資金調達：この作品はスチュアートHQ＆ビクトリア泉博士号を取得する前のフェローシップ（RMW）、NIHパイオニア賞（RAS）によってサポートされていた

一般的な健康診断一般的な健康検査のより包括的な治療は私のマウスと何が悪いか 、ジャクリーヌローリーの優れた行動表現型リソースで見つけることができますか？1。まず、被験者の一般的な健康状態を評価するために修正された観測テストのバッテリーを使用してください。バッテリーはすぐにさらにテストには不向きとなるそれらの主題を識別するために、サミュエルアーウィンの包括的なアセスメントのプロトコル2から項目が含まれています。簡単に言えば、修正されたバッテリーは、物理的に異常な動物を識別します（例：重度の過少または過体重、不十分な手入れ、呼吸困難）またはその展示異常な姿勢、運動や行動。これらすべては、病気の症状である可能性があります。同様に不健康な被験者を識別する任意の初期評価が適切です。 それは、その後のテスト中だけでなく、両方の一般的な健康診断時に人道的に使用される動物に注意することも重要です。これらのテストは、任意の潜在的に痛みを伴う処置を内蔵していないため、どの麻酔または鎮痛は使用されません。 嗅覚感度試験この試験は、マウスの2つのグループ（例えば、野生型と動物の変異体群）との間の嗅覚感度の違いを検出するように設計されています。このテストでは、香りの複数の希釈液が作られています。ナイーブな動物は、この香りの単一の希釈を調査し、全体の探索時間は（3分以内）に記録されます。香りの複数の希釈液を別の、ナイーブな被験者でテストされているため、合計探索時間は、マウスの各群の用量反応曲線を生成するために使用されます。 2人の研究者は被験者の遺伝子型および/または状態への1つブラインドで、テストに関与する必要があります。 主な研究者<ol><li>すべての寝具せずに4きれいなケージを（8 H × 10 W × 18 L、インチ単位）、入手してください。バイオセーフティキャビネット内の4つのケージをラインアップ。 </li><li>不透明な濾紙を用いて、各競技場の間にパーティションを設定します。ケージの側面や底面などの黒側の行は、最後のパーティションにわたって黒いポスターボードを置きます。光が舞台を照らすようにするプレキシガラスの明確な部分を舞台の上をカバーしています。 （） <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_8/figure1new.png" alt="図1" /> （B） <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_9/image15.png" alt="図1.5" /> 図1。アリーナは、アップセット。（）が正常にドレープ、空のアリーナ（b）のアリーナを対象と香りのろ紙で。 </li> <li>科目をhabituating始める。馴化のための最初のケージの最初の主題を置きます。 15分後、第二ケージへの最初の対象を移動する。 QuatricideのTBとの最初のケージを清掃してください。次に、最初に、洗浄ケージで第2主題を置く。その後の科目で、このプロセスを続けます。最終的に、各被験者は、試験前に慣れの別の15分間の舞台（4番目と最後のケージ）に配置される前にすべての3つのケージに慣らしてください。 </li></ol>ブラインド研究者<ol><li>香りのサンプル用ろ紙の2インチの正方形で2インチの適切な数を作る。 </li><li>事前に選択された香りを使用して、適切に希釈する。このようなピーナッツバターのような疎水性試料の場合、溶媒として油を使用し、すべての他人のために、蒸留水を使用してください。渦。 </li><li>全体ケージの端にフォーカスがあるように生物学的安全キャビネットの遠端でデジタルビデオ録画デバイスを設定します。パラメータが適切であることを確認するために予備のビデオを取る。 </li><li>希釈は試験の順番をランダムに注意しながら、テストされる順序を記録します。 </li><li>対象のごみと識別番号を記録します。 </li><li>いったん主題は第一審のために準備を開始、アリーナで15分間馴化されています。ろ紙の正方形の上にピペッティングの前に円錐管の上下に最初の希釈をピペット。ろ紙の表面には最適〜85％の覆われた（溶液の約0.50 MLS）でなければなりません。ろ紙が過度に飽和されていないことを確認しキムワイプを使用してください。 </li><li>ビデオ録画を開始します。 </li><li>動物の現在の位置の反対側にケージ内のろ紙の四角を置きます。 </li><li>時間を計り始める。 </li><li> 3分後、録音を停止し、希釈した香りを取り外します。 </li><li>唯一の香り（例えば、シナモンが）かどうかが判定される場合、競技場からの最初の被験者を削除します。適切に各科目の香りを希釈し、各動物のための手順6-11を繰り返します。複数の香りをテストする場合は、しかし、アリーナからテスト対象を削除しないでください。代わりに、時間を計り始める。 </li><li>適切に上記と同じ方法を使用して、次の香りを希釈する。 </li><li> 1分後、ビデオ録画を開始します。動物の現在のpositioの反対側にケージ内の次の香りの希釈でろ紙の正方形を配置N. </li><li>各試験のためのビデオファイルの番号を指摘し、それぞれの香りの手順6-13を繰り返します。 </li><li>各科目の6月14日の手順を繰り返します。 <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_10/image2new.png" alt="図2" /> 図2。嗅覚の感度テストのセッションのための代表的な結果。各マウス対照群（グループA）または実験群のいずれかから（グループB）は、1ヶ月、3分間のセッションのためにろ紙上にシナモンのエキス、5種類の希釈液のいずれかにさらされていた。合計時間は、ろ紙を評価した探検過ごした。グループのマウスは、グループBのそれらよりも大きい嗅覚感度を持っている</li></ol>嗅覚環境設定のテストこのテストは、すなわち、特定の検出欠陥、魅力的または嫌悪香りを感知する能力を識別するために設計されています。次の手順では、小早川、K.、ら3のプロトコルから寛大に借りる。再び、2人の研究者は被験者の遺伝子型および/または状態への1つブラインドで、テストに関与する必要があります。総探索時間は再び様々な香りのために（ビデオの視聴時に）記録されます。水よりも少ない時間を持つ者が、&quot;嫌悪&quot;と呼ばれている間、水よりも大きな総探索時間を持つそれらの香りは、&quot;魅力的&quot;として指定されています。研究者は、同じ香りが別の被験者は&quot;魅力的&quot;や&quot;嫌悪&quot;であるかどうかを検討する。 主な研究者のための嗅覚感度テストセクションの手順1〜3に従ってください。 ブラインド研究員嗅覚嗜好テストのための手順は、ステップ2とステップ4の若干の修正で、同じです。盲目の研究者のための嗅覚感度テストセクションの手順1-15に従ってください、次の変更で：ステップ2の場合、事前に選択された香りを（魅力と嫌悪の両方香りの組み合わせ）を使用して、各の適切に希釈したソリューションを作るコニカルチューブ。このようなピーナッツバターのような疎水性試料の場合、溶媒として油を使用し、すべての他人のために、蒸留水を使用してください。渦。ステップ4の場合、むしろテストする希釈を記録するよりも、試験の順番をランダム化、テストされる様々な香りの順番を記録。 このテストは、すなわち、特定の検出欠陥、魅力的または嫌悪香りを感知する能力を識別するために設計されています。次の手順では、小早川、K. らのプロトコルから寛大に借りる。3。再び、2人の研究者は被験者の遺伝子型および/または状態への1つブラインドで、テストに関与する必要があります。総探索時間は再び様々な香りのために（ビデオの視聴時に）記録されます。水よりも少ない時間を持つ者が、&quot;嫌悪&quot;と呼ばれている間、水よりも大きな総探索時間を持つそれらの香りは、&quot;魅力的&quot;として指定されています。研究者は、同じ香りが別の被験者は&quot;魅力的&quot;や&quot;嫌悪&quot;であるかどうかを検討する。 主な研究者のための嗅覚感度テストセクションの手順1〜3に従ってください。 ブラインド研究員嗅覚嗜好テストのための手順は、手順2、4および13の若干の修正で、同じです。盲目の研究者のための嗅覚感度テストセクションの手順1-15に従ってください、次の変更で：ステップ2の場合、事前に選択された香りを（魅力と嫌悪の両方香りの組み合わせ）を使用して、各の適切に希釈したソリューションを作るコニカルチューブ。このようなピーナッツバターのような疎水性試料の場合、溶媒として油を使用し、すべての他人のために、蒸留水を使用してください。渦。ステップ4の場合、むしろテストする希釈を記録するよりも、各試験での順序をランダム化、テストされる様々な香りの順番を記録。手順13の場合は、動物の現在の位置の反対側にケージ内の次の香りとろ紙の正方形を配置。 <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_11/image3new.png" alt="図3" /> 図3。嗅覚嗜好テストのセッションのための代表的な結果。各マウスは、1、3分のセッションのためのろ紙上の異なる香りの各々に暴露された。合計時間は、ろ紙を評価した探検過ごした。ピーナッツバターとバニラが魅力的な香りです（探索時間の香り &gt;探索時間の水 ）と2 -メチル酪酸は（探索時の香り &lt;探索時の水 ）嫌悪です。 嗅覚テストの得点嗅覚感度と好みのビデオのすべてを取得した後、それは合計時間ごとに希釈/香りの探索にかかる時間を分析する必要がある。ブラインド研究者が一貫性を保つためにビデオのすべてを分析しています。 <ol><li> VIDをプレビューするEO、以下に留意する：a）ろ紙を舞台に置かれるとき、B）マウスがろ紙に近づくと、C）マウスは、ろ紙を調査するとき、およびd）3分のときにフィルタから（経過したとき紙は）アリーナに置かれた。マウスの行動に焦点を当てるタイミングを知ることで、より簡単正確に調査の際の探索に費やされた総時間を獲得できるようになります。 </li><li>ビデオを確認。マウスが最初にろ紙（待ち時間）を調査する時間に注意してください。 </li><li>ストップウォッチ、アリーナにろ紙を置くことの3分以内にすべての調査の時間を使う。調査の時は、マウスの鼻孔がろ紙から&lt;1 mmのあるすべての時間として定義されます。それはマウスがろ紙に近接している時間のいずれかを含むようにすることが重要ですが、積極的に調査されていません。総探索時間に紙の上に座っての紙または発作を咀嚼し、舐めるの発作を含めないでください。それは正確に嗅覚行動を分析するためにこれらのルールに密接にし、一貫して遵守する必要があります。 </li><li>記録的な待ち時間は、合計時間は、ろ紙とビデオのファイル番号を調べる過ごした。 </li></ol>

