التمويل : وأيد هذا العمل من قبل ستيوارت وفيكتوريا مقر تشيوان زمالة Predoctoral (RMW) ، جائزة الريادة المعاهد الوطنية للصحة (RAS)

الصحة العامة امتحان يمكن العثور على معالجة أكثر شمولا من امتحانات الصحة العامة في جاكلين كراولي الممتاز الموارد phenotyping السلوكية ، وماذا يعيب الماوس بلدي؟ 1. نحن نستخدم لأول مرة تعديل بطارية اختبار المراقبة لتقييم الصحة العامة للموضوع. البطارية ويشمل عناصر من بروتوكول صموئيل ايروين 2 تقييم شامل لتحديد بسرعة تلك الموضوعات التي من شأنها أن تكون غير مناسبة لإجراء مزيد من التجارب. وباختصار ، فإن البطارية تعديل يحدد الحيوانات التي هي غير طبيعية جسديا (مثل نقص حاد في الوزن أو أكثر ، اعدادهم على نحو رديء ، ضيق النفس) أو الذي يحمل الموقف الشاذ ، تنقل أو السلوكيات. يمكن أن تكون كل هذه المظاهر من المرض. أي أن التقييم المبدئي يحدد بالمثل الموضوعات غير الصحية المناسبة. من المهم أيضا أن نلاحظ أن تستخدم الحيوانات بطريقة إنسانية ، سواء أثناء الامتحان الصحة العامة وكذلك خلال اختبارات لاحقة. عدم استعمال أي تخدير أو مسكنات وهذه التجارب لا تتضمن أي إجراءات مؤلمة محتملة. اختبار الحساسية الشمية تم تصميم هذا الاختبار لاكتشاف الفرق في حساسية الشم بين مجموعتين من الفئران (مثل نوع البرية ومجموعة من الحيوانات متحولة). في هذا الاختبار ، يتم إجراء التخفيفات متعددة من رائحة. حيوان السذاجة التحقيق ثم تخفيف واحدة من هذه الرائحة ، والزمن الكلي الاستكشافية (في غضون 3 دقائق) يتم تسجيلها. ويتم اختبار التخفيفات متعددة من رائحة حول مواضيع مختلفة ، من السذاجة ، ويستخدم في الوقت الإجمالي استكشافية لتوليد منحنيات الاستجابة للجرعة لكل مجموعة من الفئران. وينبغي إشراك اثنين من الباحثين في الاختبار ، مع واحد أعمى المورثات الموضوع و / أو شرط. الباحث الرئيسي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول four أقفاص نظيفة (8 H × 10 × 18 W L ، في بوصة) ، وكل ذلك دون الفراش. خط يصل أقفاص الأربعة في مجلس الوزراء للسلامة الأحيائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اقامة حواجز بين كل الساحة استعمال ورق الترشيح مبهمة. مكان لوحة ملصق سوداء عبر القسم الأخير من هذا القبيل أن خطوط جانبية سوداء والجانب السفلي من القفص. يغطي الجزء العلوي من الساحة مع قطعة من زجاج شبكي واضحة للسماح للضوء لإنارة الساحة. (أ) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_8/figure1new.png" alt="الشكل 1" /> (ب) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_9/image15.png" alt="الشكل 1.5" /> الشكل 1. الساحة تعيين الهاتفي (أ) ملفوفة بشكل صحيح ، الساحة فارغة (ب) مع ورقة ارينا تصفية الموضوع والرائحة. </li> <li style=";text-align:right;direction:rtl"> يبدأ التعود على المواضيع. مكان هذا الموضوع الأول في قفص الأولى للالتعود. بعد 15 دقيقة ، نقل هذا الموضوع أول من القفص الثانية. تنظيف القفص الأول مع Quatricide السل. المقبل ، وضع الموضوع الثاني في القفص ، أولا تنظيفها. تستمر هذه العملية مع الموضوعات اللاحقة. في نهاية المطاف ، ينبغي اعتادوا كل موضوع في جميع الأقفاص الثلاثة قبل وضعها في الساحة (القفص الرابع والأخير) لمدة 15 دقيقة من التعود قبل الاختبار. </li></ol> الباحث أعمى <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل عدد مناسب من 2 بوصة بنسبة 2 بوصة من الورق المربعات تصفية عينات رائحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام رائحة محددة مسبقا ، تمييع مناسب لها. لعينات مسعور مثل زبدة الفول السوداني ، واستخدام النفط والمذيبات ؛ لجميع الآخرين ، واستخدام الماء المقطر. الدوامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين جهاز تسجيل الفيديو الرقمي في نهاية بكثير من مجلس الوزراء للسلامة الأحيائية بحيث نهاية القفص بأكمله هو في التركيز. اتخاذ الفيديو الأولية