저자는 자신의 지속적인 기술 지원 Ikiel Ptito 감사하고 싶습니다. MP에 NSERC 부여합니다.

1 부 : 조직의 사전 처리 버크 외에 따라 수행되어야합니다. (2009) 5. <ol><li> 간단히, 조직이 잘 paraformaldehyde, 글루 타 알데히드, 또는 포르말린과 perfused해야합니다. 이것은 일반적으로 다른 장기를 수확하는 데 사용되는 표준 transcardial 재관류를 통해 달성될 수있다. 현재 연구에서 주제가 깊이 나트륨 pentobarbital (25 MG / kg, IV)의 과다로 euthanized 케타민을 하이드로 클로라이드 (10 MG / kg, IM)과 진정했고 완전히 exsanguinated 때까지 0.1 M PBS로 transcardially perfused. 이것은 5 분 (~ 1리터)을 PBS에 4 % paraformaldehyde 솔루션옵니다. 조직은 잘 paraformaldeyhde, 글루 테르 알데히드 또는 포르말린과 perfused해야합니다. 두뇌가 stereotaxically, 차단 두개골에서 제거, 무게되어야, 볼륨 결정 cryoprotected, 5 냉동. </li></ol> 2 부 : 조직의 체계적인 샘플링, 버크 외했다. (2009) 6. <ol><li> 이 예제에서 우리는 vervet 두뇌의 전두엽에 초점을 맞추었습니다. 참조 공간은 중앙 고랑에서 왼쪽 북반구의 전두엽 극으로 대뇌 피질의 조직을 포함하도록 정의되었다. 우리의 목적을 위해 시리즈는 50μm에서 sectioned 피질 전반에 걸쳐 10분의 1 섹션에서 설정되었다. 하나의 완전한 시리즈는 cresyl 바이올렛 (시리즈 # 1)와 스테인드했습니다. 섹션의 절반 myelin의 계시와 아세틸콜린의 esterase에 대한 다른 반쪽의 스테인드 (특정 subcortical 지역의 묘사)을위한 황금 염화 물들일 너무나 시리즈 2 분할되었다. 다른 모든 시리즈는 우리의 장기적인 연구 계획의 일환으로 항원 보존에 틀었되었습니다. </li></ol> 파트 3 : Stereology (자세한 내용은, 무통 2002 참조) 4 <ol><li> 세포 숫자의 총 평가 (N)은 다음 방정식에 따라 계산됩니다 : N = ssf -1 X ASF -1 X tsf -1 X Σ Q - 계산의 관심 개체의 총 수입니다 - 두께 샘플링 분율 (조직의 측정 두께가 해부학자 높이로 나눈 어디에), 그리고 Σ Q는 경우 ssf의 시작 부분 샘플링 분수는 어디, ASF는 지역 샘플링 분수, tsf입니다 해부학자 이내. 이 프로토콜의 다음 섹션 ssf, ASF, tsf과 Σ Q를 결정하는 방법을 보여줍니다. </li><li> 섹션 샘플링 분율 (비 컴퓨터 기준) <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> 전체 참조 공간은 잘 복부에 사후에 앞쪽에와 지느러미에서 정의해야합니다. 이 예제에서 우리는 전두엽에 관심이 있었는데 전두엽 극 (앞쪽에)의 끝에서 중앙 고랑 (후부)과 측면 고랑 (복부)에 지역으로 정의하고 인슐라을 제외했습니다. </li><li> 이 특정 주제의 전두엽에 대한 760 섹션의 총 체계적으로 cresyl 바이올렛 76 스테인드 함께 수집했다. 대상은 참조 공간에 걸쳐 10 섹션 이후 육분의 일 cresyl 바이올렛 스테인드 섹션 1 / 60의 섹션 샘플 분수로 이어지는, 샘플링했다. 우리는 무작위로 첫번째 6 cresyl 보라색 스테인드 섹션 중 하나를 시작하여 체계적으로 이후 육분의 일 중에서도. 13 섹션의 총 선택 제목 (그림 2) 샘플되었습니다. </li></ol></li><li> 지역 샘플 분율 (컴퓨터 기준) <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> 파일럿 연구는 약 100-300 disectors로 참조 공간을 샘플로, 최적의 그리드 크기, 지역 샘플링 분수를 나타냅니다. 전두엽 내에서, 2500 μm의 2 격자 크기는이 주제에 대한 254 disectors (그림 2)의 평균이 나왔고. disector의 크기는이 경우에는 0-5 집계 개체, 뉴런에 대한 사이를 얻을 것입니다. </li></ol></li><li> 두께 샘플 분율 (컴퓨터 기준) <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> 각 disector 위치에서 조직의 높이가 측정되며,이 높이의 분수는 샘플이며 이것은 두께 샘플링 분수로 알려져 있습니다. 마지막으로 개체가 초점 그냥 나타날 때까지 첫 번째 세포가 다시 약간 섹션, 즉 상단에 다음 초점에 와서까지 측정된 두께를 확인하려면 Z - 비행기를 통해 중점을두고 있습니다. 세포가 초점 거의 때까지 조직의 바닥을 확인하려면, Z - 비행기를 통해 중점을두고 있습니다. </li><li> Z - 비행기를 통해 초점, 세포마다 깊이에 물들다해야한다하지 않을 경우,이 섹션이 다시 묻은되어야하는 경우, 조직의 얼룩이나 비 균일한 탈수의 불완전 침투를 나타낼 수 있습니다. 이주의는 비교적 두꺼운 조직 섹션을 통해 immunoprobes의 침투력을 필요로 immunostained 조직에 특히 중요합니다. 이러한 이유로, immunostained 조직은 가볍게 basophilic 얼룩 (예 : cresyl 바이올렛, hema와 counterstained해야toxylin) 순서로 정확하게 섹션의 상단과 하단을 확인하고 항체의 침투를 확인합니다. 본 연구에서는 섹션은 50μm의 마이크로톰 설정에 얇게했다. 모든 조직 처리가 완료된 후, 측정된 조직의 두께는 65 % 정도의 의미 수축과 17.9μm (그림 2) 평균. 이러한 결과는 일상 histological 준비 7에 대한 처리 조직에 대한 일반적인 수축을 대표합니다. </li><li> 전형적인 연구에 대한 기본 disector 높이가 10μm이다. disector 높이와 측정 부분의 두께 사이의 차이점은 경비의 높이, 더 생물 학적 기능이 계산되지 않습니다 조직의 볼륨입니다. 가드 높이의 사용 (예, 분실 모자) sectioning 표면에서 조직 손상을 방지합니다. </li></ol></li><li> 개체의 총 수입은 계산, Σ Q - <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> 인식 오류에서 편견을 피하기 위해, 그것은 표준 정의가 관심의 특정 생물 학적 기능에 따라입니다 필수적입니다. 