이 연구를위한 자금 조달은 플로리다 주립 대학 의과 대학 및 FSU의 생물 과학부의 지원에서 신경 과학 상에 프로그램에 의해 제공되었다. 추가 자금은 보조금의 에이드 알코올 음료 제조 업체의 연구 기금에 의해 제공되었다.

의 flybar 1. 총회 이론적 근거 및 개요 :이 시스템은 파리에 알코올 증기의 제어 비율을 관리 할 수​​ 있도록 설계되었습니다. 참고도 1의 개략적 인 개요를 제공의 flybar가 셋업 세 단계 (기류 조립, 알코올 및 물 병의 ​​셋업 및 관측 튜브의 조립체)에서 후술하는 바와 같이. 즉, 안정적인 공기 흐름이 각각 알코올과 물을 통해 버블을 혼합, 4 관찰 유리 병에 투여되는 두 개의 분획으로 분리된다. <ol><li> 공기 흐름의 조립 <ol><li> 유연한 실리콘 튜브 건물 공기 또는 Y-커넥터를 사용하여 일관성있는 공기 흐름 및 분할을 생성하는 수족관 통풍 장치 하나에 짧은 조각을 연결합니다. 시스템 (4 관측 바이알위한 통상적 1,000 ml / 분)를 통해 공기의 총량을 제어하는​​ 공기 유동 조절기를 제 1 분기를 연결한다. </li><li> 제 2 튜브의 빠른 커넥터를 삽입공기 스트림은 교정 기류 영향을주지 않고 실험의 시작 부분에 중단 될 수 있도록. Y-커넥터를 추가하고 공기 조절기로 각 분기 튜브를 연결합니다. </li><li> 공기 조절기에 튜브를 연결하고 두 개의 공기 흐름 미터를 연결합니다. </li></ol></li><li> 알코올과 물 병의 셋업 <ol><li> 공기 흐름 미터의 출구에 유연한 튜브를 추가하고 튜브의 각 길이의 끝 부분에 90 ° 굴곡과 얇은 유리 튜브 (1 ㎖ 유리 피펫의 부분)을 삽입합니다. 이것은 물과 알코올 병에 유입 공기의 흐름이 될 것입니다. </li><li> 알코올과 물이 가득 병에 그들을 통해 2 개의 구멍에 고무 마개를 놓습니다. 수욕을 사용하여 주위 온도보다 높은 일정한 온도 36 ° C의 병에서 모두 유지. 물 목욕은 27 ° C.에있는 동안 우리의 실험에서, 환경의 객실은, 25 ° C에서 유지 </li><li> 의 직선 유리 피펫을 삽입IR은 고무 마개를 통해 입구 및 병의 바닥으로부터 약 1cm까지 유체로 연장된다. </li><li> 유리의 단부가 안쪽 마개 병의 바닥에 닿을 때까지 고무 마개에 남아있는 구멍에 유리 피펫의 팔꿈치 부분을 삽입한다. 튜브의 또 다른 길이의이 공기 출구를 넣습니다. </li><li> Y-커넥터를 이용하여 공기 스트림을 재결합하고 두 구멍 뚫린 고무 마개를 통해 삽입 구부러진 유리 피펫 부와 비어 혼합 플라스크 또는 병을 통해 공기 흐름을 위해 실리콘 튜브의 다른 길이를 사용한다. 출구 혼합 된 공기 흐름을 위해 실리콘 튜브의 다른 길이를 사용합니다. </li></ol></li><li> 관측 유리 병의 조립 <ol><li> 다 관찰 바이알 각 실험에 사용될 수 있도록 공기의 4 또는 8 작은 스트림을 구하는 혼합 플라스크 2-3X 신흥 출구 기류 분할. 관찰 유리 병에 유연한 실리콘 튜브를 연결합니다. </li><li> observati을 설정유리 튜브는 알코올 증기에 대한 입구 및 출구를 제공하는 두 개의 구멍을 통해 함유 고무 마개로 밀봉 빈 바이알을 사용하여 바이알에. </li><li> 그물 제 유리관의 단부를 커버하고 유연한 플라스틱 배관의 작은 조각을 사용하는 대신에 세공을 유지한다. 는 유리 병의 절반 정도의 길이로 확장 될 때까지 첫 번째 구멍을 통해이 튜브를 삽입합니다. 필요한 경우, 아늑한 적합을 얻기 위해 테프론 테이프를 사용합니다. </li><li> 는 고무 마개의 안쪽 가장자리에 닿을 때까지 그물로 덮여 끝 또한 제 2 유리 튜브를 삽입합니다. </li><li> 희미한 붉은 빛 조건에서 파리와 대비를 극대화하기 위해 가로로 흰색 종이 조각에 튜브를 놓습니다. </li><li> 공기 흐름의 혼합 적절한 분수는 알코올을 통해 발포 및 공기 흐름은 물을 통해 버블. 연속적으로 공기 압력을 모니터하고 공기 흐름의 원하는 혼합을 유지하기 위해 필요에 따라 조정한다. 참고 : 연속 실행작은 방에있는 병렬 또는 하나의 분석에서 여러 플라이 바의 분석의 알코올 증기의 눈에 띄는 축적으로 이어질 수 있습니다. 잠재적으로 밀폐 된 방에있는 연구원에 영향을 줄 수있는 알코올 증기의 지속적인 방출을 방지하기 위해 적절한 시스템이 적절하게 실험 기간 동안 생성 된 알코올 증기를 제거하는 장소에 배치해야합니다. 알코올 증기를 제거 각각의 병에서 튀어 나온 두 번째 유리 튜브에 튜브 ~ 12 인치 조각을 연결, 그들을 묶어 깔때기 진공 시스템에 직접하십시오. 연구원은 또한 실험 시험 장소는 통풍이 있는지 확인해야합니다. </li></ol></li></ol> 실험 동물의 2. 준비 이론적 근거 및 개요 : 일반 문화와 파리의 하우징은 데이터의 변동성을 줄일 수 있습니다. 