우리의 프로토콜은 LFPI 장치를 올바르게 유지 관리하는 방법을 보여줍니다. 일관되지 않은 부상으로 인한 장치의 오작동을 방지하기 위해 일상적인 청소 및 모니터링의 중요성을 강조합니다. 따라서 LFPI는 생체 내에서 TBI를 평가하는 데 사용되는 부상 모델입니다.
그것은 인간 TBI와 관련된 병리를 밀접하게 재현하여 실험적 TBI의 가장 잘 정의 된 방법 중 하나입니다. LFPI가 인간의 TBI 증상을 재현하는 데 사용된다는 점을 감안할 때 치료 방법을 찾기 위해 외상성 뇌 손상의 다양한 측면을 조사하는 실험을 설정할 수 있습니다. 주입 포트 또는 변환기의 기포는 해당 영역의 제한된 가시성으로 인해 제거하기가 특히 어렵습니다.
이러한 영역을 채울 때 인내심을 갖고 천천히 공기가 유입되지 않도록 주의하십시오. 시작하려면 트랜스듀서 하우징에 부착된 주사기를 조심스럽게 분리하고 포트와 압력 트랜스듀서에 연결된 케이블을 채웁니다. 실린더 cl에서 장치 뒷면의 손잡이를 풉니다.amps는 실린더를 해제합니다.
실린더 끝에서 피스톤, 변환기, 변환기 하우징 및 플런저 O-링을 제거합니다. 실린더에서 액체를 배출하고 식기 세척 세제와 같은 중성 세제를 실린더에 넣고 접시나 병 브러시를 사용하여 가볍게 문지릅니다. 모든 세제를 완전히 헹구려면 실린더에 물을 채우고 철저히 헹굽니다.
피스톤 플런저에 바셀린을 얇게 바르고 실린더에서 약 32mm 돌출된 플런저로 피스톤 플런저를 부착합니다. 다른 O-링에도 바셀린을 얇게 바르고 충전 포트의 O-링을 제외한 실린더에 부착합니다. 테프론 테이프를 변환기의 나사산 주위에 두 번 감습니다.
탈기된 유체로 채워지고 기포가 없는 10밀리리터 주사기를 변환기 하우징의 Luer 잠금 허브에 연결합니다. 나사산 끝이 위쪽을 향하도록 변환기를 잡고 변환기의 나사산 영역 내부의 웰을 탈기된 유체로 완전히 채웁니다. 여기서 목표는 기포가 유입되지 않고 변환기를 잘 채우는 것입니다.
우물 바닥의 섬세한 멤브레인이 손상되지 않도록주의하십시오. 공기가 변환기 하우징으로 다시 들어가는 것을 방지하기 위해 실린더를 비스듬히 배치한 상태에서 변환기 하우징을 실린더에 부착하고 렌치를 사용하여 꼭 맞게 조입니다. 탈기된 유체가 실린더 용량의 약 2/3에 도달하면 충전 포트와 실린더에서 캡을 제거합니다.
실린더를 수평으로 놓고 실린더에 탈기된 유체를 채우는 작업을 마칩니다. 주입 포트의 캡을 교체하고 모든 스톱콕을 닫습니다. 실린더를 조작하여 채우기 포트에 기포가 흐르도록 합니다.
주입 포트의 마개를 열고 변환기 하우징의 주사기를 사용하여 유체를 주입하여 기포를 포트 밖으로 밀어냅니다. 전체 장치를 검사하고 기포가 없는지 확인하십시오. 탈기된 유체로 채워진 10밀리리터 주사기를 충전 캡의 Luer 잠금 허브에 추가하고 핸드 나사를 사용하여 실린더를 베이스에 다시 부착합니다.
실린더가 수평이고 진자에 있는 가중 해머의 중심과 일직선이 되도록 합니다. 적절하게 청소되고 작동하는 LFPI 장치에 의해 생성된 압력 파형의 이미지가 이 그림에 나와 있습니다. 부상을 수행하거나 LFPI 장치를 테스트할 때 압력 파형에 하나의 날카로운 피크가 표시되어야 합니다.
장치에 기포가 있으면 여러 개의 짧은 피크가 있는 파형이 생성됩니다. 오염되지 않은 5 밀리리터의 공기 주입, 10 밀리리터의 공기 주입 및 15 밀리리터의 공기 주입에 대한 오실로스코프 출력이 여기에 표시됩니다. 이 비디오에 표시된 기술은 가스가 장치에 유입될 가능성을 줄이고 유체를 오염시킬 수 있는 작은 가스 주머니를 제거하는 데 도움이 됩니다.
따라서 기포를 제거하는 것은 LFPI 장치를 사용할 때 기억해야 할 가장 중요한 단계입니다. 따라서이 절차 후에 우리 연구실은 생쥐의 부상을 유도하고 살아있는 뇌 조각을 사용하여 신경 활동을 기록 할 수 있습니다. 실제로 JoVE 웹사이트에서 이에 대한 비디오 중 하나를 찾을 수 있습니다.
이 장치는 TBI 세계의 게임 체인저였습니다. 현재 동물 모델에서 부상을 유도하는 데 가장 널리 사용되는 방법이며 인간 TBI에 대한 더 나은 치료법을 찾는 길을 열었습니다.
