기금 :이 작품은 스튜어트 HQ &amp; 빅토리아 퀀 Predoctoral 원정대 (RMW), NIH 파이 오니아 수상 (RAS)에 의해 지원되었다

일반 건강 시험 일반 건강 시험보다 포괄적인 치료가 재클린 크롤리의 훌륭한 행동 phenotyping 리소스에서 찾을 수 있습니다, 어떻게 내 마우스 잘못 된거 아냐? 1. 우리는 먼저 대상의 일반적인 건강을 평가하기 위해 수정된 관측 테스트 배터리를 사용합니다. 배터리는 신속하게 추가 테스트를 위해 적합합니다 그 과목을 식별하는 사무엘 어윈의 포괄적인 평가 절차 2 항목을 포함합니다. 간단히 수정 배터리가 물리적으로 비정상 아르 동물을 식별합니다 (예 : 심한 이하 또는 비만인 제대로 손질, dyspneic) 또는 전시 비정상적인 자세, 운동 또는 행동. 이 모든 질병의 발현 수 있습니다. 마찬가지로 건강하지 못한 과목을 식별하는 초기 평가 적합합니다. 동물 일반 건강 검사하는 동안뿐만 아니라 차후 테스트를하는 동안 편안하게 모두 사용됩니다 또한 중요하다. 이 검사는 어떤 잠재적으로 고통스런 절차를 포함하지 않는 아무 마취 또는 진통제를 사용하지 않습니다. 후각 민감도 테스트 이 테스트는 쥐를 두 그룹 (예 : 야생 동물의 종류와 돌연변 그룹) 사이의 후각 감성의 차이를 감지하도록 설계되었습니다. 이 테스트에서는 향기의 여러 dilutions가 만들어집니다. 나이브 동물 그러면 기록이 향기와 총 탐험 시간 (3 분 이내)의 단일 희석을 조사. 향기 여러 dilutions는 다른, 순진한 주제에 대한 테스트 및 총 탐험 시간이 생쥐의 각 그룹에 대해 선량 반응 곡선을 생성하는 데 사용됩니다. 두 연구자는 주제 genotypes 및 / 또는 조건 한 맹인과 테스트에 참여해야합니다. 기본 연구 <ol><li> 네 깨끗한 새장 (인치 8 H × 10 W X 18 L), 침구 않고를 구합니다. biosafety 캐비닛에있는 네 개의 버팀대 줄을. </li><li> 불투명 필터 용지를 사용하여 각 분야 사이의 파티션을 설정합니다. 마지막 파티션에 걸쳐 검은 포스터 보드를 배치 등 그 검은 측면 라인 케이지의 측면과 하단. 빛이 무대 조명 수 있도록 플렉시 글라스의 명확한 조각과 함께 경기장 상단의 커버. (A) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_8/figure1new.png" alt="그림 1" /> (B) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_9/image15.png" alt="그림 1.5" /> 그림 1. 경기장 셋업. (A) 적절히 draped, 빈 경기장 (B) 아레나 제목과 향수 필터 종이. </li> <li> 과목 habituating 시작합니다. 요법 이니에 대한 첫 번째 새장에서 처음으로 제목을 넣으십시오. 십오분 후, 두 번째 새장을 가장 먼저 주제를 이동합니다. Quatricide의 결핵 최초의 새장을 청소하십시오. 다음, 먼저 청소 새장에서 두번째로 제목을 넣으십시오. 후속 과목이 과정을 계속합니다. 궁극적으로, 각 과목은 사전 테스트하는 요법 이니, 또 15 분 아레나 (네번째이자 마지막 케이지)에 배치되기 전에 세 새장에서 길들여지지하여야한다. </li></ol> 블라인드 연구원 <ol><li> 향기 샘플 필터 종이의 2 인치 사각형으로 2 인치의 적절한 숫자를 확인합니다. </li><li> 미리 선택된 향기를 사용하여 적절하게 그것을 희석. 이러한 땅콩 버터와 같은 소수성 시료의 경우, 용매로 석유를 사용하여, 모든 다른, 증류수를 사용합니다. 와동. </li><li> 전체 케이지 최종 초점에 이러한 biosafety 캐비닛의 맨 끝에 디지털 비디오 녹화 장치를 설정합니다. 