<ol>
	<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What&amp;rsquo;s+Wrong+with+my+Mouse?+Behavioral+Phenotyping+of+Transgenic+and+Knockout+Mice.">What&amp;rsquo;s Wrong with my Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice.</a> , 42-60 (2007).</li><li>Irwin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+observational+assessment:+Ia.+A+systematic,+quantitative+procedure+for+assessing+the+behavioral+and+physiologic+state+of+the+mouse.">Comprehensive observational assessment: Ia. A systematic, quantitative procedure for assessing the behavioral and physiologic state of the mouse.</a> Psychopharmacologia. 13, 222-257 (1968).</li><li>Kobayakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb.">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450, 503-508 (2007).</li></ol>

前述のテストでは、基本的な嗅覚機能の迅速かつ信頼性の高い評価が可能になります。それは、この信頼性はテストのための被験者の適切な選択と準備が必要であること、しかしながら、見過ごされるべきではない。病気またはその他の無能力である動物は、しばしば矛盾した被験者です。また、被験者の慣れが重要です。我々は、馴化過程で複数のケージの使用は、動物は実験者が処理し?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>2-Methylbutyric acid</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>W269506</td>
<td>Concentrations Used:9.16 x 10-1 &#x2013; 10-8 M 
(in H20)</td>
</tr>
<tr>
<td>Pure Vanilla Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>McCormick & Co</td>
<td>n/a</td>
<td>Concentrations Used:10-1 &#x2013; 10-5 dilution 
(in H20)</td>
</tr>
<tr>
<td>Peanut Butter (Skippy, Extra Crunchy)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Unilever</td>
<td>n/a</td>
<td>Concentrations Used:10% (w/v), in mineral oil</td>
</tr>
<tr>
<td>Cinnamon Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>McCormick & Co</td>
<td>n/a</td>
<td>Concentrations Used:10-1 &#x2013; 10-5 dilution 
(in H20)</td>
</tr>
<tr>
<td>Mineral Oil, light</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>O121-1</td>
<td>Concentrations Used:N/A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

