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Method Article
경골 골절-핀 모델은 골수내 손톱 내부 고정과 경골 전방 근육의 동시 손상을 동반한 편측 개방 경골 골절을 포함하는 정형외과 외상의 임상적으로 관련된 모델입니다. 이 모델의 열 감도는 45초 핫 플레이트 패러다임을 사용하여 측정할 수 있습니다.
경골 골절 핀 모델은 정형외과적 외상 및 수술에 대한 마우스 모델로, 인간에서 이러한 유형의 부상으로 나타나는 복잡한 근육, 뼈, 신경 및 결합 조직 손상을 요약합니다. 이 모델은 이전 정형외과적 외상 모델에는 여러 조직 유형(뼈, 근육, 신경)에 대한 동시 손상이 포함되지 않았고 인간의 복잡한 정형외과적 외상을 진정으로 대표하지 않았기 때문에 개발되었습니다. 따라서 저자들은 정형외과적 외상에 대한 이전 모델을 수정하고 경골 골절 핀 모델을 개발했습니다. 이 변형된 골절 모델은 골수내 손톱(IMN) 내부 고정과 동시 경골 전방(TA) 근육 손상을 동반한 편측 개방 경골 골절로 구성되어 있으며, 이로 인해 손상 후 최대 5주까지 지속되는 기계적 이질통이 발생합니다. 이 일련의 프로토콜은 임상적으로 관련된 정형외과 외상 경골 골절 핀 모델을 수행하기 위한 세부 단계를 간략하게 설명한 다음 정형외과 손상 후 통각 변화를 검사하기 위해 수정된 열판 분석을 수행합니다. 이러한 상세하고 재현 가능한 프로토콜을 종합하면 통증 연구자들은 정형외과적 외상으로 인한 통증을 연구하기 위한 툴킷을 확장할 수 있습니다.
정형외과적 외상은 전 세계적으로 매년 약 5억 명이 입는 모든 부상의 25%를 차지합니다 1,2,3. 정형외과적 외상은 복잡한 근육, 뼈, 신경 및 결합 조직의 손상과 관련이 있을 수 있으며, 적절한 회복을 위해 입원과 수술이 필요할 수 있다 3,4. 정형외과적 외상 후 급성 및 만성 통증은 환자의 삶의 질에 영향을 미치는 상당한 신체적, 심리적, 재정적 부담을 초래할 수 있다 1,4. 또한 골절을 안정시키고 고정하기 위한 정형외과 수술은 심각한 급성 및 만성 수술 후 통증과도 관련이 있습니다 5,6,7,8,9.
더 나은 치료법을 개발하기 위해서는 급성 및 만성 외상 관련 통증의 기저에 있는 메커니즘을 더 잘 이해해야 합니다. 이를 위해서는 신뢰할 수 있고 재현 가능하며 임상적으로 관련성이 있는 전임상 모델이 필요합니다. 대부분의 정형외과적 외상에 대한 동물모델은 여러 조직 유형(뼈, 근육, 신경)에 대한 동시다발적인 손상을 포함하지 않았기 때문에 인간의 복잡한 정형외과적 외상(예: 낙상 후 외상, 자동차 충돌 또는 전쟁 관련 부상)을 진정으로 대표하지 않았다10,11. 따라서 우리는 뼈와 근육 조직 손상, 급성 및 만성 통증을 포함한 이러한 손상의 주요 징후를 조사하기 위해 경골 골절-핀 마우스 모델을 개발했다11. 경골 골절-핀 모델은 IMN 내부 고정과 동시 TA 근육 손상을 동반한 편측 개방 경골 골절로 구성됩니다. TA의 조직학적 단면은 근육 손상에서 밀집성 섬유화가 발생하고 손상 후 2주 이내에 크고 성숙한 근 섬유가 손실되는 것을 보여줍니다. 더욱이, 골절 굳은살은 부상 후 4주가 지난 후 마이크로컴퓨터 단층촬영(microCT)에서 뚜렷하게 나타나며 리모델링이 계속되고 있다11.
