먼저 Hoechst 33342로 쥐 골수 세포를 염색합니다. 유세포 분석의 경우 필요한 소프트웨어를 실행한 다음 QC 표준화를 선택합니다. QC 절차를 시작하기 위해 시작을 선택하기 전에 품질 관리 또는 QC FluoroSphere 샘플 튜브를 튜브 홀더에 삽입합니다.
새 실험을 만들려면 파일 메뉴에서 새 실험을 클릭하고 파일 경로를 지정하고 실험을 저장합니다. 그런 다음 설정 메뉴에서 채널 설정을 선택합니다. 채널 신호 확인란을 선택하고 레이블 열에 시약 이름을 추가합니다.
그런 다음 플롯 영역에서 의사 색상 플롯 아이콘을 클릭하여 플롯을 만듭니다. 시험관 화면에서 튜브 추가를 클릭하여 새 샘플 튜브를 만들고 이름을 변경합니다. 그런 다음, 실행을 선택하여 표본을 로드하고, 플롯을 보고, 게이트를 설정합니다.
게인 및 임계값 설정을 조정하고 기록을 선택하여 데이터를 저장합니다. 게이트 설정 로직을 설계하려면 x축을 클릭하여 FSEW를 선택하고 y축을 클릭하여 FSEA를 선택합니다. 폴리곤 게이트(Polygon Gate)를 선택하여 게이트 A를 그려 개별 셀에 원을 그리고 부착 셀을 제외합니다.
두 번째 플롯의 경우 x축을 클릭하여 FSEA를 선택하고 y축을 클릭하여 SSEA를 선택합니다. Polygon Gate를 선택하여 게이트 B를 그려 단편화되지 않은 세포를 분리하고 세포 파편을 제외합니다. 세 번째 플롯의 경우 x축을 클릭하여 PIA를 선택하고 y축을 클릭하여 SSEA를 선택합니다.
게이트 B를 그린 후 음성 프로피듐 요오드화물을 나타내는 살아있는 세포를 선택하고 게이트 C를 그려 살아있는 세포를 얻습니다. 네 번째 2차원 플롯의 경우 x축을 클릭하여 Hoechst Red를 선택하고 y축을 클릭하여 Hoechst Blue를 선택합니다. 플롯을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 드롭다운 메뉴에서 Property를 선택합니다.
x축과 y축 모두에 대해 선형 형식을 선택하고 side population cell에 대한 게이트를 그립니다. 355 나노미터 및 405 나노미터 레이저를 동시에 사용하여 대조 세포와 실험 세포를 모두 검출할 수 있습니다. 두 레이저에 해당하는 690 x 50 및 450 x 50 나노미터 채널에서 형광 신호를 획득합니다.
355 및 405 나노미터 레이저로 Hoechst 33342 염료의 효과적인 자극을 관찰하여 투명한 측면 집단 세포를 시각화합니다. 동일한 샘플에 대해 세포 검출을 위해 375 나노미터 및 405 나노미터 레이저를 사용하십시오. 355 나노미터 레이저는 Hoechst 33342 염료를 효과적으로 여기시켜 골수의 SP 세포를 명확하게 관찰할 수 있었습니다.
355 나노미터 레이저와 405 나노미터 레이저로 검출된 동일한 샘플의 SP 셀은 본질적으로 동일한 것으로 밝혀졌습니다. 375 나노미터 및 405 나노미터 레이저는 모두 Hoechst 33342를 효과적으로 여기시켜 SP 세포를 얻었습니다.