olfactory behavioral testing in the adult mouse

げっ歯類の嗅覚系は、そのステレオタイプが、まだアクセス可能な回路のシステムバイオロジーで、一部では、研究科学者、に関心を増加させるものである。さらに、生物の存続期間全体で新しい神経細胞を生成するために、この地域のユニークな能力が、それ同様に発達し、再生生物学者のための魅力的なシステムです。そのような関心は嗅覚機能の迅速な、まだ信頼性の評価のための手段が必要となる。嗅覚能力の多くのテストは、複雑な変数または特別にマウス用に設計されていません。また、いくつかのテストは記憶障害だけでなく、嗅覚の能力の欠陥、交絡得られた結果に敏感です。 ここで、我々は、嗅覚の感度と好みの欠陥を識別するために設計されたテストのシンプルなバッテリーについて説明。最初に、初期の一般的な健康状態の評価は、さらなるテストに適した動物を識別することができます。第二に、マウスは、しきい値の違いがあるかどうかを確認するために香りの種々の希釈にさらされている。第三に、マウス嗅覚嗜好の評価を可能にする様々な香り、魅力と嫌悪の両方、が表示されます。これらの簡単な研究は、様々なリソースと専門知識のラボのためのアクセス可能な嗅覚行動の初期特性評価を行う必要があります。

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Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

げっ歯類の嗅覚系の基本的な、まだユニークな特性は、生物学者の間で、その増加の研究につながっている。その機能の比較的単純な評価は、その後も必要になります。ここでは、マウス嗅覚感度と好みのキャラクタリゼーションのための敏感なテストについて説明します。

成体マウスでの嗅覚行動試験

The rodent olfactory system is of increasing interest to scientists, studied, in part, in systems biology because of its stereotyped, yet accessible ...

olfactory-behavioral-testing-in-the-adult-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

19.4K ビュー.  Dana Farber Cancer Institute. げっ歯類の嗅覚系の基本的な、まだユニークな特性は、生物学者の間で、その増加の研究につながっている。その機能の比較的単純な評価は、その後も必要になります。ここでは、マウス嗅覚感度と好みのキャラクタリゼーションのための敏感なテストについて説明します。

ビデオ: Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

アダルトキイロショウジョウバエのロコモーションの高解像度のビデオトラッキング

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

生物学

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

生体イメージングおよび卵巣癌の同所性マウスモデルにおける治療的処置の

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, this method makes it difficult to know how much reagent is absorbed or taken up per fish. Some experimental questions, particularly those related to metabolic studies, may be better addressed by delivering a defined quantity to each fish, based on weight. Here we present a method for intraperitoneal (IP) injection into adult zebrafish. Injection is into the abdominal cavity, posterior to the pelvic girdle. This procedure is adapted from veterinary methods used for larger fish. It is safe, as we have observed zero mortality. Additionally, we have seen bleeding at the injection site in only 5 out of 127 injections, and in each of those cases the bleeding was brief, lasting several seconds, and the quantity of blood lost was small. Success with this procedure requires gentle handling of the fish through several steps including fasting, weighing, anesthetizing, injection, and recovery. Precautions are required to minimize stress throughout the procedure. Our precautions include using a small injection volume and a 35G needle. We use Cortland salt solution as the vehicle, which is osmotically balanced for freshwater fish. Aeration of the gills is maintained during the injection procedure by first bringing the fish into a surgical plane of anesthesia, which allows slow operculum movements, and second, by holding the fish in a trough within a water-saturated sponge during the injection itself. We demonstrate the utility of IP injection by injecting glucose and monitoring the rise in blood glucose level and its subsequent return to normal. As stress is known to increase blood glucose in teleost fish, we compare blood glucose levels in vehicle-injected and non-injected adults and show that the procedure does not cause a significant rise in blood glucose.

We demonstrate intraperitoneal injection into adult zebrafish. We use a 10 &mu;l NanoFil microsyringe controlled by a Micro4 controller and UltraMicroPump III. This demonstration includes the use of cold water as an anesthetic.