이 경우, 우리는 뉴런을 계산에 관심이 있었다. 따라서 신경 세포는 glial 세포가 일반적으로 볼 수 nucleoli와 세포질이 부족해 반면, 보이는 중앙에 위치한 nucleolus하고 명확하게 정의된 세포질을 가진 것으로 정의했다. 이 주제에 457 뉴런은 계산 하였다. </li></ol></li></ol> 4 부 : Stereologer - 전산 Stereology 시스템 (Stereology 리소스 센터, 체스터, MD) <ol><li> Stereologer 시스템은 사용자가 단계별로 패션에 필요한 정보를 기입하라는 메시지가 나타납니다. &quot;유학 정보 &#39;섹션에서 연구의 매개 변수가 설정됩니다. 참조 공간이 연구에 대해 정의해야하므로, 볼륨 매개 변수 (참조 공간 Cavalieri 견적 도구 (Traffic Estimator)를 선택한다)을 선택합니다. 개체 볼륨도 관심 객체의 인구의 번호 - 가중치 볼륨을 추정하려면 여기를 선택할 수 있습니다. 우리의 예를 들어, 참조 공간만을 볼륨이 선택되었습니다. 각 개체에 대해 번호를 선택하고이 경우 뉴런에 대한 관심의 기능을 정의합니다. </li><li> 사례 초기화 :이 섹션에서는 샘플링 정보가 설정됩니다. 슬래브 샘플링 간격 (조직 별도의 슬라브는 철저하게 슬라이스되었으며 각 섹션이 순차적으로 배치하는 경우에는 다음 여기에 1을 입력)를 입력합니다. 참조 공간 (760이 경우)를 통해 촬영한 섹션의 총 수를 입력합니다. 다음 섹션 샘플링 간격 (이 경우 59)을 입력합니다. 시스템이 (이 경우 13) 샘플 수 섹션의 수를 계산합니다. </li><li> 프로브 매개 변수 :이 섹션은 그리드와 disector 크기를 정의합니다. 볼륨의 경우 편집 메뉴에서 격자 간격을 정의하기 위해 2.5x - 10X 낮은 배율을 사용합니다. 개체 배율은 100x (NA 1.3 1.4)에서 수행되어야합니다. 프레임 영역은 disector의 크기이 경우에 우리는 50 % 화면을 사용. 프레임 높이 disector의 두께이며 여기 10μm에서 설정할 수 있습니다. 프레임 간격은 격자의 크기입니다. 우리의 파일럿 연구에서 우리는 150-200 프레임 사이 2500μm 수확량은 비교적 큰 레퍼런스 공간을 통해 체계 - 균일한 방식으로 간격 것으로 나타났습니다. 작은 영역에 대한, 작은 격자 크기를 사용해야합니다. 파일럿 연구는 각 특정 연구에 대한 광학 프로브 매개 변수를 식별합니다. </li><li> 일단 공부 매개 변수가 설립되어, 조직을 통해 샘플링하면 계속 진행됩니다. 프로그램은 첫 번째 섹션을 예제하라는 메시지가 나타납니다 1 단계 :. 프로그램 섹션에서 참조 공간을 추적하기 위해 낮은 배율에서 사용자에게 메시지가 표시됩니다. 시스템이 해당 지점이 참조 공간 내에서 가을에 확인됩니다 프로브 매개 변수와 사용자에 따라 섹션을 통해 그리드를 배치합니다. 지점이 참조 공간 내에서하지 않으면 단순히 지점을 클릭하고 볼륨으로 계산되지 않습니다 2 단계 :. 시스템이 프레임 간격 매개 변수에 따라 참조 공간을 통해 새로운 그리드를 배치합니다. 확인하는 교차로는 참조 공간 내에서 가을 3 단계 :. 시스템이 다음 사용자가 더 높은 배율의 목표로 전환하고 첫 번째 해부학자로 무대를 이동하라는 메시지가 나타납니다 4 단계 :.이 시점에서 시스템은 사용자가 정의하라는 메시지가 나타납니다 . 상단과 섹션의 하단에 다음 시스템은 Z 축 5 단계에서 샘플링 공간을 설정 : 사용자가 다음 Z - 비행기를 통해 disector에 속하는 각 개체를 클릭합니다. 붉은 선 또는 disector의 땅에 닿으면 개체가 계산되지 않을 수 있습니다. 각 개체가 계산되면 다음을 클릭합니다. 단계는 다음 disector과 4와 5를 반복한다 단계로 이동합니다. 일단 섹션의 disectors의 모든 시스템이 탐지하는 다음 순차 부분을 삽입하는 사용자에게 묻습니다, 계산되었습니다. 순차 섹션의 모든 때까지 단계 1-5을 반복합니다샘플되었습니다. 시스템이 ASF, ssf, tsf, 그리고 Σ Q에 대한 계산을 제공합니다. 이러한 매개 변수를 기반으로, 시스템은, 참조 볼륨을 예상 N을 생성하고 CE의 예상 번호와 볼륨 모두 것입니다. 또한보다 효율적으로되기 위해 권장 사항을 제공합니다 또는 CE (그림 2)을 줄일 수 있습니다. </li></ol> 제 5 부 : 대표 결과 : 불편 stereology는 참조 공간 내에서 세포 인구의 효율적이고 신뢰할 수있는 견적을 제공합니다. 체계적 표본 추출 및 정의 참조 공간에 의존하는 모든 가능한 컴퓨터 기반 stereological 시스템의 여러 가지가 있습니다. 우리는 0.042의 평균 CE와 함께 828 백만 (그림 3) 이상으로 2 년 된 vervets의 대뇌 피질의 전체 인구의 연결을 예측할 수있는 BioQuant 생명 과학 시스템을 사용하고 있습니다. 우리는 이후 추정에 Stereologer 시스템을 사용한 대뇌 피질의 뉴런의 절반에 대한 숫자 8에 대한 전두엽 계정 것을. <img src="/files/ftp_upload/1262/1262fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1 컴퓨터 기반 Stereology 시스템. stereology 시스템의 기본 셋업은 전동 무대 (XYZ)와 같은 현미경, 무대 컨트롤러, 비디오 카메라, 컴퓨터 및 소프트웨어입니다. 