JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
여기에서는 패터닝 및 성장 결함을 정량화하기 위해 성인 초파리 눈의 고해상도 이미징을 위한 빠르고 저렴한 워크플로우를 제시합니다. 포인트 마운팅(point-mounting), 고해상도 이미지 획득(high-resolution image acquisition) 및 이미지 분석을 통한 시료 전처리를 위한 프로토콜에 대해 설명합니다.
초파리(Drosophila) 겹눈은 형태 형성을 주도하는 분자 메커니즘과 생물학적 과정을 밝혀낸 정밀한 패턴의 조직입니다. 그것은 유전적 상호 작용과 유전자 기능을 특성화하는 데 사용되는 ommatidia라고 하는 반복되는 단위 눈의 간단한 구조입니다. 눈 구조에 영향을 미치는 돌연변이는 쉽게 감지하고 분석할 수 있습니다. 따라서 이 시스템은 자원이 부족한 기관에서 자주 사용됩니다. 추가 표현형 분석에는 종종 정량 분석에 적합한 고배율 이미지를 생성하기 위해 주사 전자 현미경(SEM)이 포함됩니다. 그러나 SEM은 비용이 많이 들고 값비싼 시약이 필요합니다. 샘플 준비는 며칠에 걸쳐 진행됩니다. 또한 시료 준비 및 기기 유지보수를 위해 상근 직원이 필요한 경우가 많습니다. 이로 인해 자원이 부족한 기관이나 긴축 예산 기간 동안 유용성이 제한됩니다. 곤충학에서 고해상도 디지털 이미징 기술의 사용은 종의 식별 및 특성화를 위한 일반적인 관행입니다. 이 논문은 개방형 소프트웨어 ImageJ를 사용하여 성체 초파리 구조의 고해상도 디지털 이미징과 정량 분석을 가능하게 하는 전략을 결합하는 방법을 설명합니다. 이 워크플로우는 정량적 표현형 분석에 대한 비용 효율적이고 신속한 접근 방식을 통해 자금이 부족하고 자원이 부족한 연구 시설의 한계를 해결하는 빠르고 학생 친화적인 대안입니다.
Drosophila melanogaster는 분자 신호 전달 경로와 세포 행동을 규명하기 위해 수십 년 동안 사용되어 온 강력한 유전자 모델 유기체입니다. 다세포 발달에 필수적인 진화적으로 보존된 많은 신호 전달 경로가 처음으로 확인되었고 그 작용 메커니즘이 초파리에서 정의되었습니다. 모든 인간 질병 관련 유전자의 약 65-75%는 Drosophila 1,2에 ortholog를 가지고 있습니다. 성인 초파리 눈은 암 3,4, 신경 퇴행5 및 대사 장애6를 포함한 인간 질병과 관련된 중요한 보존 유전자의 발견을 용이하게 하는 편견 없는 유전자 검사를 가능하게 한 중요한 모델입니다.
초파리의 눈은 옴마티디아(ommatidia)라고 불리는 ~800개의 눈들로 구성되어 있으며, 이들은 성인
1. 성인 초파리 수집 및 고정
2. 포인트 마....
Drosophila eye는 조직 패턴화, 성장 조절 및 세포 사멸을 연구하기 위한 훌륭한 모델 시스템입니다. 당사는 최근 세포 내 pH(pHi)가 조직 성장에 어떤 영향을 미치는지 조사한 연구를 발표했습니다. 첫째, 발달 중인 눈에서 나트륨-양성자 교환기 DNhe2(포유류 NHE1의 ortholog)의 과발현이 패턴 결함을 유발하고 증식을 증가시키는 유전 시스템을 확립했다16.......
여기에서는 시료 전처리, 고분해능 이미징 및 성체 초파리 구조 분석을 위한 방법을 설명합니다. 초파리 눈은 유전적으로 다루기 쉬운 모델 시스템으로, 암19, 신경 퇴행20 및 대사 질환21을 포함한 질병의 기저에 있는 분자 메커니즘에 대한 중요한 통찰력을 제공합니다. 특히, 암환자 "아바타(avatar)"는 종?.......
