seringue de 10 millilitres remplie de liquide dégazé au moyeu de verrouillage Luer sur le bouchon de remplissage et rattachez le cylindre à la base à l’aide des vis à main.
Assurez-vous que le cylindre est horizontal et aligné avec le centre du marteau lesté sur le pendule. L’image de la forme d’onde de pression produite par un dispositif LFPI correctement nettoyé et fonctionnel est montrée dans cette figure. Lors d’une blessure ou d’un test du dispositif LFPI, la forme d’onde de pression doit montrer un seul pic aigu.
La présence de bulles d’air dans l’appareil se traduira par une forme d’onde avec plusieurs pics courts. Les sorties de l’oscilloscope pour les non contaminés, 5 millilitres d’injection d’air, 10 millilitres d’injection d’air et 15 millilitres d’injection d’air sont indiquées ici. Les techniques présentées dans cette vidéo réduisent la probabilité d’introduction de gaz dans l’appareil et aident à éliminer les petites poches de gaz susceptibles de contaminer le fluide.
Par conséquent, l’élimination des bulles d’air est l’étape la plus cruciale à retenir lors de l’utilisation de l’appareil LFPI. Ainsi, après cette procédure, notre laboratoire est capable d’induire des blessures chez la souris et d’utiliser des tranches de cerveau vivantes afin d’enregistrer l’activité neuronale. Vous pouvez d’ailleurs trouver l’une de nos vidéos à ce sujet sur le site Web de JoVE.
Cet appareil a changé la donne dans le monde du TBI. C’est actuellement la méthode la plus largement utilisée pour induire des lésions dans les modèles animaux et a ouvert la voie à la découverte de meilleurs traitements pour les traumatismes crâniens humains.