이는 파리가 경험 한 스트레스의 표준화 및 최소화를 통해 달성된다. 그 이유를 들어, 마취 (CO 2 또는 대안) 두리를 사용하지 않습니다NG 프로토콜의 다음 단계 중 하나. 또한, 파리는 학습과 기억 실험 17 등 다른 행동 분석을위한 표준으로 변동성을 최소화하기 위해 실험과 시점에 걸쳐 연령을해야한다. 다른 빛 : 어두운 에탄올에 대한 행동 반응주기 시계의 기능을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 낮의 리듬이 있는지 확인하기 위해, 실험은 특정 Zeitgeber 타임즈 (ZT)에서의 성능을 측정하기 위해 정의 된 LD 사이클 하에서 수행 될 수있다. ZT 12 시간 조명이 12시 12분 시간의 LD 사이클의 전원이 꺼져있는 동안 ZT 0, 새벽을 나타내며 LD 사이클에서의 빛의 시간으로 정의된다. 일정 조건 하에서, 시간주기의 시간 (CT)는 환경 신호, 즉 자유 실행 시간의 부재하에 동물에 대한 시간을 측정하고, 이전의 LD 인입 사이클에 관한 것이다. 야생형 초파리에서 CT는 처음 몇 일에 대해 이전 ZT을 반영일정한 프리 런주기 기간 등의 조건과 리듬에들 ~ 24 시간이다. 어두운주기를 한 후 이전의 실험에 지속적으로 어두운 (DD)로 전송 :주기 변조를 측정하고 행동에 급성 조명 효과를 제거하기 위해, 파리는 빛에 동반된다. 주기 실험은 특정 시간주기 시간 (CT)에서 성능을 측정하는 DD의 두 번째 날에 수행됩니다. 초파리에서 연속 빛 (LL) 조건은 핵심주기 유전자와 불규칙한 운동 활성 18-21과 부정맥 단기 기억 (17)에 의해 입증되는 것과 같이 행동주기 리듬의 혼란의 댐핑 또는 폐지 분자 진동과주기 장애의 원인. 프로토콜은 시간주기의 연구에 대해 최적화되어 있고, 다른 실험을 위해 단순화 될 수있다. 튜브 12 인치 사용하는 작은 빨간 불빛, 모든주기 실험은 희미한 붉은 빛 (주위의 오버 헤드 붉은 빛 &lt;벤치 위에 1 룩스를 사용하여 실시하고 있습니다~ 1 룩스의 빛). <ol><li> 12시 12분 시간 조명 아래 25 ° C에서 후면 파리 : 어두운 유입 조건 (LD). </li><li> 1 일의 일 라이트 기간 말에 갓 eclosed 파리를 수집하고 음식의 끈적 거림을 최소화하기 위해 높은 한천 농도 적은 양의 음식을 포함하는 작은 유리 병을 들고 LD 조건에서 24 시간 동안 저장합니다. 참고 : 건강, 일반적으로 개발 파리가 수집되도록하려면 우화는 문화 병에서 시작 후 첫 번째 일 이내에 수집 된 파리를 사용합니다. </li><li> 약 30 (25 ~ 35)의 일괄 처리를 수집 점등 기간의 끝으로 2 일에 흡인기, 신선한 유지 병에 송금을 사용하여 날아갑니다. </li><li> 유리 병의 끝으로 파리를 직접 강한 광원을 사용합니다. 행동 관찰은 각 실험의 끝에서 계산 파리의 총 수의 백분율로보고로이 범위 내에서 각 유리 병에 파리의 정확한 수는 중요하지 않다. </li><li> 25 ° C에서 FO​​에서 DD 조건에서 파리를 유지이일 R. </li><li> 실험의 날, 다른 조건이나 실험 전에 적어도 1 시간 동안 방에있는 실험적인 행동 룸 이외의 인큐베이터에 보관되어있는 모든 파리를 놓습니다. 순응 때문에 온도 나 습도의 변화에​​ 변화를 줄일 수 있습니다. </li><li> 행동의주기 변조 여부를 테스트하기 위해 여섯 시간 지점 일 (CT 1, 5, 9, 13, 17, 21)에서 관찰합니다. </li><li> 실험 설계의 견고성을 향상시키고 하나의 실험에 변화의 특정을 최소화하기위한 행동 실험의 한 세트에서 여러 시간 지점을 비교합니다. 반대의 명암 일정 두 개의 창업 보육 센터가 유입에 사용하는 경우 예를 들어, CT 1 CT (13)의 관찰을 동시에 얻을 수있다. 주 : 상기 절차가 일정 어둠주기 상태에서 수행 분석을위한 실험 동물의 준비를 설명한다. 다른 빛 : 암 조건은 시계의 기능을 조사하는 데 사용될 수있다알코올에 대한 행동 반응에. 낮의 리듬이 실험은 특정 Zeitgeber 시간 (ZT)에서 성능을 측정하는 LD 사이클에서 수행 할 수 있는지 확인하십시오. 또한, 프로토콜은 실험 테스트주기 부전 일정한 조명 조건 하에서 발생하는 해충으로 사용될 수있다. 조명 상태에서 보관 파리를 테스트 다른 프로토콜의 행동 분석은 여전히​​ 어두운 조건에서 수행되어야한다. 파리 인해 행동에 빛의 급성 효과를 행동의 변화를 최소화하기 위해 실험 전에 1 시간 동안 어둠에 전송해야합니다. </li></ol> 3. 행동 관찰 이론적 근거 및 개요는 다음 알코올 관리 프로토콜은 희미한 붉은 빛 조건 하에서 관찰에 최적화되어 있습니다. 두 가지 행동을 측정 LORR 및 진정 작용 플라이 만취의 두 가지 점을 나타냅니다. LORR는 손실 O를 통합 만취의 늦은 지점을 나타냅니다F 모터 및 자세 제어, 중독의 진정 대책 반면 늦게 종점. 