다양한 반사적 및 비반사적 행동 분석을 사용하여 경골 골절-핀 모델에서 통증의 감각 및 정서적 구성 요소를 평가할 수 있습니다. 예를 들어, Von Frey 필라멘트를 사용하여 이 모델에서 기계적 과민성을 입증할 수 있습니다. 실제로, 생쥐는 경골 골절 핀 수술 후 동측 뒷발에서 오래 지속되는 기계적 과민증을 발달시킵니다11. 특히 유용한 또 다른 행동 패러다임은 전통적으로 열 자극에 대한 발바닥 철회까지의 대기 시간을 측정하는 핫 플레이트 분석입니다. 이 분석법은 수십 년 동안 사용되어 왔지만12 전임상 통증 연구의 황금 표준이지만, 반사 행동을 측정하는 것만으로는 한계가 있습니다13. 결과적으로, 우리는 열 자극14의 설정에서 반사적 및 비반사적 반응의 요소를 모두 포착할 수 있는 수정된 핫 플레이트 패러다임을 개발했습니다.
이 수정된 핫 플레이트 분석은 원래 핫 플레이트 테스트에서와 같이 초기 응답 대기 시간을 결정하고 추가 유해 행동을 기록하기 위해 확장된 관찰 기간을 결정합니다. 이러한 확장된 행동을 뚜렷한 범주(움찔하기, 핥기, 지키기, 뛰기)로 분류함으로써 열 자극에 대한 비반사적 반응을 포착할 수 있습니다. 움찔거림은 발바닥의 빠른 제거 및/또는 손가락의 벌림이지만 팔다리는 빠르게 핫 플레이트로 돌아갑니다. 뒷발과 앞발을 핥거나 무는 것은 모두 분석을 위해 핥는 것으로 정의됩니다. 보호는 구심성 통각 정보가 끝날 때 팔다리를 계속 들어 올리는 것입니다. 마지막으로, 점프는 핫 플레이트 표면에서 네 개의 팔다리를 모두 제거하는 것입니다. 이러한 동작은 개별적으로 분석하고 초기 응답 대기 시간을 기록하기 위해 특별한 주의를 기울여 함께 그룹화할 수 있습니다.
이 연구를 수행하는 동안 사용된 모든 방법은 미국 수의학 협회 지침 및 국제 통증 연구 협회에 따라 Stanford University Administrative Panel on Laboratory Animal Care(APLAC #33114)의 승인을 받아 수행되었습니다. 마우스(C57BL/6J, 도착 시 생후 9-11주, 연구 시작 시 생후 11-12주)는 케이지당 2-5마리를 수용하고 음식과 물에 임시 로 접근할 수 있는 온도 제어 환경에서 12시간의 명암/암흑 주기로 유지되었습니다. 연구 시작 시 수컷 마우스의 체중은 약 25g이었습니다. 이 연구에 사용된 모든 재료에 대한 자세한 내용은 재료 표를 참조하십시오.
1. 기준 행동 측정
2. 마취/준비
3. 수술
4. 수술 후
5. 열판 테스트
참고: 부상 후 측정은 경골 골절 핀 수술 후 7일 후에 시작할 수 있습니다. 이 패러다임에서 학습의 영향을 피하려면 수술 후 한 번 테스트를 수행하고 손상되지 않은 대조군과 비교하십시오.
경골 골절-핀 orthotrauma 모델은 복잡한 인간 부상에서 볼 수 있는 뼈, 근육 및 통증과 유사한 행동을 재현합니다. 그림 1C에서 볼 수 있듯이 경골 골절은 시간이 지남에 따라 치유되어 골절 부위에 굳은살을 형성하며 부상 후 4주가 지난 후에도 여전히 볼 수 있습니다. 위에서 설명한 뼈톱을 사용한 측면 접근의 결과(3.5단계)로, 경골 전방근이 손상되어 ...
프로토콜 내의 중요한 단계
수술 내내 무균 상태를 유지하는 것이 중요합니다. 또한 수술 전, 수술 중, 수술 후에 적절한 동물 관리는 모델의 성공적인 생성을 위해 가장 중요합니다. 프로토콜에서 앞서 언급했듯이 수술을 할 때 근육 부상을 방지하기 위해 측면에서 뼈를 골절합니다. 경골이 너무 낮게 골절되지 않도록 주의해야 합니다(경골의 중간과 원위 ...
저자는 공개할 관련 이해 상충이 없습니다.