궁극적으로 선택되는 시스템은 효율성, 요구 사항 및 비용 분석에 기초해야합니다. <div style="border:1px #000000 solid"><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 연구 정보 </td></tr><tr><td> 스터디 이름 </td><td> 전두엽 피질 </td></tr><tr><td> 교장 인베스티게이터 </td><td> 메가바이트 </td></tr><tr><td> 종 </td><td> AG </td></tr><tr><td> 참조 스페이스 정면 </td><td> 피질 </td></tr><tr><td colspan="2"> 노트 </td></tr><tr><td colspan="2"> 사례 정보 </td></tr><tr><td> 데이터 수집기 </td><td> 메가바이트 </td></tr><tr><td> 날짜 </td><td> 수요일, 2008 년 4월 30일 </td></tr><tr><td> 그룹 </td><td> 제어 </td></tr><tr><td> 제목 </td><td> O26 </td></tr><tr><td colspan="2"> 노트 </td></tr><tr><td colspan="2"> 샘플링 특성 </td></tr><tr><td> 슬래브 샘플링 간격 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> 섹션의 총 수 </td><td> 760 </td></tr><tr><td> 섹션 샘플링 간격 </td><td> 59 </td></tr><tr><td> 시작 섹션 </td><td> 2 </td></tr><tr><td colspan="2"> 분수 </td></tr><tr><td> ASF </td><td> 0.0002 </td></tr><tr><td> SlabSF </td><td> 1.0000 </td></tr><tr><td> SSF </td><td> 0.0169 </td></tr><tr><td> TSF </td><td> 0.5587 </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="6"> 결과 요약 </td></tr><tr><td> 매개 변수 </td><td> 탐침 </td><td> 이름 </td><td> 결과 </td><td> CE </td><td> SD </td></tr><tr><td> 두께 </td><td> --- </td><td> --- </td><td> 17.8996 μ </td><td> --- </td><td> --- </td></tr><tr><td> 번호 </td><td> Disector </td><td> 신경 세포 </td><td> 243833769.1473 </td><td> 0.0474 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> 음량 </td><td> Cavalieri 포인트 그리드 </td><td> 음량 </td><td> 1719769397954.1284 μ ^ 3 </td><td> 0.0078 </td><td> N / A </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 추천 </td></tr><tr><td> 탐침 </td><td> 개체 번호 (뉴런) </td></tr><tr><td> CE </td><td> 0.0474 </td></tr><tr><td> 추천 </td><td> CE이 허용됩니다. </td></tr></tbody></표&gt; <table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 조회 Disectors의 숫자가 너무 높은, Disector 간격을 늘립니다. </td></tr><tr><td> 탐침 </td><td> 지역 볼륨 (볼륨) </td></tr><tr><td> CE </td><td> 0.0078 </td></tr><tr><td> 추천 </td><td> CE이 허용됩니다. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="3"> 제 결과 </td></tr><tr><td> 섹션 </td><td> 신경 세포는 신경 세포 NumCorners을 NumObjects </td><td> 볼륨 RegPoints </td></tr><tr><td> 1. 40 </td><td> 48 </td><td> 34 </td></tr><tr><td> 2. 26 </td><td> 52 </td><td> 44 </td></tr><tr><td> 3. 29 </td><td> 56 </td><td> 48 </td></tr><tr><td> 4. 39 </td><td> 100 </td><td> 83 </td></tr><tr><td> 5. 49 </td><td> 112 </td><td> 83 </td></tr><tr><td> 6. 53 </td><td> 156 </td><td> 120 </td></tr><tr><td> 7. 65 </td><td> 128 </td><td> 106 </td></tr><tr><td> 8. 45 </td><td> 108 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 9. 52 </td><td> 100 </td><td> 77 </td></tr><tr><td> 10. 26 </td><td> 64 </td><td> 60 </td></tr><tr><td> 11. 21 </td><td> 44 </td><td> 44 </td></tr><tr><td> 12. 11 </td><td> 36 </td><td> 32 </td></tr><tr><td> 13. 1 </td><td> 12 </td><td> 6 </td></tr></tbody></table></div> Stereologer 시스템과 획득 Fontal 로브에서 2 결과를 그림. 전두엽은 stereological 프로세스의 가장 긴 부분은 체계적인 샘플링과 sectioning에. 지형, 음량의 연결 견적은 각 주제에 대해 약 하루에 완료했다. 왼쪽 반구는 샘플되었고 숫자는 두 반구에 대한 대략적인 견적으로 텍스트에 두 배가됩니다. <img src="/files/ftp_upload/1262/1262fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3의 연결 접속 인구 견적 BioQuant와 취득. BioQuant 시스템이 전에 셀 카운팅에 정확한 지형이 필요합니다. 여기에 13 섹션의 평균 샘플링했다. 대뇌 피질의 지형 및 후속 볼륨 평가는 각 과목에 대한 15-20시간 사이했습니다. 지형은 2.5x 목적하에 수행되었으며 계산은 100x 기름 침지 목표 (NA 1.3)를 사용하여 이루어졌다. 모든 100번째 섹션 샘플 180 disectors의 평균과 왼쪽 반구 전체에 선정되었습니다. 지형이 완성되면 계산의 연결은 하루 정도 걸렸죠. 왼쪽 반구는 샘플되었고 숫자는 두 반구에 대한 대략적인 견적으로 텍스트에 두 배가됩니다.