لضمان معايير كافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سجل الترتيب الذي سيتم اختبار التخفيفات ، مع الحرص على النظام بطريقة عشوائية من المحاكمات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موضوع السجل القمامة وأرقام بطاقات الهوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد اعتادوا هذا الموضوع لمدة 15 دقيقة في الساحة ، استعدادا لبدء أول محاكمة. ماصة التخفيف أولا ونزولا في أنبوب مخروطي pipetting قبل وضعها على شكل مربع ورقة التصفية. يجب أن يكون سطح الورق مرشح مثالي ~ تغطية 85 ٪ (حوالي 0.50 مليليتر من الحل). استخدام kimwipe للتأكد من عدم ورقة الترشيح المشبعة بشكل مفرط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تسجيل الفيديو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع مربع رقة الترشيح في قفص على الطرف الآخر من موقف الحيوان الحالية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء التوقيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 3 دقائق ، ووقف تسجيل وإزالة رائحة المخفف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان واحد فقط رائحة (مثل القرفة) ليكون اختبارها ، وإزالة هذا الموضوع أول اختبار من الساحة. كرر الخطوات 6-11 لكل حيوان ، تمييع مناسب رائحة لكل موضوع. إذا كان أكثر من واحد هو أن تكون رائحة اختبار ، ومع ذلك ، لا تقم بإزالة هذا الموضوع اختبار من الساحة. بدلا من ذلك ، يبدأ التوقيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع مناسب رائحة المقبل باستخدام الأساليب نفسها المذكورة أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1 دقيقة ، ويبدأ تسجيل الفيديو. ضع مربع رقة الترشيح مع التخفيف من رائحة المقبل في القفص على الطرف الآخر من positio الحيوان الحاليةن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات 6-13 لكل رائحة ، مشيرا الى ان عدد ملفات الفيديو في كل محاكمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات 6-14 لكل موضوع. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_10/image2new.png" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. نتائج ممثلة لدورة اختبار حساسية الشم. تعرض كل مجموعة من الماوس إما السيطرة على (المجموعة أ) أو المجموعة التجريبية (المجموعة الثانية) إلى واحد من خمسة تخفيفات مختلفة من خلاصة القرفة على الورق مرشح واحد ، الدورة ثلاث دقائق. قضى وقتا إجمالي استكشاف وتقييم ورقة الترشيح. الفئران في المجموعة (أ) لديهم حساسية أكبر من تلك الموجودة في حاسة الشم المجموعة باء. </li></ol> اختبار حاسة الشم ميول تم تصميم هذا الاختبار لتحديد أوجه القصور الكشف محددة ، ألا وهي القدرة على الشعور الروائح الجذابة أو مكره. الإجراء التالي تقترض متحررا من بروتوكول Kobayakawa ، K. ، وآخرون al.3. مرة أخرى ، ينبغي إشراك اثنين من الباحثين في الاختبار ، مع واحد أعمى المورثات الموضوع و / أو شرط. يتم تسجيل مرة أخرى في المرة مجموع الاستكشافية (عند عرض الفيديو) عن الروائح المختلفة. وتتم تسمية تلك الروائح مع أوقات استكشافية مجموع أكبر من المياه بأنها &quot;جذابة&quot; ، بينما تسمى تلك الأوقات مع أقل من المياه &quot;مكره&quot;. ثم يرى الباحث ما اذا كانت نفس الروائح هي &quot;جذابة&quot; أو &quot;مكره&quot; لاختبار المواد الدراسية المختلفة. يرجى اتباع الخطوات 1-3 في قسم الحساسية اختبار الشم للباحث الرئيسي. باحث أعمى إجراء اختبار تفضيل حاسة الشم هو نفسه ، مع تعديلات طفيفة من الخطوات 2 و 4. يرجى اتباع الخطوات 1-15 في قسم الحساسية اختبار الشم للباحث أعمى ، مع التغييرات التالية : للحصول على الخطوة 2 ، وذلك باستخدام الروائح محددة مسبقا (مزيج من رائحة جذابة ومكره) ، وجعل الحلول المخففة في كل مناسبة أنابيب مخروطية. لعينات مسعور مثل زبدة الفول السوداني ، واستخدام النفط والمذيبات ؛ لجميع الآخرين ، واستخدام الماء المقطر. الدوامة. لخطوة 4 ، بدلا من تسجيل تخفيف لفحصها وتسجيلها ترتيب الروائح المتنوعة التي سيتم اختبارها ، والنظام العشوائي للتجارب. تم تصميم هذا الاختبار لتحديد أوجه القصور الكشف محددة ، ألا وهي القدرة على الشعور الروائح الجذابة أو مكره. الإجراء التالي تقترض متحررا من بروتوكول Kobayakawa ، K. وآخرون. 