유전자형 또는주기 변조는 다르게이 두 조치에 영향을 미칠 수 있습니다; 따라서 하나는 모두를 검사 할 수 있습니다. 즉, 플라이가 바이알에로드되어, LORR 또는 진정을 표시 파리의 개수가 주류 기상 노광시 5 분마다, 그리고 실험의 끝에 카운트 파리의 총 수를 획득한다. <ol><li> 실험을 시작하기 전에 적어도 10 분 동안 시스템 (공기, 물과 알코올 병을 통해 발포)를 통해 공기를 실행하고 기류를 보정하는 시간을 사용한다. </li><li> 공기 흐름을 중지하려면 빠른 릴리스를 분리합니다. 유리 병에 파리를로드하고 공기 흐름을 다시 연결하고 타이머를 시작합니다. 참고 : 응답 파리 또는 죽은 파리가 유지 유리 병에 남아있는 경우,이 스트레스 조건을 나타낼 수 있습니다. 일반적으로, 이러한 조건은 지주 바이알에 닫기 파리를 수용하거나 소를 사용하여 식품 찰기를 감소시킴으로써 완화 될 수있다음식 준비하는 동안 LY 높은 한천 농도. 최적의 행동 분석과 실험 사이에 최소한의 변화를 들어, 파리는 이전의 실험에 건강해야한다. </li><li> 유지하는 정확한 시간, 알코올 노출의 총 시간을 추적하는 하나의 타이머를 사용하여 5 분 간격을 표시하기 위해 두 번째 카운트 다시 타이머를 사용합니다. </li><li> 명암 대비가 증가하고 가시성을 비행, 특히 희미한 붉은 빛의 조건에 유리 병 아래에 흰색 종이를 놓습니다. </li><li> 일정한 수준을 유지하기 위해 실험 기간 동안 정기적으로 공기 흐름을 확인합니다. 기류가 안정화되면 일반적으로, 이들은 실험의 길이 동안 안정적으로 유지. </li><li> 1 시간 동안 5 분마다 한 번 자신의 복원력 반사를 잃은 파리의 수를 계산합니다. 주류 감도 유전자형 및 유전 배경 사이에서 변화로서, 더 자주 평가를 수행하거나 긴 시간에 대한 실험을 수행하는 것이 바람직 할 수있다. </li><li> 유리 병 slightl를 들어 올려표면에서 y 및 유리 병 뒤에 종이를 향해 붉은 빛 손전등의 빛을 연출합니다. 희미한 붉은 빛의 조건에서 모든 실험을 위해 1 룩스보다 더 큰 빛 수준을 유지하기 위해 실험 유리 병에 최소 12 인치의 거리에서 핸드 헬드 빨간색 손전등을 유지합니다. </li><li> 모든 실험에 대한 표준을 설정하기 위해 노출계를 사용하여 가벼운 수준을 측정합니다. </li><li> 유리 병에 회사 탭을 적용하여 자신의 복원력 반사 손실 약 4 초 이내에 스스로를 잘하지 얼마나 많은 파리 계산 한 파리의 수를 결정합니다. LORR을 표시 파리는 여전히 자신의 다리와 날개를 이동할 수 있지만, 똑바로 자신을 켤 수 없습니다. </li><li> 세션의 끝에, 각 바이알에있는 파리의 총 수를 센다. 참고 : 경우에 따라 하나의 플라이로드는 실험 유리 병에 파리 스토퍼와 측면 사이에 잡힐 수 있습니다. 이는 어둠 속에서 수행되기 때문에, 그것은 쉽게 그래서 총 마비를 계산 할 필요가 발견되지 않을 수 있습니다올바르게 백분율을 계산하는 실험의 끝에 파리의 ER. </li></ol> 또한이 절차는 또한 다른 행동 끝점을 나타내는 파리의 진정 작용을 측정하기 위해 사용될 수있다. 진정 파리가 바로 반사를 잃은 반면, 진정 작용이 큰 알코올 노출이 필요합니다. 행동으로, 진정 작용은 파리가 유리 병에 AA 회사 탭 다음 유리 병에 움직 남아있는 명백한 모터 활동의 완전한 부족에 의해 특징 지어 질 수있다. 진정 작용의 경우, 움직임이 더 다리가 유리 병의 회사 탭의 다음 배달을 흔들며 없습니다로 남아 파리의 수를 계산합니다. 또한, 유리 병은 개별 파리는 여전히 잡는 반​​사를 유지할지 여부를 결정하기 위해 좌우로 압연 할 수 있습니다. 4. 데이터 분석 <ol><li> 각각의 병에 파리의 총 수에 따라 평가마다의 비율 LORR를 결정합니다. </li><li> calculati하여주기 시점 또는 균주 사이의 견적의 차이S 자 곡선의 직선 부분에 속하는 각각의 샘플에 대한 50 %의 LORR을, (아래 그림 2 참조) 겨. </li><li> 다른 통계 : <ol><li> 유전자형 사이의 비교가 예정되어있는 경우,이 차이는 (도 3) 사후 검사 현저한 것을 시점의 범위를 결정하기 위하여 반복 측정 ANOVAand를 사용하여 전체의 시간 과정을 분석하는 것이 바람직하다. 이 시험을 위해, 우리는 0.001의 값을 사용하는 것을 선호한다. 이것은 개개의 노광 시간에 차이가 곡선의 기울기의 유전자형의 차이뿐만 아니라, 평가 될 수있다. </li><li> 감도의 차이는 그래프의 직선 부분 (그림 4)에서 진정 작용과 같은 특정 반응 알코올 노출의 특정 시간에 결정될 수있다. </li><li> 균주 또는주기 시점 간의 차이는 표준 F-통계 및 사후 시험을 이용하여 추정 될 수있다. </li></ol></li></ol>