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	<li>West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+the+subdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator.">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> Aat Rec. 231, 482-497 (1991).</li><li>Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Any+way+you+cut+it:+a+new+journal+policy+for+the+use+of+unbiased+counting+methods.">Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods.</a> J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).</li><li>Sterio, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unbiased+estimation+of+number+and+sizes+of+arbitrary+particles+using+the+disector.">The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector.</a> J Microsc. 134, 127-136 (1984).</li><li>Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles and Practices of Unbiased Stereology. , (2002).</li><li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+non-human+primate+brain+in+stereotaxic+space.">Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li><li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+banking:+Making+the+most+of+your+research.">Brain banking: Making the most of your research.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li><li>Manaye, K. F., Wang, P., O'Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathological+Quantification+Of+Dtg+APP/PS1:+Neuroimaging,+Stereology,+And+Biochemistry.">Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry.</a> AGE. 29, 87-96 (2009).</li><li>Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+reduction+in+frontal+cortex+of+primates+after+prenatal+alcohol+exposure.">Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure.</a> Neuroreport. 20, 13-17 (2009).</li><li>Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Batch+immunostaining+for+large-scale+protein+detection+in+the+whole+monkey+brain.">Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li></ol>

영장류 두뇌에 불편 stereology 다른 생물 학적 표본의 비슷합니다. 50μm에서 슬라이스 때 vervet 원숭이의 단일 반구 이상 1,200 섹션을 산출 이래 그러나 영장류 두뇌의 크기에 따라,주의 처리 계획을 권장합니다. 먼저 우리는 stereotaxically, 블록과 과목 사이의 섹션의 표준 평면을 제공 블록 사이의 부분 부분을 최소화하고, 관리 크기의 블록 5를 제공 1cm 단위로 머리를 차단하는 것이 좋습니다. ...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Stereologer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stereology Resource Center (Chester, MD)</td>
<td>www.disector.com</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereology Tool-Kit Stereologer system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>StereoInvestigator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MicroBright Field (Willston, VT)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