3. مرة أخرى ، ينبغي إشراك اثنين من الباحثين في الاختبار ، مع واحد أعمى المورثات الموضوع و / أو شرط. يتم تسجيل مرة أخرى في المرة مجموع الاستكشافية (عند عرض الفيديو) عن الروائح المختلفة. وتتم تسمية تلك الروائح مع أوقات استكشافية مجموع أكبر من المياه بأنها &quot;جذابة&quot; ، بينما تسمى تلك الأوقات مع أقل من المياه &quot;مكره&quot;. ثم يرى الباحث ما اذا كانت نفس الروائح هي &quot;جذابة&quot; أو &quot;مكره&quot; لاختبار المواد الدراسية المختلفة. يرجى اتباع الخطوات 1-3 في قسم الحساسية اختبار الشم للباحث الرئيسي. باحث أعمى إجراء اختبار تفضيل حاسة الشم هو نفسه ، مع تعديلات طفيفة من الخطوات 2 و 4 و 13. يرجى اتباع الخطوات 1-15 في قسم الحساسية اختبار الشم للباحث أعمى ، مع التغييرات التالية : للحصول على الخطوة 2 ، وذلك باستخدام الروائح محددة مسبقا (مزيج من رائحة جذابة ومكره) ، وجعل الحلول المخففة في كل مناسبة أنابيب مخروطية. لعينات مسعور مثل زبدة الفول السوداني ، واستخدام النفط والمذيبات ؛ لجميع الآخرين ، واستخدام الماء المقطر. الدوامة. لخطوة 4 ، بدلا من تسجيل تخفيف لفحصها وتسجيلها ترتيب الروائح المتنوعة التي سيتم اختبارها ، والنظام العشوائي في كل محاكمة. عن الخطوة 13 ، ضع مربع رقة الترشيح مع رائحة المقبل في القفص على الطرف الآخر من موقف الحيوان الحالية. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_11/image3new.png" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. نتائج ممثلة لدورة اختبار تفضيل حاسة الشم. تعرضت كل الماوس إلى كل من الروائح المختلفة على الورق مرشح واحد ، الدورة ثلاث دقائق. قضى وقتا إجمالي استكشاف وتقييم ورقة الترشيح. زبدة الفول السوداني والفانيلا والروائح الجذابة (استكشافية رائحة الوقت &lt;استكشافية للمياه الوقت) و 2 - Methylbutyric حمض غير مكره (استكشافية رائحة الوقت &lt;استكشافية للمياه الوقت). سجل لاختبارات الشم بعد الحصول على جميع لحساسية الشم والفيديو أفضلية ، فمن الضروري تحليل الوقت الاجمالي الذي قضي استكشاف كل تمييع / رائحة. وقد قام الباحث بتحليل جميع المكفوفين من أشرطة الفيديو لأغراض الاتساق. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معاينة VIDEO ، مشيرا إلى ما يلي : أ) عندما يتم وضع ورقة الترشيح في الساحة ، ب) عند الفأر النهج ورقة الترشيح ، ج) عند الفأر تحقق في ورقة الترشيح د) عند مرور ثلاث دقائق لديها (من عند التصفية وضعت ورقة في الساحة). معرفة متى التركيز على سلوك الماوس يجعل من الاسهل ليسجل بدقة الوقت الاجمالي الذي قضي على استكشاف الاستعراض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استعراض الفيديو. لاحظ الوقت الذي تحقق لأول مرة الماوس رقة الترشيح (الكمون). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ، ساعة توقيت الوقت جميع التحقيقات في غضون ثلاث دقائق من وضع ورقة الترشيح في الساحة. ويعرف الوقت من تحقيق مثل أي وقت المنخر الماوس هي &lt;1 مم من ورقة الترشيح. فمن المهم أن لا تشتمل على أي من ذلك الزمن عندما كان الفأر هو على مقربة من ورقة الترشيح ، ولكن لم يتم التحقيق بنشاط. لا تشمل نوبات من المضغ ولعق على الورق أو نوبات من الجلوس على ورقة في الوقت الذي استكشافية الإجمالي. من الضروري أن تلتزم بشكل وثيق ومستمر لهذه القواعد بدقة لتحليل السلوك الشمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سجل الوقت استتار ، قضى الوقت الإجمالي التحقيق ورقة الترشيح ورقم ملف الفيديو. </li></ol>