매개 변수가 적절한 수 있도록하기 위해 예비 비디오를 가져가라. </li><li> dilutions가, 테스트 시련의 순서를 무작위로 돌보는 것입니다 순서를 기록합니다. </li><li> 기록 대상의 쓰레기 및 식별 번호. </li><li> 일단 제목은 첫 번째 재판에 대한 준비를 시작 경기장에서 15 분 동안 길들여되었습니다. 필터 종이 광장에 그것을 pipetting 전에 원뿔 관에서 처음으로 희석을 피펫 아래. 필터 종이 표면은 최적의 ~ 85 % 적용 (솔루션의 약 0.50 MLS)해야합니다. 필터 용지가 지나치게 포화되지 않는지 확인 kimwipe을 사용합니다. </li><li> 비디오 녹화를 시작합니다. </li><li> 동물의 현재 위치의 반대편 끝에있는 새장에서 필터 종이 사각형을 놓습니다. </li><li> 타이밍을 시작합니다. </li><li> 삼분 후, 녹음을 중지하고 희석 냄새를 제거합니다. </li><li> 한 향기 (예 : 계피) 테스트되어야하는 경우, 경기장에서 첫 번째 실험 대상을 제거합니다. 반복 적절하게 각 과목에 대한 냄새를 diluting, 각 동물에 대해 6-11 단계를 반복합니다. 하나 이상의 향기가 테스트되어야하는 경우, 그러나, 무대에서 테스트 주제를 제거하지 마십시오. 대신 타이밍을 시작합니다. </li><li> 적절하게 위에 나열된 것과 같은 방법을 사용하여 다음 냄새를 희석. </li><li> 일분 후, 비디오 녹화를 시작합니다. 동물의 현재 positio의 반대 끝에있는 새장에있는 다음 향기의 희석과 필터 종이 스퀘어 플레이스N. </li><li> 반복 각 시험에 대한 비디오 파일 번호를 지적, 각 향기에 대해 6-13 단계를 반복합니다. </li><li> 반복 각 과목에 대해 6-14 단계를 반복합니다. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_10/image2new.png" alt="그림 2" /> 그림 2. 후각 감도 테스트 세션에 대한 대표적인 결과가.하거나 제어 그룹 (그룹) 또는 실험 그룹 (그룹 B)의 각각의 마우스는 계피의 다섯 가지 dilutions 한 삼분의 세션에 대해 필터를 종이에 추출 중 하나에 노출되었다. 총 시간은 거름종이가 평가되었다 탐험 보냈다. 그룹의 생쥐는 그룹 B에보다 큰 후각 감성을 가지고 </li></ol> 후각 환경 설정 테스트 이 테스트는 즉 특정 검출 결함, 매력이나 aversive 냄새를 감지하는 능력을 식별하도록 설계되었습니다. 다음 절차는 고바의 프로토콜, K., 동부 표준시 al.3에서 후한 빌려. 다시 두 연구자는 주제 genotypes 및 / 또는 조건 한 맹인과 테스트에 참여해야합니다. 총 탐험 시간은 다시 다양한 냄새에 대한 (비디오 감상시) 기록됩니다. 물보다 총 탐험 배 이상있는 사람 냄새가 적은 물보다 시간이있는 사람은 &quot;aversive&quot;칭했다하는 동안 &quot;매력&quot;로 지정되어 있습니다. 연구자는 다음 같은 냄새가 다른 시험 과목에 대해 &quot;매력적인&quot;또는 &quot;aversive&quot;여부를 고려합니다. 기본 연구자에 대한 강한 민감도 테스트 섹션에서 1-3 단계를 따르십시오. 블라인드 연구원 후각 환경 설정 테스트를위한 절차는 2 단계와 4 약간의 수정과 동일합니다. 다음과 같이 변경과 함께 맹인 연구자에 대한 강한 민감도 테스트 섹션의 단계 1-15을 따르시기 바랍니다 : 2 단계 들어, 미리 선택된 향기를 (매력적이고 aversive 모두 향기의 조합)를 사용하여, 각 중 적절하게 희석 솔루션을 원뿔 튜브. 이러한 땅콩 버터와 같은 소수성 시료의 경우, 용매로 석유를 사용하여, 모든 다른, 증류수를 사용합니다. 