저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.
저자들은 토론과 지원에 대해 Grillo-Hill pHly 연구소의 구성원들에게 감사의 뜻을 전합니다. 탁월한 기술 지원을 제공해 주신 Tim Andriese, Randy Kirschner, Kitty (Ngoc-Huong) Nguyen, Marco Parent, Jonny Shaloub, Librado Veliz에게 감사드립니다. 이 연구는 NIH SC3GM132049 및 1R16GM153640 상(BKGH), CSU 생명공학 교수-학생 연구상(LM 및 BKGH), 산호세 주립대학교(FJL)의 과학 대학 및 생물 과학과의 초기 자금의 지원을 받았습니다. 이 과정에서 보여준 지략과 도움에 대해 베른트 베커(Bernd Becker)에게 특별한 감사를 표합니다. 우리는 우리의 그림에 고품질 아이콘을 제공해 준 BioIcons (https://bioicons.com/) 커뮤니티에 감사하며, 특히 피펫 아이콘에 대한 Serviere와 CC-BY 4.0 Unported에 따라 라이선스가 부여된 그림 1 및 그림 2에 사용된 Drosophila, 겸자 및 탁상용 전자 현미경 아이콘에 대한 DBCLS에 감사드립니다. 또한 크리에이티브 커먼즈 4.0 라이선스(CC-BY)....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
1 mL serological pipette | ThermoFisher Scientific | 170353N | |
1.7 mL microcentrifuge tubes | Genesee Scientific | 24-282LR | |
20x Apo Microscope Objective | Mitutoyo Corp. | 378-804-3 | |
Archival 65 lb cardstock | Neenah, Inc. | 91901 | |
Canon EF 70-200 mm USM II telephoto lens | Canon | 3044C002 | |
Canon EOS 6D Mark II DSLR Camera Body | Canon | 1897C002 | |
Diffuser Dome | Macroscopic Solutions | PA-DIF-GIM-SM | |
Diffuser for Mitutoyo M Plan APO Objectives | Macroscopic Solutions | mitutoyo-diffusers | |
Drosophila vials and plugs | Genesee Scientific | 32-117BF | |
Dumont #5 fine-tip forceps | Fisher Scientific | NC9889584 | |
Goose feathers | Amazon | B01CMMJI6U | |
Heavy-Duty Anodized Aluminum Tripod | Really Right Stuff, LLC | TFA-32G | |
Kimwipes | Fisher Scientific | 06-666A | lint-free lab tissue |
Levenhuk M1000 Plus Digital Camera | Levenhuk | 70358 | |
No. 3 mounting pin | Indigo Instruments | 33414-3 | |
Nutri-Fly Bloomington Drosophila media | Genesee Scientific | 66-113 | fly food |
Point-Punch | M.C. Mieth Manufacturing, Inc. | 448Detail | |
Screwknob Clamp | Really Right Stuff, LLC | SK-Clamp | For attaching the macro rail to the tripod |
Stackshot Controller and Macro Rail | Cognisys Inc. | ST3X_100_BUNDLE | |
Step-down Ring Adapter | RAF Camera | 763461174207 | Lens adapter to connect the microscope objective to the camera lens |
Titebond Glue | Franklin International | 5013 | |
Yongnuo YN-24-EX Macro Twin Lite Flash | Shenzhen Yongnuo Photographic Equipment Co. | YN-24EX | |
Software | |||
Canon EOS Utility (v. 3.16.1). | Canon | acquisition software | |
FIJI | National Institutes of Health | Fiji is released as open source under the GNU General Public License. FIJI Version 2.14.0/1.54f | |
GraphPad Prism | GraphPad Software, Boston, Massachusetts USA | Prism Version 10.3.1 | |
Zerene Stacker (v.1.04) | Zerene Systems, LLC | Focus Stacking Software |
JoVE'article의 텍스트 или 그림을 다시 사용하시려면 허가 살펴보기
허가 살펴보기This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. 판권 소유