<ol>
	<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What&amp;rsquo;s+Wrong+with+my+Mouse?+Behavioral+Phenotyping+of+Transgenic+and+Knockout+Mice.">What&amp;rsquo;s Wrong with my Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice.</a> , 42-60 (2007).</li><li>Irwin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+observational+assessment:+Ia.+A+systematic,+quantitative+procedure+for+assessing+the+behavioral+and+physiologic+state+of+the+mouse.">Comprehensive observational assessment: Ia. A systematic, quantitative procedure for assessing the behavioral and physiologic state of the mouse.</a> Psychopharmacologia. 13, 222-257 (1968).</li><li>Kobayakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb.">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450, 503-508 (2007).</li></ol>

الاختبارات المذكورة أعلاه تسمح لتقييم سريعة وموثوق بها وظيفة حاسة الشم الأساسية. فإنه لا يمكن تجاهلها ، إلا أن هذا يتطلب الاعتماد على حسن الاختيار وإعداد المواد للاختبار. الحيوانات التي هي مريضا أو عاجزا على خلاف ذلك غالبا ما تكون موضع اختبار غير متناسقة. أيضا ، والت...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>2-Methylbutyric acid</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>W269506</td>
<td>Concentrations Used:9.16 x 10-1 &#x2013; 10-8 M 
(in H20)</td>
</tr>
<tr>
<td>Pure Vanilla Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>McCormick & Co</td>
<td>n/a</td>
<td>Concentrations Used:10-1 &#x2013; 10-5 dilution 
(in H20)</td>
</tr>
<tr>
<td>Peanut Butter (Skippy, Extra Crunchy)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Unilever</td>
<td>n/a</td>
<td>Concentrations Used:10% (w/v), in mineral oil</td>
</tr>
<tr>
<td>Cinnamon Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>McCormick & Co</td>
<td>n/a</td>
<td>Concentrations Used:10-1 &#x2013; 10-5 dilution 
(in H20)</td>
</tr>
<tr>
<td>Mineral Oil, light</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>O121-1</td>
<td>Concentrations Used:N/A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

olfactory behavioral testing in the adult mouse

نظام القوارض الشم هو زيادة اهتمام العلماء ، ودرس ، جزئيا ، في بيولوجيا الأنظمة بسبب الدوائر والخمسين ، بعد الوصول النمطية. بالإضافة إلى ذلك ، قدرة هذه المنطقة فريدة من نوعها لتوليد خلايا عصبية جديدة طوال عمر الكائن الحي يجعلها جذابة للنظام البيولوجيا التنموية والتجدد على حد سواء. يتطلب مثل هذا الاهتمام وسيلة لإجراء تقييم سريع ، ولكن يمكن الاعتماد عليها من وظيفة حاسة الشم. العديد من الاختبارات لقدرة حاسة الشم معقدة ومتغيرة ، أو لم تكن مصممة خصيصا للفئران. أيضا ، بعض الاختبارات حساسة للعجز الذاكرة فضلا عن عيوب في قدرات الشم ، التباس النتائج المتحصل عليها. هنا ، نحن تصف بطارية بسيطة من الاختبارات المصممة لتحديد العيوب في حساسية الشم والتفضيل. أولا ، تقييم أولي الصحة العامة يسمح للتعرف على الحيوانات مناسبة لإجراء مزيد من التجارب. الثانية ، تتعرض الفئران لتخفيفات مختلفة من الروائح إلى التأكد مما إذا كان هناك فرق العتبة. الثالث ، وتعرض الفئران مع الروائح المختلفة ، سواء جذابة ومكره ، التي تسمح لتقييم تفضيل حاسة الشم. ينبغي أن تكون هذه الدراسات بسيطة تجعل توصيف الأولية للسلوك الشم للوصول للمختبرات للموارد والخبرات المتنوعة.