와동. 4 단계의 경우, 오히려 테스트로 희석을 기록보다 시련의 순서를 randomizing, 테스트하게 될 다양한 향기의 순서를 기록합니다. 이 테스트는 즉 특정 검출 결함, 매력이나 aversive 냄새를 감지하는 능력을 식별하도록 설계되었습니다. 다음 절차는 고바 K. 외의 프로토콜에서 후한 빌려. 3. 다시 두 연구자는 주제 genotypes 및 / 또는 조건 한 맹인과 테스트에 참여해야합니다. 총 탐험 시간은 다시 다양한 냄새에 대한 (비디오 감상시) 기록됩니다. 이하 물보다 시대에 사람이 &quot;aversive&quot;칭했다하는 동안 물보다 총 탐험 배 이상있는 사람 냄새는 &quot;매력&quot;로 지정되어 있습니다. 연구자는 다음 같은 냄새가 다른 시험 과목에 대해 &quot;매력적인&quot;또는 &quot;aversive&quot;여부를 고려합니다. 기본 연구자에 대한 강한 민감도 테스트 섹션에서 1-3 단계를 따르십시오. 블라인드 연구원 후각 환경 설정 테스트를위한 절차는 2 단계, 4, 13 약간의 수정과 동일합니다. 다음과 같이 변경과 함께 맹인 연구자에 대한 강한 민감도 테스트 섹션의 단계 1-15을 따르시기 바랍니다 : 2 단계 들어, 미리 선택된 향기를 (매력적이고 aversive 모두 향기의 조합)를 사용하여, 각 중 적절하게 희석 솔루션을 원뿔 튜브. 이러한 땅콩 버터와 같은 소수성 시료의 경우, 용매로 석유를 사용하여, 모든 다른, 증류수를 사용합니다. 와동. 4 단계의 경우, 오히려 테스트로 희석을 기록보다는, 각 시험의 순서를 randomizing, 테스트하게 될 다양한 향기의 순서를 기록합니다. 단계 13의 동물의 현재 위치의 반대편 끝에있는 케이지의 다음 향기와 필터 용지 사각형을 놓습니다. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_11/image3new.png" alt="그림 3" /> 그림 3. 후각 환경 설정 테스트 세션에 대한 대표적인 결과가. 각각의 마우스는 하나, 세 분 세션에 대해 필터를 종이에 서로 다른 향기의 각에 노출되었다. 총 시간은 거름종이가 평가되었다 탐험 보냈다. 땅콩 버터와 바닐라 향기 매력입니다 (탐험 시간 향기&gt; 탐험 시간 물)과 2 Methylbutyric 산성은 (탐험 시간 향기 &lt;탐험 시간 물) aversive입니다. 강한 시험 점수 후각 감도와 환경 모든 동영상을 획득하면, 그것은 총 시간 각 희석 / 냄새를 탐험 지출을 분석하는 것이 필요합니다. 맹인 연구자들이 일관성에 대한 모든 동영상을 분석했습니다. <ol><li> VID 미리보기이오 다음 지적 : 마우스 필터 용지를 조사 및 D) 3 분 경과되었을 때) 거름종이가 경기장에 배치되었을 때, B) 마우스 필터 종이, C를 접근 언제 ()에서 때 필터 종이)는 경기장에 배치했다. 마우스의 행동에 초점을 때 알면 쉽게 정확 총 시간 검토한 탐험 지출 점수를 수 있습니다. </li><li> 비디오를 검토합니다. 마우스가 처음 여과지 (지연)을 조사 시간을 기록해 둡니다. </li><li> 모든 조사는 경기장에서 필터 용지를 삽입 후 3 분 이내에 스톱워치, 시간을 사용합니다. 조사 시간은 마우스의 나레스은 여과지에서 &lt;1mm되는 시간으로 정의됩니다. 이것은 마우스 필터 종이 가까이에있는 시간 중 하나를 포함하지 않는 것이 중요하지만, 적극적으로 그것을 조사하지 않습니다. 전체 탐험 시간에 종이에 앉아있는 논문이나 관찰을 씹는 및 핥아의 복싱 경기를 포함시키지 마십시오. 그것은 정확하게 후각 행동을 분석하여 이러한 규칙에 밀접하고 지속적으로 준수하는 것이 필요합니다. </li><li> 기록 지연 시간은 총 시간은 필터 종이 및 비디오 파일 번호를 조사 보냈다. </li></ol>