knowing what counts: unbiased stereology in the non-human primate brain

비 인간 영장류는 인간 두뇌의 정상적인 기능과 질병 프로세스를 이해하는 중요한 translational 수종입니다. 불편 stereology, 조직 섹션에 생물 학적 개체의 부량을위한 최첨단으로 인정하는 방법<sup&gt; 2</sup&gt; 포유류의 두뇌에 생물 학적 기능에 대한 신뢰할 수있는 구조적 데이터를 생성<sup&gt; 3</sup&gt;. 접근 방식의 주요 구성 요소는 불편하고있는 사이 세포 숫자와 크기, 섬유 및 모세관 길이, 표면 구역, 지역 볼륨 및 생물 학적 개체의 공간적 배포판 부량와 함께 해부학적인 몸의 구조 정의 구조 (참조 공간)의 (체계 - 랜덤) 샘플링 참조 공간<sup&gt; 4</sup&gt;. 이전 방법을 통해 이러한 stereological 접근 방법의 장점 중 하나에 결함이 가정이 아닌 검증 모델에서 발생하는 체계적인 (비 임의의) 오류의 모든 알려진 소스의 회피입니다. 이 연구는 (vervet 원숭이 두뇌의 전두엽 피질에서 전체의 연결 인구를 추정하기 위해 컴퓨터 stereology의 생물 학적 응용 프로그램 문서<em&gt; Chlorocebus aethiops sabeus</em&gt;), 두 상용 stereology 프로그램, BioQuant 생명 과학 및 Stereologer (그림 1)에서 지원. 대비와 BioQuant 모두에서 결과의 비교 및​​ 이외에<em&gt; Stereologer</em&gt; 시스템이 연구에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다<em&gt; Stereologer</em&gt; 시스템.

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Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain

영장류 두뇌의 해부 학적 조직은 인간의 정상 및 병리 학적 조건에 중요한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 불편 stereology 정확하고 효율적으로 주어진 참조 공간에 총 뉴런 번호 (또는 다른 세포 유형) 계산하는 방법입니다<sup&gt; 1</sup&gt;.

비 - 인간 메이트 두뇌의 편견 Stereology를 : 중요 한거지 아는

The non-human primate is an important translational species for understanding the normal function and disease processes of the human brain. Unbiased ...

knowing-what-counts-unbiased-stereology-in-the-non-human-primate-brain

Research

JoVE Journal

Biology

13.6K 조회수.  University of Montreal. 영장류 두뇌의 해부 학적 조직은 인간의 정상 및 병리 학적 조건에 중요한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 불편 stereology 정확하고 효율적으로 주어진 참조 공간에 총 뉴런 번호 (또는 다른 세포 유형) 계산하는 방법입니다 1.