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Biol. 211, 3454-3466 (2008).</li><li>Sitaraman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+is+necessary+for+place+memory+in+Drosophila.">Serotonin is necessary for place memory in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5579-5584 (2008).</li><li>Bainton, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+modulates+acute+responses+to+cocaine,+nicotine+and+ethanol+in+Drosophila.">Dopamine modulates acute responses to cocaine, nicotine and ethanol in Drosophila.</a> Current Biology. 10, 187-194 (2000).</li><li>Kong, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pair+of+dopamine+neurons+target+the+D1-like+dopamine+receptor+DopR+in+the+central+complex+to+promote+ethanol-stimulated+locomotion+in+Drosophila.">A pair of dopamine neurons target the D1-like dopamine receptor DopR in the central complex to promote ethanol-stimulated locomotion in Drosophila.</a> Plos One. 5, (2010).</li><li>Xu, J., Kochanek, K. D., Murphy, S. L., Tejada-Vera, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Deaths: Final data for 2007. , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+National+Center+on+Addiction+and+Substance+Abuse.">The National Center on Addiction and Substance Abuse.</a> Shoveling up II: The impact of substance abuse on federal, state and local budgets. , (2009).</li><li>NIAAA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimated+economic+costs+of+alcohol+abuse+in+the+United+States.">Estimated economic costs of alcohol abuse in the United States.</a> , (1992).</li><li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+ethanol+consumption+in+Drosophila+models+features+of+addiction.">Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction.</a> Current Biology. 19, 2126-2132 (2009).</li><li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addiction-like+behavior+in+Drosophila.">Addiction-like behavior in Drosophila.</a> Communicative &amp; Integrative Biology. 3, 357-359 (2010).</li><li>Rodan, A. R., Rothenfluh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+behavioral+alcohol+responses+in+Drosophila.">The genetics of behavioral alcohol responses in Drosophila.</a> International Review of Neurobiology. 91, 25-51 (2010).</li><li>Boothroyd, C. E., Young, M. W., Pfaff, D. W., Kieffer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+Biophysical+Mechanisms+of+Arousal,+Alertness,+and+Attention.">Molecular and Biophysical Mechanisms of Arousal, Alertness, and Attention.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1129, 350-357 (2008).</li><li>Nitabach, M. N., Taghert, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+circadian+control+circuit.">Organization of the Drosophila circadian control circuit.</a> Current Biology. 18, 84-93 (2008).</li><li>Sheeba, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+melanogaster+circadian+pacemaker+circuit.">The Drosophila melanogaster circadian pacemaker circuit.</a> J. Genet. 87, 485-493 (2008).</li><li>Cohan, F. M., Graf, J. -. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Latitudinal+cline+in+Drosophila+melanogaster+for+knockdown+resistance+to+ethanol+fumes+and+for+rates+of+response+to+selection+for+further+resistance.">Latitudinal cline in Drosophila melanogaster for knockdown resistance to ethanol fumes and for rates of response to selection for further resistance.</a> Evolution. , 278-293 (1985).</li><li>Moore, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+intoxication+in+Drosophila:+Genetic+and+pharmacological+evidence+for+regulation+by+the+cAMP+signaling+pathway.">Ethanol intoxication in Drosophila: Genetic and pharmacological evidence for regulation by the cAMP signaling pathway.</a> Cell. 93, 997-1007 (1998).</li><li>Berger, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+sensitivity+and+tolerance+in+long-term+memory+mutants+of+Drosophila+melanogaster.">Ethanol sensitivity and tolerance in long-term memory mutants of Drosophila melanogaster.</a> Alcohol Clin Exp Res. 32, 895-908 (2008).</li><li>Pohl, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+Genes+Differentially+Affect+Tolerance+to+Ethanol.">Circadian Genes Differentially Affect Tolerance to Ethanol.</a> in Drosophila. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. , (2013).</li><li>Bhandari, P., Kendler, K. S., Bettinger, J. C., Davies, A. G., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assay+for+evoked+locomotor+behavior+in+Drosophila+reveals+a+role+for+integrins+in+ethanol+sensitivity+and+rapid+ethanol+tolerance.">An assay for evoked locomotor behavior in Drosophila reveals a role for integrins in ethanol sensitivity and rapid ethanol tolerance.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 33, 1794-1805 (2009).</li><li>Rothenfluh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+behavioral+responses+to+ethanol+are+regulated+by+alternate+RhoGAP18B+isoforms.">Distinct behavioral responses to ethanol are regulated by alternate RhoGAP18B isoforms.</a> Cell. 127, (1016).</li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