GM은 NDSEG 대학원 펠로우십과 Stanford Bio-X 명예 대학원 펠로우십의 지원을 받습니다. VLT는 NIH NIGMS 보조금 #GM137906 및 Rita Allen Foundation의 지원을 받습니다.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
27 G needles | Medsitis | 305136 | https://medsitis.com/products/bd-precisionglide-27-g-x-1-1-4-hypodermic-needles-305136?variant=39724583299 |
5-0 suture | esuture | SN5668 | https://www.esutures.com/product/0-in-date/2-/132-/16552-medtronic-monosof-black-18-p-11-cutting-SN5668/ |
Alcohol swabs | Amazon | B00VS4F91W | https://www.amazon.com/Dynarex-Alcohol-Prep-Sterile-Medium/dp/B00VS4F91W |
Alternative drill bits | Rio Grande | 341602 | https://www.riogrande.com/product/BuschTungstenVanadiumRoundBur Set0314mm/341602 |
Bone saw drill attachment | Amazon | B07DSXR3NY | https://www.amazon.com/dp/B07DSXR3NY |
Buprenorphine | Fidelis Pharmaceuticals | https://ethiqaxr.com/ordering/ | |
Ceramic implant (alternative to pin) | RISystem | RIS.221.103 | https://risystem.com/platefixation/mousescrew |
Chux (Absorbent Underpad) | Fisher Scientific | NC0059881 | https://www.fishersci.com/shop/products/underpad-17x24-chux-300-cs/nc0059881#?keyword=true |
C57BL/6J mice | The Jackson Laboratory | Jax #00664 | https://www.jax.org/strain/000664 |
Cotton swabs | Uline | S-18991 | https://www.uline.com/Product/Detail/S-18991/First-Aid/Cotton-Tipped-Applicators-Industrial-6 |
Cutting pliers | Amazon | B076XYVS6Y | https://www.amazon.com/iExcell-Diagonal-Cutting-Nippers-Chrome-Vanadium/dp/B076XYVS6Y |
Drill | Chewy | 129044 | https://www.chewy.com/dremel-cordless-dog-cat-rotary-nail/dp/156127 |
Drill bits | Amazon | B00HVIGSX2 | https://www.amazon.com/Universal-Diamond-Dremel-Rotary-Tool/dp/B00HVIGSX2 |
Electric shaver | Kent Scientific | CL9990-KIT | https://www.kentscientific.com/products/trimmer-combo-kit/ |
Eye lube | Amazon | B07H2NLCX5 | https://www.amazon.com/OptixCare-Lube-Plus-Hyaluron-Horses/dp/B07H2NLCX5 |
Gauze pads 2" x 2" | Amazon | B07GHDTB53 | https://www.amazon.com/Covidien-Curity-Sterile-Peel-Back-Package/dp/B07GHDTB53 |
Gauze pads 4" x 4" | Amazon | B00KJ6YFTC | https://www.amazon.com/Covidien-6309-Curity-Gauze-Pads/dp/B00KJ6YFTC |
High definition video camera | The Imaging Source | DFK 22AUC03 | https://www.theimagingsource.com/products/industrial-cameras/usb-2.0-color/dfk22auc03/?adsdyn&gclid=Cj0KCQiA3-yQBhD3ARIsAHuHT64uIIlImBvh_ toh-3GFSgBcL_fRc1gQTDyXlqDEa Qu4n2_VbWEiRuIaAiueEALw_wcB |
Inhalational anesthesia system | Kent Scientific | https://www.kentscientific.com/products/vaporizer-with-vetflo-single-channel-anesthesia-stand/ | |
Iodine solution | Amazon | B005FR7XIK | https://www.amazon.com/Dynarex-Povidone-Iodine-Scrub-Solution/dp/B005FR7XIK |
Iodine swab sticks | Amazon | B001V9QKMG | https://www.amazon.com/POVIDONE-IODINE-SWAB-1202-25Box/dp/B001V9QKMG |
Isoflurane | California pet pharmacy | https://www.californiapetpharmacy.com/fluriso-isoflurane-250ml.html | |
NCH Prism Software | https://www.nchsoftware.com/prism/index.html | ||
Plastic Cylinder | Amazon | B08R5KM5B6 | https://www.amazon.com/FixtureDisplays-Acrylic-Diameter-Thickness-15140-8-NPF/dp/B08R5KM5B6 |
Saline | Fisher Scientific | NC9054335 | https://www.fishersci.com/shop/products/saline-injection-0-9-10ml/NC9054335 |
Scalpel | Fisher Scientific | 12-000-162 | https://www.fishersci.com/shop/products/high-precision-10-style-scalpel-blade/12000162#?keyword= |
Scalpel handle | Amazon | B0056ZX1R8 | https://www.amazon.com/Swann-Morton-Scalpel-Handle-blades/dp/B0056ZX1R8 |
Thermal place preference apparatus | BIOSEB | BIO-T2CT | https://www.bioseb.com/en/pain-thermal-allodynia-hyperalgesia/897-thermal-place-preference-2-temperatures-choice-nociception-test.html |
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