Watch this Scientific Journal Video about Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse at JoVE.com

Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

وقد أدت الأساسية ، وخصائص فريدة من نوعها حتى الآن لنظام القوارض الشم لدراسة المتزايد بين الأحياء. ثم يتم تقييم بسيطة نسبيا من وظيفتها المطلوبة أيضا. نحن هنا وصف اختبارات حساسة بالنسبة للتوصيف حساسية الماوس الشمية والتفضيل.

السلوكية اختبار الشم في الماوس الكبار

The rodent olfactory system is of increasing interest to scientists, studied, in part, in systems biology because of its stereotyped, yet accessible ...

olfactory-behavioral-testing-in-the-adult-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

19.3K Views.  Dana Farber Cancer Institute. وقد أدت الأساسية ، وخصائص فريدة من نوعها حتى الآن لنظام القوارض الشم لدراسة المتزايد بين الأحياء. ثم يتم تقييم بسيطة نسبيا من وظيفتها المطلوبة أيضا. نحن هنا وصف اختبارات حساسة بالنسبة للتوصيف حساسية الماوس الشمية والتفضيل.

Video: Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

عالية الدقة تعقب الفيديو للتنقل في الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

In vivo Ca2+- Imaging of Mushroom Body Neurons During Olfactory Learning in the Honey Bee

The in vivo and semi-in vivo preparation for Calcium imaging has been developed in our lab by Joerges, K&uuml;ttner and Galizia over ten years ago, to measure odor evoked activity in the antennal lobe1. From then on, it has been continuously refined and applied to different neuropiles in the bee brain. Here, we describe the preparation currently used in the lab to measure activity in mushroom body neurons using a dextran coupled calcium-sensitive dye (Fura-2). We retrogradely stain mushroom body neurons by injecting dye into their axons or soma region. We focus on reducing the invasiveness, to achieve a preparation in which it is still possible to train the bee using PER conditioning. We are able to monitor and quantify the behavioral response by recording electro-myograms from the muscle which controls the PER (M17)2.
After the physiological experiment the imaged structures are investigated in greater detail using confocal scanning microscopy to address the identity of the neurons.

In vivo Ca2+- Imaging of Mushroom Body Neurons During Olfactory Learning in the Honey Bee

Bees can be conditioned in an appetitive olfactory learning paradigm (PER-conditioning). Using odors as stimuli, we established a method in which behavior is recorded while simultaneously Calcium Imaging is used to measure odor evoked activity in mushroom body neurons in vivo.

الكالسيوم في الجسم الحي 2 + -- التصوير من الخلايا العصبية بالجسم فطر خلال التعلم الشم في عسل النحل

The in vivo and semi-in vivo preparation for Calcium imaging has been developed in our lab by Joerges, K&uuml;ttner and Galizia over ten years ago, to ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

في الجسم الحي التصوير والعلاجات العلاجية في الفأر نموذج مثلي من سرطان المبيض

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, this method makes it difficult to know how much reagent is absorbed or taken up per fish. Some experimental questions, particularly those related to metabolic studies, may be better addressed by delivering a defined quantity to each fish, based on weight. Here we present a method for intraperitoneal (IP) injection into adult zebrafish. Injection is into the abdominal cavity, posterior to the pelvic girdle. This procedure is adapted from veterinary methods used for larger fish. It is safe, as we have observed zero mortality. Additionally, we have seen bleeding at the injection site in only 5 out of 127 injections, and in each of those cases the bleeding was brief, lasting several seconds, and the quantity of blood lost was small. Success with this procedure requires gentle handling of the fish through several steps including fasting, weighing, anesthetizing, injection, and recovery. Precautions are required to minimize stress throughout the procedure. Our precautions include using a small injection volume and a 35G needle. We use Cortland salt solution as the vehicle, which is osmotically balanced for freshwater fish. Aeration of the gills is maintained during the injection procedure by first bringing the fish into a surgical plane of anesthesia, which allows slow operculum movements, and second, by holding the fish in a trough within a water-saturated sponge during the injection itself. We demonstrate the utility of IP injection by injecting glucose and monitoring the rise in blood glucose level and its subsequent return to normal. As stress is known to increase blood glucose in teleost fish, we compare blood glucose levels in vehicle-injected and non-injected adults and show that the procedure does not cause a significant rise in blood glucose.