알코올 남용과 사회에 대한 알코올 중독의 비용은 모두 29 인간과 경제적 비용의 측면에서 엄청난 (30, 31). 초파리 모델로 신속하게 개인의 많은 수의 행동 반응을 조사하는 빠르고 다양한 시스템을 제공하고 같은 광범위 알코올 5,7,32-34 및주기 연구 35-37에 모두 사용하고있다. 여기, 우리는주기 조건에서 성인 파리에 알코올 증기의 제어...

초파리 melanogaster의이 약 2,3에 대한 인간의 응답과 유사하다 알코올 1 이상성 행동 반응을 보여줍니다. , 및 진정 작용 (응답 모터 활동의 완전한 부족 : 알코올 농도가 낮은 초기 노출되면, 모터 조정의 부족, 자세 제어의 손실 보상하기 반사 (LORR 바로 잡는 반​​사 손실)로 대체, 전시 증가 운동 활성을 날아 기계적인 자극에) 알코올에 노출이 4-9 진행됨. 내인성주기 클록 생쥐 10,11, 12 래트에서 관찰로서 주류 감도 및 독성의 강한 변조기이고, 13 인간. 초파리 연구의 최근 발전은주기 시계가 급성 알코올 감도 있지만 알코올 내성 1 변조 보여 주었다. 돌연변이 연구와 공간의 유전자 조작을 통해 초파리에서 사용할 수있는 강력한 유전 적 접근 방법시간적 유전자 발현 복잡한 동작을위한 내부 세포 및 분자 메커니즘을 식별 약진을 허용하는 시스템을 제공한다. 조사 도구로 초파리의 사용은 급속히 포유류 14-16로 번역 할 수있는 알코올의 신경 생물학을 이해하는 실질적인 발전을 허용했다. 일 주기성 시계가 주류 감도를 변조 통해 분자 메커니즘의 이해를 용이하게하기 위해 균일주기 ​​시점 걸쳐 행동 반응, 희미한 적색 광 조건에서 사용하기에 적합한 알코올 투여 프로토콜을 측정하기 위해 필요하다. 초파리의 경우, 알코올 만성 노출 또는 안정적으로 급성 노출에 대한 증기의 형태로 알코올을 투여 통해 음식 섭취를 통해 관리 할 수있다. 여기에서, 우리는 상실 바로 잡는 반사 (LORR) 1주기 변조의 평가뿐만 아니라 적합한 알코올 관리 프로토콜을 설명진정. 일정한 온도에서 12 시간의 LD주기 다음 실험 질문에 따라 2 ~ 5 일 제어 빛 정권에 전송 : 파리는 12 시간으로 동반된다. 초파리는 다른 이름으로 flybar 장치 에탄올 증기에 노출된다. 이 장치에서 공기의 제어 양의 물과 알코올을 통해 발포되며, 증기는 유리 병 주택 파리에 혼합과 연결됩니다. 파리 분마다 5는 반사 신경을 보상하기 또는 진정되고있다 표시하지 않습니다 수 득점됩니다. 각 시점에 대한 LORR 비율은주기 시간 지점 사이 또는 파리의 변종 사이의 계산 및 비교됩니다. 행동 분석 옵션과 결합 된의 flybar 알코올 배달을 사용하여 알코올 배달의 단순성과 신뢰성이 어두운 조건에서 실시주기 실험의 중요한 이점을 제공합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="815">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Alcohol 190 proof</td>
			<td style="width:115px;">Various</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;"></td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Name of Material</td>
			<td style="width:115px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:296px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Aerator</td>
			<td style="width:115px;">Local pet store</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">We use Whisper 60</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Silicone tubing 1/8&#8221;</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">408060-0030</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">120&#176; Y Connector</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82017-256</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Quick disconnects</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">46600-048</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:285px;">Plastic tube clamps</td>
			<td style="width:115px;">Bell-art products</td>
			<td style="width:119px;">132250000</td>
			<td style="width:296px;">Either this or next</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Miniature Air Regulator</td>
			<td style="width:115px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">8727K11</td>
			<td style="width:296px;">Either this or previous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Miniature Air Regulator Mounting Bracket</td>
			<td style="width:115px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">9891K66</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Gilmont size 12 flow meter</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">29895-242</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Tool clips</td>
			<td style="width:115px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">1722A43</td>
			<td style="width:296px;">To hold flow meters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Vial</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89092-722</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Rubber stopper with two holes</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">59585-186</td>
			<td style="width:296px;">Fits in vials</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">5 mm Pyrex Glass tubes</td>
			<td style="width:115px;">Trikinetics</td>
			<td style="width:119px;">PGT5x65</td>
			<td style="width:296px;">Fits best in previous stopper.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Teflon tape</td>
			<td style="width:115px;">Hardware store</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">To achieve snug fit in stoppers if necessary</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Rubber stopper with two holes</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">59582-122</td>
			<td style="width:296px;">Fits our bottles</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Disposable glass pipets</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">53283-768</td>
			<td style="width:296px;">Cut to length and bend by heating</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Very fine nylon netting</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">Various</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">15 watt bulbs</td>
			<td style="width:115px;">Hardware store</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">Overhead red light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Photographic red safe light filters</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">Overhead red light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Mini Flashlights with red filters</td>
			<td style="width:115px;">Mag-light</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the flybar: administering alcohol to flies