<ol>
	<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What&amp;rsquo;s+Wrong+with+my+Mouse?+Behavioral+Phenotyping+of+Transgenic+and+Knockout+Mice.">What&amp;rsquo;s Wrong with my Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice.</a> , 42-60 (2007).</li><li>Irwin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+observational+assessment:+Ia.+A+systematic,+quantitative+procedure+for+assessing+the+behavioral+and+physiologic+state+of+the+mouse.">Comprehensive observational assessment: Ia. A systematic, quantitative procedure for assessing the behavioral and physiologic state of the mouse.</a> Psychopharmacologia. 13, 222-257 (1968).</li><li>Kobayakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb.">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450, 503-508 (2007).</li></ol>

상기 테스트는 기본적인 후각 기능의 빠르고 안정적​​인 평가를 위해 수 있습니다. 그것이 신뢰성 테스트에 대한 과목의 적절한 선택과 준비가 필요하다는 그러나, 간과되지 않습니다. 아프하거나 마비 아르 동물은 종종 일관성 시험 과목입니다. 또한, 시험 과목 요법 이니,이 핵심입니다. 우리는 요법 이니 과정에서 여러 케이지의 사용은 동물 실험자들이 취급하고 환경 변화와 함께 편안하게...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>2-Methylbutyric acid</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>W269506</td>
<td>Concentrations Used:9.16 x 10-1 &#x2013; 10-8 M 
(in H20)</td>
</tr>
<tr>
<td>Pure Vanilla Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>McCormick & Co</td>
<td>n/a</td>
<td>Concentrations Used:10-1 &#x2013; 10-5 dilution 
(in H20)</td>
</tr>
<tr>
<td>Peanut Butter (Skippy, Extra Crunchy)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Unilever</td>
<td>n/a</td>
<td>Concentrations Used:10% (w/v), in mineral oil</td>
</tr>
<tr>
<td>Cinnamon Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>McCormick & Co</td>
<td>n/a</td>
<td>Concentrations Used:10-1 &#x2013; 10-5 dilution 
(in H20)</td>
</tr>
<tr>
<td>Mineral Oil, light</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>O121-1</td>
<td>Concentrations Used:N/A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

olfactory behavioral testing in the adult mouse

쥐 후각 시스템 때문에 틀에 박힌, 아직 접근이 회로의 시스템 생물학, 부분, 연구 과학자, 이익을 증가입니다. 또한, 유기체의 일생 동안 새로운 뉴런을 생성하기 위해이 지역의 독특한 능력은 모두 발달 및 재생 생물학을위한 매력적인 시스템이 있습니다. 이러한 관심은 후각 기능의 빠르고, 아직 신뢰성 평가를위한 수단을 필요로. 후각 능력의 많은 시험은 특별히 쥐를위한 복잡한 변수 또는하지 않습니다. 또한, 일부 테스트는 메모리 결손뿐만 아니라 후각 능력, 혼란함을 주죠 얻은 결과에 결함 민감합니다. 여기, 우리는 후각 감성과 선호도에 결함을 식별하기위한 테스트의 간단한 배터리를 설명합니다. 첫째, 초기 일반적인 건강 평가 추가 테스트에 적합한 동물의 식별을 허용합니다. 둘째, 생쥐가 임계값 차이가 있는지 확인할 냄새 다양한 dilutions에 노출되어 있습니다. 셋째, 생쥐는 후각 선호의 평가를 허용 매력적이고 aversive 모두 각종 냄새, 함께 제공됩니다. 이 간단한 연구는 다양한 자원과 전문 지식의 실험실에 대한 접근 후각 행동의 초기 특성을 만들어야합니다.