We demonstrate intraperitoneal injection into adult zebrafish. We use a 10 &mu;l NanoFil microsyringe controlled by a Micro4 controller and UltraMicroPump III. This demonstration includes the use of cold water as an anesthetic.

حقن داخل الصفاق الى اسماك الزرد الكبار

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also produce a source of patient-matched cells for regenerative therapies. iPSCs may be generated using multiple protocols and derived from multiple cell sources. Once generated, iPSCs are tested using a variety of assays including immunostaining for pluripotency markers, generation of three germ layers in embryoid bodies and teratomas, comparisons of gene expression with embryonic stem cells (ESCs) and production of chimeric mice with or without germline contribution2. Importantly, iPSC lines that pass these tests still vary in their capacity to produce different differentiated cell types2. This has made it difficult to establish which iPSC derivation protocols, donor cell sources or selection methods are most useful for different applications.
The most stringent test of whether a stem cell line has sufficient developmental potential to generate all tissues required for survival of an organism (termed full pluripotency) is tetraploid embryo complementation (TEC)3-5. Technically, TEC involves electrofusion of two-cell embryos to generate tetraploid (4n) one-cell embryos that can be cultured in vitro to the blastocyst stage6. Diploid (2n) pluripotent stem cells (e.g. ESCs or iPSCs) are then injected into the blastocoel cavity of the tetraploid blastocyst and transferred to a recipient female for gestation (see Figure 1). The tetraploid component of the complemented embryo contributes almost exclusively to the extraembryonic tissues (placenta, yolk sac), whereas the diploid cells constitute the embryo proper, resulting in a fetus derived entirely from the injected stem cell line.
Recently, we reported the derivation of iPSC lines that reproducibly generate adult mice via TEC1. These iPSC lines give rise to viable pups with efficiencies of 5-13%, which is comparable to ESCs3,4,7 and higher than that reported for most other iPSC lines8-12. These reports show that direct reprogramming can produce fully pluripotent iPSCs that match ESCs in their developmental potential and efficiency of generating pups in TEC tests. At present, it is not clear what distinguishes between fully pluripotent iPSCs and less potent lines13-15. Nor is it clear which reprogramming methods will produce these lines with the highest efficiency. Here we describe one method that produces fully pluripotent iPSCs and "all- iPSC" mice, which may be helpful for investigators wishing to compare the pluripotency of iPSC lines or establish the equivalence of different reprogramming methods.

Generating induced pluripotent stem cell (iPSC) lines produces lines of differing developmental potential even when they pass standard tests for pluripotency. Here we describe a protocol to produce mice derived entirely from iPSCs, which defines the iPSC lines as possessing full pluripotency1.

جيل من الفئران المستمدة من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Gavaging Adult Zebrafish

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or agents in solutions for scientific research. Current methods for administering compounds orally to adult zebrafish are inaccurate due to variability in voluntary consumption by the fish. A gavage procedure was developed to deliver precise quantities of infectious agents to zebrafish for study in biomedical research. Adult zebrafish over 6 months of age were anesthetized with 150 mg/L of buffered MS-222 and gavaged with 5 &mu;l of solution using flexible catheter implantation tubing attached to a cut 22-G needle tip. The flexible tubing was lowered into the oral cavity of the zebrafish until the tip of the tubing extended past the gills (approximately 1 cm). The solution was then injected slowly into the intestinal tract. This method was effective 88% of the time, with fish recovering uneventfully. This procedure is also efficient as one person can gavage 20-30 fish in one hour. This method can be used to precisely administer agents for infectious diseases studies, or studies of other compounds in adult zebrafish.

