먼저 투명한 신장 조직 샘플을 준비합니다. 그런 다음 먼저 레이저 출력을 활성화한 다음 컨포칼 제어 스위치를 작동시켜 컨포칼 현미경을 켭니다. 그런 다음 컴퓨터를 시작하고 현미경의 전원을 켠 다음 컨포칼 하드웨어를 시작합니다.
자체 테스트를 실행한 후 공초점 소프트웨어를 실행합니다. 적절한 렌즈를 선택합니다. cubic R 시약에서 샘플을 회수하여 컨포칼 접시에 넣습니다.
cubic R 시약이 마르지 않도록 뚜껑을 덮습니다. 샘플을 시야의 중앙으로 이동하고 샘플에 초점이 맞춰질 때까지 초점을 조정합니다. 3D 재구성의 경우 형광이 보이지 않을 때까지 확대/축소 평면을 한 방향으로 조정하고 이 위치를 위쪽으로 정의합니다.
그런 다음 형광이 보이지 않을 때까지 확대/축소 평면을 반대 방향으로 조정하여 이 위치를 아래쪽으로 정의합니다. 대화 상자의 오른쪽 하단 모서리에 있는 실행 버튼을 클릭하여 스캔을 시작합니다. 큰 이미지 재구성의 경우 시야를 샘플의 중앙에 배치하고 이를 중앙으로 설정합니다.
2x2 시야각을 선택합니다. ND 다기능 인터페이스에서 Z 스택을 선택하여 큰 이미지를 재구성합니다. 필요에 따라 패널의 다양한 옵션을 조정하고 실행 버튼을 눌러 스캔을 시작합니다.
투명한 신장을 접착제로 검체 고정 어댑터에 부착하고 신장이 단단히 부착될 때까지 기다립니다. 그런 다음 신장을 샘플 통에 담그고 샘플 통을 현미경 시스템에 밀어 넣습니다. 해치를 밀봉하십시오.
위치 찾기 인터페이스에서 샘플을 적절한 관찰 위치로 조정합니다. 획득 인터페이스로 전환하고 광학 경로를 설정합니다. 488나노미터 레이저를 선택합니다.
405-488-561-640의 광선 필터를 선택한 다음 광학 분할 필터 블록을 SBS LP 490으로 설정합니다. 카메라 2를 선택하고 의사 색상을 녹색으로 변경합니다. 채널 하위 메뉴에서 얻은 왼쪽 및 오른쪽 Z 오프셋을 입력합니다.
가장 작은 줌을 선택하고 광학적 선명도를 위해 미세 조정합니다. 전체 오르간의 XY 경계와 Z 범위를 식별합니다. 그런 다음 레이저 강도와 노출 시간을 10밀리초 미만으로 조정합니다.
실험 시작을 클릭하여 프로세스를 시작합니다. 조직이 과도하게 큰 경우 현미경 소프트웨어를 사용하여 두 개 이상의 이미지를 이미지 스티칭으로 결합합니다. 캡처된 파일을 열고 처리를 선택합니다.
그런 다음 방법과 스티칭, 방법 매개 변수가 뒤따릅니다. 적용을 클릭하여 이미지 스티칭을 완료합니다. 혈관 내 주입된 fitindex 가닥은 사구체를 표지하는 데 사용되었습니다.
제거된 신장에서는 광시트 현미경 또는 컨포칼 현미경을 사용하여 사구체를 명확하게 관찰할 수 있습니다.