초파리 (Drosophila의 melanogaster의)은 알코올 연구 및주기 생물학 모두 설치 한 모델입니다. 최근에는주기 클록 주류 감도 아니지만 관용의 형성을 조절하는 것이 보였다. 여기, 우리는 세부 사항에 우리의 프로토콜을 설명합니다. 알콜의 flybar를 사용 파리에 투여된다. 이 설정에서, 포화 알코올 증기는 설정 비율 가습 공기와 혼합되고, 최대 4 개의 튜브에서 파리에 투여. 파리는 반복 실험 사이의 변화를 최소화하기 위해 표준화 된 조건에서 사육된다. 다른 유전자형이나 치료의 3 일 된 파리는 바람직하게는 직접 비교가 가능하게하는 두 개의 서로 다른 시점 (예를 들어, CT 5, CT 17)의 파리를 일치시켜, 실험에 사용됩니다. 실험 동안, 플라이는 휘어진 (LORR)을 보상하기의 손실을 나타내는 알코올 증기의 미리 결정된 비율 및 해충의 수에 1 시간 동안 노출되거나 나오지 아르ATION은 5 분마다 계산됩니다. 데이터는 세 개의 서로 다른 통계적인 방법을 사용하여 분석 할 수있다. 첫 번째는 파리의 50 %가 자신의 복원력 반사를 잃은하는 시간을 확인하고 유의 한 차이는 시점 사이에 존재 여부를 확인하기 위해 분산 분석 (ANOVA)을 사용하는 것입니다. 두 번째는 ANOVA 분석 한 다음 특정 시간 (분), 후 LORR을 보여 백분율 파리를 결정하는 것입니다. 마지막 방법은 다변량 통계를 사용하여 전체 시간 시리즈를 분석하는 것입니다. 프로토콜은 유전자형 간의 비주기 실험이나 비교에 사용될 수있다.

마커로 50 % LORR를 사용하여 알코올 감도의주기 변조. 하루 동안 주류 감도주기 변조를 보여주는 대표적인 예는도 2에 제시된다. LORR는 캔톤-S의 DD의 2 차 하루 동안 여섯 시점에서 측정 한 50 % LORR은 각 시점에 대해 결정 하였다. (: F 5,45 = 7.39, P &lt;0.001, N = 6 ~ 10 시간마다 포인트 ANOVA) 분석은 하루 중 상당한 시간을 효과를 보여 주었다. 피셔의...

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The FlyBar: Administering Alcohol to Flies

초파리는 알코올에 대한 행동 반응의 세포 및 분자 토대를 해부를위한 중요한 모델 시스템으로 떠오르고있다. 여기에서 우리는 쉽게 다른 실험에 적용 할 수 있고 학부 연구에 매우 적합하다주기 컨텍스트에서 주류 감도 데이터의 수집을위한 프로토콜을 제시한다.

의 flybar : 파리에 주류 관리

Fruit flies (Drosophila melanogaster) are an established model for both alcohol research and circadian biology. Recently, we showed that the circadian ...

the-flybar-administering-alcohol-to-flies

Research

JoVE Journal

Neuroscience

10.6K 조회수.  Florida State University.  초파리는 알코올에 대한 행동 반응의 세포 및 분자 토대를 해부를위한 중요한 모델 시스템으로 떠오르고있다. 여기에서 우리는 쉽게 다른 실험에 적용 할 수 있고 학부 연구에 매우 적합하다주기 컨텍스트에서 주류 감도 데이터의 수집을위한 프로토콜을 제시한다. 

비디오: The FlyBar: Administering Alcohol to Flies

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and relapse. Various types of behavioral activity are commonly utilized as measures of drug motivation in animals. However, a crucial component of drug abuse relapse in abstinent cocaine users is "drug craving", which is difficult to model in animals, as it often occurs in the absence of overt behaviors. Yet, it is possible that a class of ultrasonic vocalizations (USVs) in rats may be a useful marker for affective responses to drug administration, drug anticipation and even drug craving. Rats vocalize in ultrasonic frequencies that serve as a communicatory function and express subjective emotional states. Several studies have shown that different call frequency ranges are associated with negative and positive emotional states. For instance, high frequency calls ("50-kHz") are associated with positive affect, whereas low frequency calls ("22-kHz") represent a negative emotional state. This article describes a procedure to assess rat USVs associated with daily cocaine self-administration. For this procedure, we utilized standard single-lever operant chambers housed within sound-attenuating boxes for cocaine self-administration sessions and utilized ultrasonic microphones, multi-channel recording hardware and specialized software programs to detect and analyze USVs. USVs measurements reflect emotionality of rats before, during and after drug availability and can be correlated with commonly assessed drug self-administration behavioral data such lever responses, inter-response intervals and locomotor activity. Since USVs can be assessed during intervals prior to drug availability (e.g., anticipatory USVs) and during drug extinction trials, changes in affect associated with drug anticipation and drug abstinence can also be determined. In addition, determining USV changes over the course of short- and long-term drug exposure can provide a more detailed interpretation of drug exposure effects on affective functioning.

Drug self-administration and ultrasonic vocalizations (USV) are used as behavioral assessments in animal research, but rarely in combination. The purpose of this article is to describe the advantages of recording USVs during drug self-administration procedures to assess affective responses to drug experience.

쥐에서 의약품 자체 관리하는 동안 초음파 Vocalizations 평가

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

연구

신경과학

A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

파리에서 에탄올 민감도를 측정하는 간단한 방법

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of interest. This allows for examination of synaptic transmission under conditions where the extracellular and postsynaptic intracellular environments can be well controlled. A vibration-based technique without the use of proteases, known as vibrodissociation, is the most popular technique for mechanical isolation. A micropipette, with the tip fire-polished to the shape of a small ball, is placed into a brain slice made from a P1-P21 rodent. The micropipette is vibrated parallel to the slice surface and lowered through the slice thickness resulting in the liberation of isolated neurons. The isolated neurons are ready for study within a few minutes of vibrodissociation. This technique has advantages over the use of primary neuronal cultures, brain slices and enzymatically isolated neurons including: rapid production of viable, relatively mature neurons suitable for electrophysiological and imaging studies; superior control of the extracellular environment free from the influence of neighboring cells; suitability for well-controlled pharmacological experiments using rapid drug application and total cell superfusion; and improved space-clamp in whole-cell recordings relative to neurons in slice or cell culture preparations. This preparation can be used to examine synaptic physiology, pharmacology, modulation and plasticity. Real-time imaging of both pre- and postsynaptic elements in the living cells and boutons is also possible using vibrodissociated neurons. Characterization of the molecular constituents of pre- and postsynaptic elements can also be achieved with immunological and imaging-based approaches.