The increasing use of zebrafish as an animal model requires the development of effective methods for the delivery of known quantities of compounds and solutions. The gavage procedure described below allows for the oral delivery of precise volumes of solution reliably, safely and efficiently to adult zebrafish.

Gavaging اسماك الزرد الكبار

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse incisor provides a model for these processes. This remarkable organ grows continuously throughout the animal&#39;s life and generates all the necessary cell types from active pools of adult stem cells housed in the labial (toward the lip) and lingual (toward the tongue) cervical loop (CL) regions. Only the dental stem cells from the labial CL give rise to ameloblasts that generate enamel, the outer covering of teeth, on the labial surface. This asymmetric enamel formation allows abrasion at the incisor tip, and progenitors and stem cells in the proximal incisor ensure that the dental tissues are constantly replenished. The ability to isolate and grow these progenitor or stem cells in vitro allows their expansion and opens doors to numerous experiments not achievable in vivo, such as high throughput testing of potential stem cell regulatory factors. Here, we describe and demonstrate a reliable and consistent method to culture cells from the labial CL of the mouse incisor.

The continuously growing mouse incisor provides a model for studying renewal of dental tissues from dental epithelial stem cells (DESCs). A robust system for consistently and reliably obtaining these cells from the incisor and expanding them in vitro is reported here.

العزلة وثقافة الأسنان طلائي الخلايا الجذعية من الكبار ماوس القاطعة

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a prerequisite for studying the physiology of the isolated organ and for many innovative applications that may be possible in the future, including perfusion decellularization for kidney bioengineering or the administration of anti-rejection or genome-editing drugs in high doses to prime the kidney for transplantation. During the time of the perfusion, the kidney can be manipulated, renal function can be assessed, and various pharmaceuticals administered. After the procedure, the kidney can be transplanted or processed for molecular biology, biochemical analysis, or microscopy.
This paper describes the perfusate and the surgical technique needed for the ex vivo perfusion of mouse kidneys. Details of the perfusion apparatus are given and data are presented showing the viability of the kidney&#39;s preparation: renal blood flow, vascular resistance, and urine data as functional, transmission electron micrographs of different nephron segments as morphological readouts, and western blots of transport proteins of different nephron segments as molecular readout.

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. The buffers and surgical technique are described in detail.

الماوس معزولة تقنية الكلى Perfused

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

حقن الخلية الداخلية عبر كتلة من الخلايا الجذعية الجنينية يؤدي إلى ارتفاع في أسعار تشيميريسم

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina propria. EGCs play important roles in gut homeostasis through the release of various trophic factors and contribute to the integrity of the epithelial barrier. Most studies of primary enteric glial cultures use cells isolated from the myenteric plexus after enzymatic dissociation. Here, a non-enzymatic method to isolate and culture EGCs from the intestinal submucosa and lamina propria is described. After manual removal of the longitudinal muscle layer, EGCs were liberated from the lamina propria and submucosa using sequential HEPES-buffered EDTA incubations followed by incubation in commercially available non-enzymatic cell recovery solution. The EDTA incubations were sufficient to strip most of the epithelial mucosa from the lamina propria, allowing the cell recovery solution to liberate the submucosal EGCs. Any residual lamina propria and smooth muscle was discarded along with the myenteric glia. EGCs were easily identified by their ability to express glial fibrillary acidic protein (GFAP). Only about 50% of the cell suspension contained GFAP+ cells after completing tissue incubations and prior to plating on the poly-D-lysine/laminin substrate. However, after 3 days of culturing the cells in glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF)-containing culture media, the cell population adhering to the substrate-coated plates comprised of &#62;95% enteric glia. We created a hybrid mouse line by breeding a hGFAP-Cre mouse to the ROSA-tdTomato reporter line to track the percentage of GFAP+ cells using endogenous cell fluorescence. Thus, non-myenteric enteric glia can be isolated by non-enzymatic methods and cultured for at least 5 days.

Here, we describe the isolation of enteric-glial cells from the intestinal-submucosa using sequential EDTA incubations to chelate divalent cations and then incubation in non-enzymatic cell recovery solution. Plating the resultant cell suspension on poly-D-lysine and laminin results in a highly enriched culture of submucosal glial cells for functional analysis.

عزل الخلايا الدبقية المعوي من سوبموكوسا والصفيحة بروبريا الماوس الكبار

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...