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Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these acrylics do not bond to the bone, screws have been used as anchors. However, in small experimental animals like finches or mouse, their craniums are very fragile and can not successfully hold the anchors. In this report, we propose a new application of light-curing dental resins for mounting base of electrodes or microdialysis probes in chronic experiments. This material allows direct bonding to the cranium. Therefore, anchor screws are not required and surgical field can be reduced considerably. Past experiences show that the bonding effect maintains more than 2 months. Conventional resin's window of time when the materials are pliable and workable is a few minutes. However, the window of working time for these dental adhesives is significantly wider and adjustable.

In this report, we propose a new application of light-curing dental resins for mounting base of electrodes or microdialysis probes in chronic experiments. This material allows direct bonding to the cranium.

만성 실험에 장착 전극 또는 Microdialysis 프로브를위한 라이트 - 치료 치과 접착제 수지의 응용

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these ...

연구

생물학

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates micro-dissection of four major brain regions include olfactory bulb, frontal cortex, striatum and hippocampus in fresh rat brain tissue. Useful tips for quick removal of respective regions to avoid RNA and protein degradation of the tissue are given.

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RNA 또는 특정 뇌 영역에서 단백질 추출에 대한 쥐 두뇌의 마이크로 해부

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates ...

Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing the delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact tissue, including in vivo preparations. The distinct advantage of this technique is that experimental manipulations may be performed on individual cells while leaving the surrounding tissue unaltered, thereby distinguishing cell-autonomous effects from those resulting from global treatments. When combined with advanced in vivo imaging techniques, SCE of fluorescent markers permits direct visualization of cellular morphology, cell growth, and intracellular events over timescales ranging from seconds to days. While this technique is used in a variety of in vivo and ex vivo preparations, we have optimized this technique for use in Xenopus laevis tadpoles. In this video article, we detail the procedure for SCE of a fluorescent dye or plasmid DNA into neurons within the intact brain of the albino Xenopus tadpole. We also discuss methods to optimize yield, and show examples of live two-photon fluorescence imaging of neurons fluorescently labeled by SCE.

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact tissue, including in vivo preparations. Here we detail the procedure for SCE of a fluorescent dye or plasmid DNA into neurons within the intact brain of the Xenopus laevis tadpole.

완전한 개발 두뇌 속에 생체내에서 단일 세포 Electroporation

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing the delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact ...

Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In addition, the use of non-human primates has recently afforded the opportunity to naturally model complex psychiatric disorders such as alcohol abuse7. Here we describe a technique for blocking the brain in the coronal plane of the vervet monkey (Chlorocebus aethiops sabeus) in the intact skull in stereotaxic space. The method described here provides a standard plane of section between blocks and subjects and minimizes partial sections between blocks. Sectioning a block of tissue in the coronal plane also facilitates the delineation of an area of interest. This method provides manageable sized blocks since a single hemisphere of the vervet monkey yields more than 1200 sections when slicing at 50&mu;m. Furthermore by blocking the brain into 1cm blocks, it facilitates penetration of sucrose for cyroprotection and allows the block to be sliced on a standard cryostat.

The non-human primate is an important translational species for our understanding of the normal processing of the brain. The anatomical organization of the primate brain can provide important insights into normal and pathological conditions in humans.

Stereotaxic 공간에 비 인간 메이트 브레인 해부

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In ...

The Gateway to the Brain: Dissecting the Primate Eye

The visual system in humans is considered the gateway to the world and plays a principal role in the plethora of sensory, perceptual and cognitive processes. It is therefore not surprising that quality of vision is tied to quality of life . Despite widespread clinical and basic research surrounding the causes of visual disorders, many forms of visual impairments, such as retinitis pigmentosa and macular degeneration, lack effective treatments. Non-human primates have the closest general features of eye development to that of humans. Not only do they have a similar vascular anatomy, but amongst other mammals, primates have the unique characteristic of having a region in the temporal retina specialized for high visual acuity, the fovea1. Here we describe a general technique for dissecting the primate retina to provide tissue for retinal histology, immunohistochemistry, laser capture microdissection, as well as light and electron microscopy. With the extended use of the non-human primate as a translational model, our hope is that improved understanding of the retina will provide insights into effective approaches towards attenuating or reversing the negative impact of visual disorders on the quality of life of affected individuals.

The non-human primate is an important translational species for our understanding of development and aging. The anatomical organization of the primate retina may provide important insights into normal and pathological conditions in humans.

두뇌에 게이트웨이 : 프리 메이트 &#39;눈&#39;을 분석 해 봅시다

The visual system in humans is considered the  gateway  to the world and plays a principal role in the plethora of sensory, perceptual and cognitive ...