This report demonstrates a technique for mechanical isolation of individual viable neurons retaining attached presynaptic boutons. Vibrodissociated neurons have the advantages of rapid production, excellent pharmacological control and improved space-clamp without influence from neighboring cells. This method can be used for imaging of synaptic elements and patch-clamp recording.

쥐 뇌 조각에서 뉴런의 Vibrodissociation는 시냅틱 전송 및 이미지 Presynaptic 터미널 공부

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This is mostly due to the difficulty of microdissection of fetal brains and their sectioning for determination of apoptotic cells caused by prenatal exposure to alcohol. The experiments described here provide visualized techniques from mice breeding to the identification of cell death in fetal brain tissue. This study used C57BL/6 mice as the animal model for studying fetal alcohol exposure and the role of trophic peptide against alcohol-induced apoptosis. The breeding consists of a 2-hr matting window to determine the exact stage of embryonic age. An established fetal alcohol exposure model has been used in this study to determine the effects of prenatal alcohol exposure in fetal brains. This involves free access to alcohol or pair-fed liquid diets as the sole source of nutrients for the pregnant mice.
The techniques involving dissection of fetuses and microdissection of fetal brains are described carefully, since the latter can be challenging. Microdissection requires a stereomicroscope and ultra-fine forceps. Step-by-step procedures for dissecting the fetal brains are provided visually. The fetal brains are dissected from the base of the primordium olfactory bulb to the base of the metencephalon.
For investigating apoptosis, fetal brains are first embedded in gelatin using a peel-away mold to facilitate their sectioning with a vibratome apparatus. Fetal brains embedded and fixed in paraformaldehyde are easily sectioned, and the free floating sections can be mounted in superfrost plus slides for determination of apoptosis or cell death.
TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick End Labeling; TdT: terminal deoxynucleotidyl transferase) assay has been used to identify cell death or apoptotic cells. It is noteworthy that apoptosis and cell-mediated cytotoxicity are characterized by DNA fragmentation. Thus, the visualized TUNEL-positive cells are indicative of cell death or apoptotic cells.
The experimental designs here provide information about the use of an established liquid diet for studying the effects of alcohol and the role of neurotrophic peptides during pregnancy in fetal brains. This involves breeding and feeding pregnant mice, microdissecting fetal brains, and determining apoptosis. Together, these visual and textual techniques might be a source for investigating prenatal exposure of harmful agents in fetal brains.

The experimental designs proposed here focus on studying the effects of alcohol exposure in apoptosis and the application of neurotrophic peptide during pregnancy in fetal brain. A detailed description from the breeding to the collection of fetal brains is described. Techniques for determination of apoptosis are also described in detail.

알코올에 의한 C57BL 임신 중 세포 자멸사 / 6 마​​우스에 대하여, 신경 친 화성 펩타이드, ADNF-9의 효과를 테스트하기위한 실험 방법

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This ...

Electroporation of the Hindbrain to Trace Axonal Trajectories and Synaptic Targets in the Chick Embryo

Electroporation of the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient for the expression of foreign genes into neuronal cells. In this manuscript we provide a method that demonstrates uniquely how to electroporate DNA into the avian hindbrain at E2.75 in order to specifically label a subset of neuronal progenitors, and how to follow their axonal projections and synaptic targets at much advanced stages of development, up to E14.5. We have utilized novel genetic tools including specific enhancer elements, Cre/Lox - based plasmids and the PiggyBac-mediated DNA transposition system to drive GFP expression in a subtype of hindbrain cells (the dorsal most subgroup of interneurons, dA1). Axonal trajectories and targets of dA1 axons are followed at early and late embryonic stages at various brainstem regions. This strategy contributes advanced techniques for targeting cells of interest in the embryonic hindbrain and for tracing circuit formation at multiple stages of development.

How neuronal networks are established in the embryonic brain is a fundamental question in developmental neurobiology. Here we combined an electroporation technique with novel genetic tools, such as Cre/Lox&#x2013;plasmids and PiggyBac-mediated DNA transposition system in the avian hindbrain to label dorsal interneurons and track their axonal projections and synaptic targets at various developmental stages.