Watch this Scientific Journal Video about Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse at JoVE.com

Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

쥐 후각 시스템의 기본, 아직 고유의 특성은 생물학 자 사이의 증가 공부를 주도했습니다. 그 함수의 비교적 간단 평가 그때도 필요합니다. 여기 마우스 후각 감성과 선호도의 특성에 대한 민감한 테스트를 설명합니다.

성인 마우스의 후각 행동 테스트

The rodent olfactory system is of increasing interest to scientists, studied, in part, in systems biology because of its stereotyped, yet accessible ...

olfactory-behavioral-testing-in-the-adult-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

19.4K 조회수.  Dana Farber Cancer Institute. 쥐 후각 시스템의 기본, 아직 고유의 특성은 생물학 자 사이의 증가 공부를 주도했습니다. 그 함수의 비교적 간단 평가 그때도 필요합니다. 여기 마우스 후각 감성과 선호도의 특성에 대한 민감한 테스트를 설명합니다.

비디오: Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

성인 Drosophila Melanogaster의 로코의 고해상도 비디오 추적

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

연구

생물학

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, this method makes it difficult to know how much reagent is absorbed or taken up per fish. Some experimental questions, particularly those related to metabolic studies, may be better addressed by delivering a defined quantity to each fish, based on weight. Here we present a method for intraperitoneal (IP) injection into adult zebrafish. Injection is into the abdominal cavity, posterior to the pelvic girdle. This procedure is adapted from veterinary methods used for larger fish. It is safe, as we have observed zero mortality. Additionally, we have seen bleeding at the injection site in only 5 out of 127 injections, and in each of those cases the bleeding was brief, lasting several seconds, and the quantity of blood lost was small. Success with this procedure requires gentle handling of the fish through several steps including fasting, weighing, anesthetizing, injection, and recovery. Precautions are required to minimize stress throughout the procedure. Our precautions include using a small injection volume and a 35G needle. We use Cortland salt solution as the vehicle, which is osmotically balanced for freshwater fish. Aeration of the gills is maintained during the injection procedure by first bringing the fish into a surgical plane of anesthesia, which allows slow operculum movements, and second, by holding the fish in a trough within a water-saturated sponge during the injection itself. We demonstrate the utility of IP injection by injecting glucose and monitoring the rise in blood glucose level and its subsequent return to normal. As stress is known to increase blood glucose in teleost fish, we compare blood glucose levels in vehicle-injected and non-injected adults and show that the procedure does not cause a significant rise in blood glucose.

We demonstrate intraperitoneal injection into adult zebrafish. We use a 10 &mu;l NanoFil microsyringe controlled by a Micro4 controller and UltraMicroPump III. This demonstration includes the use of cold water as an anesthetic.

