시작하려면 튼튼한 가위나 가위를 사용하여 1.5밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브의 원뿔형 바닥에서 0.5밀리미터 떨어진 캡 끝을 잘라냅니다. 절단된 튜브에 유리솜 조각을 넣어 중앙 구멍을 덮습니다. 조립된 유리솜 필터 장치 하나를 멸균된 1.5밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브에 넣고 튜브에 라벨을 붙입니다.
다음으로, 스커트가 없는 96웰 PCR 플레이트를 6개의 2열 지지 랙으로 자릅니다. 웰의 원뿔형 바닥이 위쪽을 향하도록 2열 랙을 뒤집습니다. 축축한 여과지가 들어 있는 유리 페트리 접시에 랙을 놓고 뚜껑으로 덮어 잎 덮개를 위한 습도 챔버를 만듭니다.
포자가 있는 Colletotrichum graminicola에서 분생포자를 수확하려면 3-4밀리리터의 멸균 탈이온수를 접시에 넣으십시오. 멸균 원뿔형 팁 유봉을 사용하여 접시 전체를 고르게 긁어 한천에서 포자를 풉니다. 유리솜 필터 장치에 1밀리리터의 포자 현탁액을 무균 상태로 추가하고 포자가 중력에 의해 수집 튜브로 흐르도록 합니다.
여과된 포자 현탁액을 3, 500G에서 5분 동안 원심분리하고 액체를 오토클레이브 용기에 붓습니다. 1밀리리터의 멸균 탈이온수를 수집 튜브에 넣고 펠릿화된 포자를 재현탁시키기 위해 부드럽게 저어줍니다. 다시, 현탁액을 원심분리하고 300 내지 500 마이크로리터의 탈이온수에서 정량화를 위해 포자를 재현탁시킨다.
포자 농도를 측정하기 위해 100배 배율의 복합 현미경 아래에서 혈구계를 사용합니다. 다음 500의 deionized 물을 가진 milliliter 현탁액 당 000의 포자를 준비하십시오. 2 단계 묘목의 첫 번째 실제 잎에서 외피를 제거합니다.
덮개의 겹치는 여백을 따라 썸네일을 실행하고 슈트에서 부드럽게 풉니다. 회수된 잎 덮개를 3-5cm 크기로 자릅니다. 각 세그먼트를 조심스럽게 풀어 내부 표피층을 노출시킵니다.
20 마이크로 리터의 곰팡이 포자 현탁액을 중간 갈비뼈 위의 외피 중앙의 내부 표면에 바릅니다. 접종된 잎 덮개를 바닥에 중간 갈비뼈가 위치하도록 수평으로 놓고 축축한 여과지가 들어 있는 유리 페트리 플레이트에 놓습니다. 그런 다음 작은 습도 챔버를 축축한 발아지를 깐 투명한 보관 상자에 넣고 보관 상자를 뚜껑으로 덮고 섭씨 23도에서 의도한 시간 동안 연속 조명 아래에서 배양합니다.
외피에 질병의 징후가 있는지 정기적으로 확인하십시오.