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

Particle and cell counting is used for a variety of applications including routine cell culture, hematological analysis, and industrial controls1-5. A critical breakthrough in cell/particle counting technologies was the development of the Coulter technique by Wallace Coulter over 50 years ago. The technique involves the application of an electric field across a micron-sized aperture and hydrodynamically focusing single particles through the aperture. The resulting occlusion of the aperture by the particles yields a measurable change in electric impedance that can be directly and precisely correlated to cell size/volume. The recognition of the approach as the benchmark in cell/particle counting stems from the extraordinary precision and accuracy of its particle sizing and counts, particularly as compared to manual and imaging based technologies (accuracies on the order of 98% for Coulter counters versus 75-80% for manual and vision-based systems). This can be attributed to the fact that, unlike imaging-based approaches to cell counting, the Coulter Technique makes a true three-dimensional (3-D) measurement of cells/particles which dramatically reduces count interference from debris and clustering by calculating precise volumetric information about the cells/particles. Overall this provides a means for enumerating and sizing cells in a more accurate, less tedious, less time-consuming, and less subjective means than other counting techniques6.
Despite the prominence of the Coulter technique in cell counting, its widespread use in routine biological studies has been prohibitive due to the cost and size of traditional instruments. Although a less expensive Coulter-based instrument has been produced, it has limitations as compared to its more expensive counterparts in the correction for "coincidence events" in which two or more cells pass through the aperture and are measured simultaneously. Another limitation with existing Coulter technologies is the lack of metrics on the overall health of cell samples. Consequently, additional techniques must often be used in conjunction with Coulter counting to assess cell viability. This extends experimental setup time and cost since the traditional methods of viability assessment require cell staining and/or use of expensive and cumbersome equipment such as a flow cytometer.
The Moxi Z mini automated cell counter, described here, is an ultra-small benchtop instrument that combines the accuracy of the Coulter Principle with a thin-film sensor technology to enable precise sizing and counting of particles ranging from 3-25 microns, depending on the cell counting cassette used. The M type cassette can be used to count particles from with average diameters of 4 - 25 microns (dynamic range 2 - 34 microns), and the Type S cassette can be used to count particles with and average diameter of 3 - 20 microns (dynamic range 2 - 26 microns). Since the system uses a volumetric measurement method, the 4-25 microns corresponds to a cell volume range of 34 - 8,180 fL and the 3 - 20 microns corresponds to a cell volume range of 14 - 4200 fL, which is relevant when non-spherical particles are being measured. To perform mammalian cell counts using the Moxi Z, the cells to be counted are first diluted with ORFLO or similar diluent. A cell counting cassette is inserted into the instrument, and the sample is loaded into the port of the cassette. Thousands of cells are pulled, single-file through a "Cell Sensing Zone" (CSZ) in the thin-film membrane over 8-15 seconds. Following the run, the instrument uses proprietary curve-fitting in conjunction with a proprietary software algorithm to provide coincidence event correction along with an assessment of overall culture health by determining the ratio of the number of cells in the population of interest to the total number of particles. The total particle counts include shrunken and broken down dead cells, as well as other debris and contaminants. The results are presented in histogram format with an automatic curve fit, with gates that can be adjusted manually as needed.
Ultimately, the Moxi Z enables counting with a precision and accuracy comparable to a Coulter Z2, the current gold standard, while providing additional culture health information. Furthermore it achieves these results in less time, with a smaller footprint, with significantly easier operation and maintenance, and at a fraction of the cost of comparable technologies.

The Moxi Z miniature automated cell counter is a novel instrument that combines the Coulter Principle with patented thin-film sensor technology and a proprietary software algorithm to perform sizing and counting of a broad size range of particles as well as to determine the overall health of monodisperse mammalian cell cultures. This protocol describes the use of this instrument for counting and assessing the health of cell cultures.

Moxi Z 미니 자동 셀 카운터를 사용하여 포유류 세포 계산, 세포 크기와 세포 건강의 결정

Particle and cell counting is used for a variety of applications including routine cell culture, hematological analysis, and industrial controls1-5. A ...

Physiology Lab Demonstration: Glomerular Filtration Rate in a Rat

Measurements of glomerular filtration rate (GFR), and the fractional excretion of sodium (Na) and potassium (K) are critical in assessing renal function in health and disease. GFR is measured as the steady state renal clearance of inulin which is filtered at the glomerulus, but not secreted or reabsorbed along the nephron. The fractional excretion of Na and K can be determined from the concentration of Na and K in plasma and urine. The renal clearance of inulin can be demonstrated in an anesthetized animal which has catheters in the femoral artery, femoral vein and bladder. The equipment and supplies used for this procedure are those commonly available in a research core facility, and thus makes this procedure a practical means for measuring renal function. The purpose of this video is to demonstrate the procedures required to perform a lab demonstration in which renal function is assessed before and after a diuretic drug. The presented technique can be utilized to assess renal function in rat models of renal disease.