アダルトゼブラフィッシュへの腹腔内注射

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also produce a source of patient-matched cells for regenerative therapies. iPSCs may be generated using multiple protocols and derived from multiple cell sources. Once generated, iPSCs are tested using a variety of assays including immunostaining for pluripotency markers, generation of three germ layers in embryoid bodies and teratomas, comparisons of gene expression with embryonic stem cells (ESCs) and production of chimeric mice with or without germline contribution2. Importantly, iPSC lines that pass these tests still vary in their capacity to produce different differentiated cell types2. This has made it difficult to establish which iPSC derivation protocols, donor cell sources or selection methods are most useful for different applications.
The most stringent test of whether a stem cell line has sufficient developmental potential to generate all tissues required for survival of an organism (termed full pluripotency) is tetraploid embryo complementation (TEC)3-5. Technically, TEC involves electrofusion of two-cell embryos to generate tetraploid (4n) one-cell embryos that can be cultured in vitro to the blastocyst stage6. Diploid (2n) pluripotent stem cells (e.g. ESCs or iPSCs) are then injected into the blastocoel cavity of the tetraploid blastocyst and transferred to a recipient female for gestation (see Figure 1). The tetraploid component of the complemented embryo contributes almost exclusively to the extraembryonic tissues (placenta, yolk sac), whereas the diploid cells constitute the embryo proper, resulting in a fetus derived entirely from the injected stem cell line.
Recently, we reported the derivation of iPSC lines that reproducibly generate adult mice via TEC1. These iPSC lines give rise to viable pups with efficiencies of 5-13%, which is comparable to ESCs3,4,7 and higher than that reported for most other iPSC lines8-12. These reports show that direct reprogramming can produce fully pluripotent iPSCs that match ESCs in their developmental potential and efficiency of generating pups in TEC tests. At present, it is not clear what distinguishes between fully pluripotent iPSCs and less potent lines13-15. Nor is it clear which reprogramming methods will produce these lines with the highest efficiency. Here we describe one method that produces fully pluripotent iPSCs and "all- iPSC" mice, which may be helpful for investigators wishing to compare the pluripotency of iPSC lines or establish the equivalence of different reprogramming methods.

Generating induced pluripotent stem cell (iPSC) lines produces lines of differing developmental potential even when they pass standard tests for pluripotency. Here we describe a protocol to produce mice derived entirely from iPSCs, which defines the iPSC lines as possessing full pluripotency1.

人工多能性幹細胞に由来するマウスの作製

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Gavaging Adult Zebrafish

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or agents in solutions for scientific research. Current methods for administering compounds orally to adult zebrafish are inaccurate due to variability in voluntary consumption by the fish. A gavage procedure was developed to deliver precise quantities of infectious agents to zebrafish for study in biomedical research. Adult zebrafish over 6 months of age were anesthetized with 150 mg/L of buffered MS-222 and gavaged with 5 &mu;l of solution using flexible catheter implantation tubing attached to a cut 22-G needle tip. The flexible tubing was lowered into the oral cavity of the zebrafish until the tip of the tubing extended past the gills (approximately 1 cm). The solution was then injected slowly into the intestinal tract. This method was effective 88% of the time, with fish recovering uneventfully. This procedure is also efficient as one person can gavage 20-30 fish in one hour. This method can be used to precisely administer agents for infectious diseases studies, or studies of other compounds in adult zebrafish.

The increasing use of zebrafish as an animal model requires the development of effective methods for the delivery of known quantities of compounds and solutions. The gavage procedure described below allows for the oral delivery of precise volumes of solution reliably, safely and efficiently to adult zebrafish.

Gavagingアダルトゼブラフィッシュ

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse incisor provides a model for these processes. This remarkable organ grows continuously throughout the animal&#39;s life and generates all the necessary cell types from active pools of adult stem cells housed in the labial (toward the lip) and lingual (toward the tongue) cervical loop (CL) regions. Only the dental stem cells from the labial CL give rise to ameloblasts that generate enamel, the outer covering of teeth, on the labial surface. This asymmetric enamel formation allows abrasion at the incisor tip, and progenitors and stem cells in the proximal incisor ensure that the dental tissues are constantly replenished. The ability to isolate and grow these progenitor or stem cells in vitro allows their expansion and opens doors to numerous experiments not achievable in vivo, such as high throughput testing of potential stem cell regulatory factors. Here, we describe and demonstrate a reliable and consistent method to culture cells from the labial CL of the mouse incisor.

The continuously growing mouse incisor provides a model for studying renewal of dental tissues from dental epithelial stem cells (DESCs). A robust system for consistently and reliably obtaining these cells from the incisor and expanding them in vitro is reported here.