병아리 배아에서 축삭 궤적과 시냅스 대상을 추적하는 후뇌의 일렉트로

Electroporation of  the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient  for the expression of foreign genes into ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety of brain disorders1,2. To better understand the mechanisms by which brain circuits react to an animal's experience requires the ability to monitor the experience-dependent molecular changes in a given set of neurons, over a prolonged period of time, in the live animal. While experience and associated neural activity is known to trigger gene expression changes in neurons1,2, most of the methods to detect such changes do not allow repeated observation of the same neurons over multiple days or do not have sufficient resolution to observe individual neurons3,4. Here, we describe a method that combines in vivo two-photon microscopy with a genetically encoded fluorescent reporter to track experience-dependent gene expression changes in individual cortical neurons over the course of day-to-day experience. 
One of the well-established experience-dependent genes is Activity-regulated cytoskeletal associated protein (Arc)5,6. The transcription of Arc is rapidly and highly induced by intensified neuronal activity3, and its protein product regulates the endocytosis of glutamate receptors and long-term synaptic plasticity7. The expression of Arc has been widely used as a molecular marker to map neuronal circuits involved in specific behaviors3. In most of those studies, Arc expression was detected by in situ hybridization or immunohistochemistry in fixed brain sections. Although those methods revealed that the expression of Arc was localized to a subset of excitatory neurons after behavioral experience, how the cellular patterns of Arc expression might change with multiple episodes of repeated or distinctive experiences over days was not investigated. 
In vivo two-photon microscopy offers a powerful way to examine experience-dependent cellular changes in the living brain8,9. To enable the examination of Arc expression in live neurons by two-photon microscopy, we previously generated a knock-in mouse line in which a GFP reporter is placed under the control of the endogenous Arc promoter10. This protocol describes the surgical preparations and imaging procedures for tracking experience-dependent Arc-GFP expression patterns in neuronal ensembles in the live animal. In this method, chronic cranial windows were first implanted in Arc-GFP mice over the cortical regions of interest. Those animals were then repeatedly imaged by two-photon microscopy after desired behavioral paradigms over the course of several days. This method may be generally applicable to animals carrying other fluorescent reporters of experience-dependent molecular changes4.

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Experience-dependent molecular changes in neurons are essential for the brain's ability to adapt in response to behavioral challenges. An in vivo two-photon imaging method is described here that allows the tracking of such molecular changes in individual cortical neurons through genetically encoded reporters.

두피 뉴런에서 생체 내 두 - 광자의 영상은 경험에 의존 분자 변경

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

A Method to Make a Craniotomy on the Ventral Skull of Neonate Rodents

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain in adulthood and during development. Although most in vivo approaches use a craniotomy to study brain regions located on the dorsal side, brainstem regions such as the pons, located on the ventral side remain relatively understudied. The main goal of this protocol is to facilitate access to ventral brainstem structures so that they can be studied in vivo using electrophysiological and imaging methods. This approach allows study of structural changes in long-range axons, patterns of electrical activity in single and ensembles of cells, and changes in blood brain barrier permeability in neonate animals. Although this protocol has been used mostly to study the auditory brainstem in neonate rats, it can easily be adapted for studies in other rodent species such as neonate mice, adult rodents and other brainstem regions.

A surgical method is described to expose the ventral skull in neonate rats. Using this approach it is possible to open a craniotomy to perform acute electrophysiology and two-photon microscopy experiments in the brainstem of anesthetized pups.

신생아 설치류의 복부 두개골에 개두를 확인하는 방법

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain ...

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in their etiology. The fruit fly, Drosophila melanogaster, is a powerful model for exploring molecular-genetic mechanisms underlying alcohol-related behaviors and therefore holds great promise for identifying and understanding the function of genes that influence AUD. The use of the Drosophila model for these types of studies depends on the availability of assays that reliably measure behavioral responses to ethanol. This report describes an assay suitable for assessing ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies. Ethanol sensitivity measured in this assay is influenced by the volume and concentration of ethanol used, a variety of previously reported genetic manipulations, and also the length of time the flies are housed without food immediately prior to testing. In contrast, ethanol sensitivity measured in this assay is not affected by the vigor of fly handling, sex of the flies, and supplementation of growth medium with antibiotics or live yeast. Three different methods for quantitating ethanol sensitivity are described, all leading to essentially indistinguishable ethanol sensitivity results. The scalable nature of this assay, combined with its overall simplicity to set-up and relatively low expense, make it suitable for small and large scale genetic analysis of ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila.

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Straightforward assays for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila facilitate the use of this model organism for investigating these important ethanol-related behaviors. Here, a relatively simple, scalable assay for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies is described.

에탄올 진정 감도 및 신속한 공차 측정을위한 저렴하고 확장 가능한 행동 분석<em&gt; 초파리</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

의 로코 속도에 에탄올의 효과를 측정하는 분석<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central nervous system. Changes in ENS function are a major cause of GI symptoms and disease and may contribute to GI symptoms reported in neuropsychiatric disorders including autism. It is well established that isolated colon segments generate spontaneous, rhythmic contractions known as Colonic Migrating Motor Complexes (CMMCs). A procedure to analyze the enteric neural regulation of CMMCs in ex vivo preparations of mouse colon is described. The colon is dissected from the animal and flushed to remove fecal content prior to being cannulated in an organ bath. Data is acquired via a video camera positioned above the organ bath and converted to high-resolution spatiotemporal maps via an in-house software package. Using this technique, baseline contractile patterns and pharmacological effects on ENS function in colon segments can be compared over 3-4 hr. In addition, propagation length and speed of CMMCs can be recorded as well as changes in gut diameter and contraction frequency. This technique is useful for characterizing gastrointestinal motility patterns in transgenic mouse models (and in other species including rat and guinea pig). In this way, pharmacologically induced changes in CMMCs are recorded in wild type mice and in the Neuroligin-3R451C mouse model of autism. Furthermore, this technique can be applied to other regions of the GI tract including the duodenum, jejunum and ileum and at different developmental ages in mice.

This article describes a video imaging technique and high-resolution spatiotemporal mapping to identify changes in the neural regulation of colonic motility in adult mice. Subtle effects on gastrointestinal (GI) function can be detected using this approach in isolated tissue preparations to advance our understanding of GI disease.

비디오 이미징 및 시공간지도는 마우스에서 위장관 운동성을 분석하는

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...