The purpose of this protocol is to demonstrate the principles and techniques for measuring and calculating glomerular filtration rate, urine flow rate, and excretion of sodium and potassium in a rat. This demonstration can be used to provide students with an overall conceptual understanding of how to measure renal function.

생리학 실험실 데모 : 쥐의 사구체 여과 속도

Measurements of glomerular filtration rate (GFR), and the fractional excretion of sodium (Na) and potassium (K) are critical in assessing renal function ...

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, proteins, and glucose, yet the composition of the blood is dynamically regulated and easily perturbed. One factor that can change the blood composition is the stress response triggered by the sampling procedure, which can contribute to variability in the measures of interest. Here we describe a procedure for blood sampling from the lateral tail vein in the rat. This procedure offers significant advantages over other more commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, without anesthesia or analgesia. Additionally, it can be used to obtain large volume samples (upwards of 1 ml in some rats), and it may be used repeatedly across experimental days. By minimizing the stress response and pain resulting from blood sampling, measures can more accurately reflect the true basal state of the animal, with minimal influence from the sampling procedure itself.

Blood samples are useful for assessing biomarkers of physiological states or disease in vivo. Here we describe the methodology to sample blood from the lateral tail vein in the rat. This method provides rapid samples with minimal pain and invasiveness.

쥐의 측면 꼬리 정맥에서 혈액을 샘플링

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte precursors, immune cells, fibroblasts, blood vessels, and nerve projections. Although the molecular control of cell type specification and how these cells interact have been increasingly delineated, a more comprehensive understanding of these adipose-resident cells can be achieved by visualizing their distribution and architecture throughout the whole tissue. Existing immunohistochemistry and immunofluorescence approaches to analyze adipose histology rely on thin paraffin-embedded sections. However, thin sections capture only a small portion of tissue; as a result, the conclusions can be biased by what portion of tissue is analyzed. We have therefore developed an adipose tissue clearing technique, Adipo-Clear, to permit comprehensive three-dimensional visualization of molecular and cellular patterns in whole adipose tissues. Adipo-Clear was adapted from iDISCO/iDISCO+, with specific modifications made to completely remove the lipid stored in the tissue while preserving native tissue morphology. In combination with light-sheet fluorescence microscopy, we demonstrate here the use of the Adipo-Clear method to obtain high-resolution volumetric images&#160;of an entire adipose tissue.

Due to the high lipid content, adipose tissue has been challenging to visualize using traditional histological methods. Adipo-Clear is a tissue clearing technique that allows robust labeling and high-resolution volumetric fluorescent imaging of adipose tissue. Here, we describe the methods for sample preparation, pretreatment, staining, clearing, and mounting for imaging.

Adipo-지우기: 조직 지방 조직의 3 차원 이미징 방법 삭제

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Reverse Dissection and DiceCT Reveal Otherwise Hidden Data in the Evolution of the Primate Face

Facial expressions, or facial displays, of social or emotional intent are produced by many mammalian taxa as a means of visually communicating with conspecifics at a close range. These displays are achieved by contraction of the mimetic muscles, which are skeletal muscle attached to the dermis of the face. Reverse dissection, removing the full facial mask from the skull and approaching mimetic muscles in reverse, is an effective but destructive way of revealing the morphology of mimetic muscles but it is destructive. DiceCT is a novel mechanism for visualizing skeletal muscles, including mimetic muscles, and isolating individual muscle fascicles for quantitative measurement. Additionally, DiceCT provides a non-destructive mechanism for visualizing muscles. The combined techniques of reverse dissection and DiceCT can be used to assess the evolutionary morphology of mimetic musculature as well as potential contraction strength and velocity in these muscles. This study further demonstrates that DiceCT can be used to accurately and reliably visualize mimetic muscles as well as reverse dissection and provide a non-destructive method for sampling mimetic muscles.

Facial expressions are a mode of visual communication produced by mimetic muscles. Here, we present protocols for the novel techniques of reverse dissection and DiceCT to fully visualize and assess mimetic muscles. These combined techniques can examine both morphological and physiological aspects of mimetic musculature to determine functional aspects.

해 부와 영장류의 진화에 DiceCT 공개 그렇지 않으면 숨겨진 데이터

Facial expressions, or facial displays, of social or emotional intent are produced by many mammalian taxa as a means of visually communicating with ...