돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 유전자를 pVAX1 벡터로 클로닝

먼저 벡터를 선형화합니다. 특정 제한 효소를 함유하는 반응 혼합물을 실온에서 준비한다. 겔 추출 키트를 사용하여 선형화된 벡터를 정제한 다음 섭씨 37도에서 60분 동안 배양합니다.

그런 다음 exon R seamless cloning 및 assembly 반응을 조립하여 PRRSV 유전자를 sub-clone합니다. 멸균된 탈이온수로 총 반응량을 10마이크로리터로 조정합니다. 그런 다음 철저히 섞는다.

혼합물을 섭씨 50도에서 15-60분 동안 열순환기에서 배양합니다. 그런 다음 샘플을 얼음에 보관하십시오. 벡터를 유능한 세포로 형질전환한 후 카나마이신을 함유한 20마이크로리터의 LB 배지에 8개의 콜로니를 선택합니다.

형질전환체를 분석하기 위해 콜로니 PCR 반응을 설정합니다. PRRSV 단편 1을 pVAX1 벡터에 도입하여 pVAX1-F1을 생성함으로써 전체 길이 PRRSV 과발현 벡터를 수득하였다. 특정 제한 효소를 사용한 연속적인 재조합 라운드는 플라스미드 크기의 증가로 시각화된 2에서 5까지의 단편을 통합하는 결과를 낳았습니다.