성인 Zebrafish에 Intraperitoneal 사출

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also produce a source of patient-matched cells for regenerative therapies. iPSCs may be generated using multiple protocols and derived from multiple cell sources. Once generated, iPSCs are tested using a variety of assays including immunostaining for pluripotency markers, generation of three germ layers in embryoid bodies and teratomas, comparisons of gene expression with embryonic stem cells (ESCs) and production of chimeric mice with or without germline contribution2. Importantly, iPSC lines that pass these tests still vary in their capacity to produce different differentiated cell types2. This has made it difficult to establish which iPSC derivation protocols, donor cell sources or selection methods are most useful for different applications.
The most stringent test of whether a stem cell line has sufficient developmental potential to generate all tissues required for survival of an organism (termed full pluripotency) is tetraploid embryo complementation (TEC)3-5. Technically, TEC involves electrofusion of two-cell embryos to generate tetraploid (4n) one-cell embryos that can be cultured in vitro to the blastocyst stage6. Diploid (2n) pluripotent stem cells (e.g. ESCs or iPSCs) are then injected into the blastocoel cavity of the tetraploid blastocyst and transferred to a recipient female for gestation (see Figure 1). The tetraploid component of the complemented embryo contributes almost exclusively to the extraembryonic tissues (placenta, yolk sac), whereas the diploid cells constitute the embryo proper, resulting in a fetus derived entirely from the injected stem cell line.
Recently, we reported the derivation of iPSC lines that reproducibly generate adult mice via TEC1. These iPSC lines give rise to viable pups with efficiencies of 5-13%, which is comparable to ESCs3,4,7 and higher than that reported for most other iPSC lines8-12. These reports show that direct reprogramming can produce fully pluripotent iPSCs that match ESCs in their developmental potential and efficiency of generating pups in TEC tests. At present, it is not clear what distinguishes between fully pluripotent iPSCs and less potent lines13-15. Nor is it clear which reprogramming methods will produce these lines with the highest efficiency. Here we describe one method that produces fully pluripotent iPSCs and "all- iPSC" mice, which may be helpful for investigators wishing to compare the pluripotency of iPSC lines or establish the equivalence of different reprogramming methods.

Generating induced pluripotent stem cell (iPSC) lines produces lines of differing developmental potential even when they pass standard tests for pluripotency. Here we describe a protocol to produce mice derived entirely from iPSCs, which defines the iPSC lines as possessing full pluripotency1.

유도 만능의 줄기 세포에서 파생 마우스의 생성

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Gavaging Adult Zebrafish

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or agents in solutions for scientific research. Current methods for administering compounds orally to adult zebrafish are inaccurate due to variability in voluntary consumption by the fish. A gavage procedure was developed to deliver precise quantities of infectious agents to zebrafish for study in biomedical research. Adult zebrafish over 6 months of age were anesthetized with 150 mg/L of buffered MS-222 and gavaged with 5 &mu;l of solution using flexible catheter implantation tubing attached to a cut 22-G needle tip. The flexible tubing was lowered into the oral cavity of the zebrafish until the tip of the tubing extended past the gills (approximately 1 cm). The solution was then injected slowly into the intestinal tract. This method was effective 88% of the time, with fish recovering uneventfully. This procedure is also efficient as one person can gavage 20-30 fish in one hour. This method can be used to precisely administer agents for infectious diseases studies, or studies of other compounds in adult zebrafish.

The increasing use of zebrafish as an animal model requires the development of effective methods for the delivery of known quantities of compounds and solutions. The gavage procedure described below allows for the oral delivery of precise volumes of solution reliably, safely and efficiently to adult zebrafish.

성인 Zebrafish의를 Gavaging

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse incisor provides a model for these processes. This remarkable organ grows continuously throughout the animal&#39;s life and generates all the necessary cell types from active pools of adult stem cells housed in the labial (toward the lip) and lingual (toward the tongue) cervical loop (CL) regions. Only the dental stem cells from the labial CL give rise to ameloblasts that generate enamel, the outer covering of teeth, on the labial surface. This asymmetric enamel formation allows abrasion at the incisor tip, and progenitors and stem cells in the proximal incisor ensure that the dental tissues are constantly replenished. The ability to isolate and grow these progenitor or stem cells in vitro allows their expansion and opens doors to numerous experiments not achievable in vivo, such as high throughput testing of potential stem cell regulatory factors. Here, we describe and demonstrate a reliable and consistent method to culture cells from the labial CL of the mouse incisor.

The continuously growing mouse incisor provides a model for studying renewal of dental tissues from dental epithelial stem cells (DESCs). A robust system for consistently and reliably obtaining these cells from the incisor and expanding them in vitro is reported here.