成体マウス切歯から歯科上皮幹細胞の単離および培養

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a prerequisite for studying the physiology of the isolated organ and for many innovative applications that may be possible in the future, including perfusion decellularization for kidney bioengineering or the administration of anti-rejection or genome-editing drugs in high doses to prime the kidney for transplantation. During the time of the perfusion, the kidney can be manipulated, renal function can be assessed, and various pharmaceuticals administered. After the procedure, the kidney can be transplanted or processed for molecular biology, biochemical analysis, or microscopy.
This paper describes the perfusate and the surgical technique needed for the ex vivo perfusion of mouse kidneys. Details of the perfusion apparatus are given and data are presented showing the viability of the kidney&#39;s preparation: renal blood flow, vascular resistance, and urine data as functional, transmission electron micrographs of different nephron segments as morphological readouts, and western blots of transport proteins of different nephron segments as molecular readout.

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. The buffers and surgical technique are described in detail.

マウス単離された灌流腎臓テクニック

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

トランス内部細胞のキメリズム率が高いため、胚性幹細胞の大量注入

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina propria. EGCs play important roles in gut homeostasis through the release of various trophic factors and contribute to the integrity of the epithelial barrier. Most studies of primary enteric glial cultures use cells isolated from the myenteric plexus after enzymatic dissociation. Here, a non-enzymatic method to isolate and culture EGCs from the intestinal submucosa and lamina propria is described. After manual removal of the longitudinal muscle layer, EGCs were liberated from the lamina propria and submucosa using sequential HEPES-buffered EDTA incubations followed by incubation in commercially available non-enzymatic cell recovery solution. The EDTA incubations were sufficient to strip most of the epithelial mucosa from the lamina propria, allowing the cell recovery solution to liberate the submucosal EGCs. Any residual lamina propria and smooth muscle was discarded along with the myenteric glia. EGCs were easily identified by their ability to express glial fibrillary acidic protein (GFAP). Only about 50% of the cell suspension contained GFAP+ cells after completing tissue incubations and prior to plating on the poly-D-lysine/laminin substrate. However, after 3 days of culturing the cells in glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF)-containing culture media, the cell population adhering to the substrate-coated plates comprised of &#62;95% enteric glia. We created a hybrid mouse line by breeding a hGFAP-Cre mouse to the ROSA-tdTomato reporter line to track the percentage of GFAP+ cells using endogenous cell fluorescence. Thus, non-myenteric enteric glia can be isolated by non-enzymatic methods and cultured for at least 5 days.

Here, we describe the isolation of enteric-glial cells from the intestinal-submucosa using sequential EDTA incubations to chelate divalent cations and then incubation in non-enzymatic cell recovery solution. Plating the resultant cell suspension on poly-D-lysine and laminin results in a highly enriched culture of submucosal glial cells for functional analysis.

粘膜と粘膜固有層において大人のマウスから腸のグリア細胞の分離

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead myocardium after MI. Although several strategies have been used to regenerate myocardium, stem cell therapy remains a major approach to replenish the dead myocardium of an MI heart. Accumulating evidence suggests the presence of resident cardiac stem cells (CSCs) in the adult heart and their endocrine and/or paracrine effects on cardiac regeneration. However, CSC isolation and their characterization and differentiation toward myocardial cells, especially cardiomyocytes, remains a technical challenge. In the present study, we provided a simple method for the isolation, characterization, and differentiation of CSCs from the adult mouse heart. Here, we describe a density gradient method for the isolation of CSCs, where the heart is digested by a 0.2% collagenase II solution. To characterize the isolated CSCs, we evaluated the expression of CSCs/cardiac markers Sca-1, NKX2-5, and GATA4, and pluripotency/stemness markers OCT4, SOX2, and Nanog. We also determined the proliferation potential of isolated CSCs by culturing them in a Petri dish and assessing the expression of the proliferation marker Ki-67. For evaluating the differentiation potential of CSCs, we selected seven- to ten-days cultured CSCs. We transferred them to a new plate with a cardiomyocyte differentiation medium. They are incubated in a cell culture incubator for 12 days, while the differentiation medium is changed every three days. The differentiated CSCs express cardiomyocyte-specific markers: actinin and troponin I. Thus, CSCs isolated with this protocol have stemness and cardiac markers, and they have a potential for proliferation and differentiation toward cardiomyocyte lineage.

The overall goal of this article is to standardize the protocol for the isolation, characterization, and differentiation of cardiac stem cells (CSCs) from the adult mouse heart. Here, we describe a density gradient centrifugation method to isolate murine CSCs and elaborated methods for CSC culture, proliferation, and differentiation into cardiomyocytes.

分離と性質、大人マウス心臓から心臓の幹細胞の分化

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...