Dissociation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

먼저 뇌와 척수 조직을 해부하고 세포 현탁액을 얼음 위에 보관합니다. 그런 다음 적절한 양의 효소 mix-1과 2를 준비합니다. 효소 mix-1의 1, 950 마이크로리터를 C 튜브로 옮기고 CNS 세포 현탁액의 조직 조각을 추가합니다.

그런 다음 30마이크로리터의 효소 mix-2를 C-튜브에 추가합니다. C-튜브를 단단히 닫고 히터가 있는 셀 해리기의 슬리브에 거꾸로 부착합니다. 적절한 프로그램을 실행하고 모든 튜브가 동일한 속도로 회전하는지 확인하기 위해 최소 5분 동안 관찰합니다.

그 동안 70미크론 스트레이너를 50밀리리터 튜브에 놓고 스트레이너를 2밀리리터의 DPBS로 미리 적십니다. 프로그램 종료 후 해리기에서 C 튜브를 분리하고 섭씨 4도에서 1분 동안 300g의 샘플을 원심분리합니다. 샘플을 재현탁하고 미리 적신 스트레이너에 적용합니다.

빈 C-튜브에 10ml의 차가운 DPBS를 추가합니다. 서스펜션을 혼합하여 해당 스트레이너에 추가합니다. 스트레이너를 버린 후 세포 현탁액을 다시 10분 동안 원심분리한 다음 상층액을 조심스럽게 흡인하여 세포 펠릿을 얻습니다.