성인 마우스 앞니의 치아 상피 줄기 세포의 분리 및 문화

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a prerequisite for studying the physiology of the isolated organ and for many innovative applications that may be possible in the future, including perfusion decellularization for kidney bioengineering or the administration of anti-rejection or genome-editing drugs in high doses to prime the kidney for transplantation. During the time of the perfusion, the kidney can be manipulated, renal function can be assessed, and various pharmaceuticals administered. After the procedure, the kidney can be transplanted or processed for molecular biology, biochemical analysis, or microscopy.
This paper describes the perfusate and the surgical technique needed for the ex vivo perfusion of mouse kidneys. Details of the perfusion apparatus are given and data are presented showing the viability of the kidney&#39;s preparation: renal blood flow, vascular resistance, and urine data as functional, transmission electron micrographs of different nephron segments as morphological readouts, and western blots of transport proteins of different nephron segments as molecular readout.

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. The buffers and surgical technique are described in detail.

마우스입니다 관류 신장 기법

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

트랜스-내부 세포 배아 줄기 세포의 대량 주입 리드 더 높은 Chimerism 요금

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina propria. EGCs play important roles in gut homeostasis through the release of various trophic factors and contribute to the integrity of the epithelial barrier. Most studies of primary enteric glial cultures use cells isolated from the myenteric plexus after enzymatic dissociation. Here, a non-enzymatic method to isolate and culture EGCs from the intestinal submucosa and lamina propria is described. After manual removal of the longitudinal muscle layer, EGCs were liberated from the lamina propria and submucosa using sequential HEPES-buffered EDTA incubations followed by incubation in commercially available non-enzymatic cell recovery solution. The EDTA incubations were sufficient to strip most of the epithelial mucosa from the lamina propria, allowing the cell recovery solution to liberate the submucosal EGCs. Any residual lamina propria and smooth muscle was discarded along with the myenteric glia. EGCs were easily identified by their ability to express glial fibrillary acidic protein (GFAP). Only about 50% of the cell suspension contained GFAP+ cells after completing tissue incubations and prior to plating on the poly-D-lysine/laminin substrate. However, after 3 days of culturing the cells in glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF)-containing culture media, the cell population adhering to the substrate-coated plates comprised of &#62;95% enteric glia. We created a hybrid mouse line by breeding a hGFAP-Cre mouse to the ROSA-tdTomato reporter line to track the percentage of GFAP+ cells using endogenous cell fluorescence. Thus, non-myenteric enteric glia can be isolated by non-enzymatic methods and cultured for at least 5 days.

Here, we describe the isolation of enteric-glial cells from the intestinal-submucosa using sequential EDTA incubations to chelate divalent cations and then incubation in non-enzymatic cell recovery solution. Plating the resultant cell suspension on poly-D-lysine and laminin results in a highly enriched culture of submucosal glial cells for functional analysis.

Submucosa 및 성인 마우스의 Lamina Propria 장의 Glial 세포의 고립

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...

In Vivo Surface Electrocardiography for Adult Zebrafish

The electrocardiogram waveforms of adult zebrafish and those of humans are remarkably similar. These electrocardiogram similarities enhance the value of zebrafish not only as a research model for human cardiac electrophysiology and myopathies but also as a surrogate model in high throughput pharmaceutical screening for potential cardiotoxicities to humans, such as QT prolongation. As such, in vivo electrocardiography for adult zebrafish is an electrical phenotyping tool that is necessary, if not indispensable, for cross-sectional or longitudinal in vivo electrophysiological characterizations. However, too often, the lack of a reliable, practical, and cost-effective recording method remains a major challenge preventing this in vivo diagnostic tool from becoming more readily accessible. Here, we describe a practical, straightforward approach to in vivo electrocardiography for adult zebrafish using a low-maintenance, cost-effective, and comprehensive system that yields consistent, reliable recordings. We illustrate our protocol using healthy adult male zebrafish of 12-18 months of age. We also introduce a rapid real-time interpretation strategy for quality validation to ensure data accuracy and robustness early in the electrocardiogram recording process.

Here, we present a reliable, minimally invasive, and cost-effective method to record and interpret electrocardiograms in live anesthetized adult zebrafish.

성인 얼룩말 피시를위한 생체 내 표면 심전도

The electrocardiogram waveforms of adult zebrafish and those of humans are remarkably similar. These electrocardiogram similarities enhance the value of ...