카나비노이드 전임상 연구를 위한 곤충 모델 시스템으로 담배 혼웜

요약

본 프로토콜은 카나비노이드 연구에서 담배 혼웜 만두카 sexta 를 사용하기위한 교육 정보를 제공합니다. 여기에 설명된 방법은 칸 나비 디올 (CBD) 치료에 대한 응답으로 곤충 모델의 생리적 및 행동 변화를 모니터링하는 모든 필요한 공급 및 프로토콜을 포함한다.

초록

의학에서 카나비노이드에 대한 관심이 증가함에 따라 여러 포유류 모델 유기체가 알려지지 않은 제약 기능을 해명하는 데 사용되었습니다. 그러나, 많은 어려움은 카나비노이드 연구를 위한 비 포유류 모형 유기체의 발달을 필요로 하는 포유류 연구에 남아 있습니다. 저자는 담배 뿔벌레 만두카 sexta 새로운 곤충 모델 시스템으로 제안한다. 이 프로토콜은 다양한 양의 칸 나비 디올 (CBD)으로 인공 식단을 준비하고, 재배 환경을 설정하고, CBD 치료에 대한 응답으로 생리적 및 행동 적 변화를 모니터링하는 방법에 대한 정보를 제공합니다. 간략하게, 뿔벌레 알을 수신하는 즉시, 계란은 12:12 광어두운 주기에 25°C에서 1-3 일을 허용하였고, 무작위로 제어에 분배되기 전에 부화하였다(밀 배아 계 인공 식단; AD), 차량(AD + 0.1% 중형 체인 트리글리세라이드 오일; MCT 오일) 및 치료 그룹 (AD + 0.1 % MCT + 1 mM 또는 CBD2 mM). 미디어가 준비되면, ^{1 번째} 인스타 애벌레는 나무 꼬치 스틱이있는 50 mL 테스트 튜브에 개별적으로 배치 된 다음 시험관은 치즈 천으로 덮여있었습니다. 측정은 CBD 관리에 대한 생리적 및 행동 적 반응을 위해 2 일 간격으로 수행되었습니다. 이 간단한 재배 절차는 연구원이 주어진 실험에서 큰 표본을 시험할 수 있게 합니다. 또한, 상대적으로 짧은 수명 주기는 연구원이 더 높은 포유류 모형 유기체에 있는 실험적인 디자인을 지원하는 데이터를 허용하는 동질적인 인구의 다세대에 칸 나비노이드 처리의 충격을 연구하는 것을 가능하게 합니다.

서문

지난 몇 년 동안, 대중의 관심은 간질 ¹, 파킨슨 병², 다발성 경화증 및 칸 나비 디올 (CBD)을 가진 다양한 형태의 암^4,5,6의 치료를 포함하여 치료 잠재력으로 인해 카나비노이드에 중점을 두었습니다. 대마초는 2018 년 농업 개선법에서 농업 상품으로 합법화되기 때문에, 공법 115-334 (2018 농장 법안), 대마초와 식품, 화장품 및 제약 산업의 카나비노이드 유도체는 기하 급수적으로 증가했습니다. 또한, 단일 카나비노이드 및 카나비노이드 혼합물의 임상 등급 분리는 인간 과목⁷, 세포주 ^5,8 및 다양한 동물 모델 시스템에서 성공적으로 테스트되었습니다^9,10.

프로토콜

1. 혼웜 제제 및 칸나비디올 치료

1. 150-200 실행 가능한 M을 가져옵니다. sexta 계란과 밀 배아 기반 인공 식단 ( 재료의 표 참조).
2. 혼웜 알을 밀 배아 기반 인공 식단(AD) 층으로 폴리스티렌 페트리 접시에 넣고 달걀을 40%-60%의 상대 습도로 25°C에서 유지한 곤충 사육챔버( 재료표 참조)로 옮긴다.
3. 담배 뿔벌레 알을 1-3일 동안 허용하여 상대 습도가 40%-60%로 25°C에서 유지되는 곤충 사육실 내부를 부화시도록 한다.
4. 칸 나비 디올 (CBD) 재고 솔루션 (200 mM)을 추가하여 1.26 g의 >98 % 순도 CBD는 EtOH (200 증거) 또는 100 % 중형 체인 트리글리세라이드 (MCT) 오일 ( 재료 표 참조)의 20mL로 분리합니다.
   참고 : CBD 격리는 빛에 민감하므로 어두운 에서 처리하십시오.
5. 200mM CBD 주식 솔루션의 5 mL 및 10 mL을 AD 1,000 g에 추가하여 각각 CBD의 다이어트 1 mM 및 2 mMM의 최종 농도를 가져옵니다.
   참고 : 완전히 균일 한 혼합물이 형성 될 ....

결과

칸 나비 노이드 독성을 검사하는 모델 시스템으로 만두카 sexta
그림 1 은 담배 혼벌레 만두카 sexta를 사용하여 CBD 실험의 주요 구성 요소를 묘사한다. 곤충의 큰 숫자 (>20)는 개별적으로 12 시간 :12 h = 빛 : 어두운 주기에 25 ° C에서 사육되었다. 곤충의 크기, 무게 및 사망률은 고용량 CBD (2 mM) 치료 후 단기 및 장기 응답을 모니터링하기 ?.......

토론

수유 연구는 CBD (2 mM)의 고용량이 곤충의 성장을 억제하고 사망률을 증가시켰다는 것을 보여 주었다³¹. 곤충 모델은 또한 에탄올에 대한 민감성을 보였다; 그러나 CBD는 에탄올 독성을 효과적으로 취화하여 생존율, 식이 소비 및 식품 검색 행동을 대조군과 유사한 수준으로 증가시켰습니다(그림 3A, B)³¹. 설명된 곤충 모델 시스템.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Analytic balance	Mettler Instrument Corp.	AE100S
Cannabidiol isolate (>99.4%)	Lilu's Garden
Cheesecloth	VWR INTERNATIONAL	470150-438
Corning 50mL clear polypropylene (PP) centrifuge tubes	VWR	89093-192
Ethyl Alcohol, 200 Proof	Sigma-Aldrich	EX0276-1
Fear conditioning chamber	Coulbourn Instruments
Insect rearing chamber	Darwin Chambers	INR034
Medium chain triglycerides (MCT) oil	Walmart
Motion detection software (Actimetrics)	Coulbourn Instruments
Polystyrene petri dish (120 mm x 120 mm x 17mm)	VWR INTERNATIONAL	688161
Tobacco hormworm artificial diet	Carolina Biological Supply Company	Item # 143908	Ready-To-Use-Hornworm-Diet
Tobacco hormworm eggs	Carolina Biological Supply Company	Item # 143880	Unit of 30-50