O financiamento para esta pesquisa foi fornecido por um programa em Neurociências Prêmio da Florida State University College of Medicine e apoio do Departamento de Ciências Biológicas da FSU. Financiamento adicional foi fornecida por um Grant-in-Aid do Fundo de Investigação do Álcool Bebidas Fabricante.

1. Assembleia da Flybar Fundamentação e visão geral: O sistema é projetado para administrar porcentagens controladas de vapor de álcool às moscas. Nota: A Figura 1 fornece uma visão esquemática do Flybar set-up, conforme descrito abaixo em três etapas (montagem do fluxo de ar, set-up do álcool e garrafas de água, e montagem dos frascos de observação). Em suma, um fluxo de ar constante é dividido em duas frações que são borbulhar álcool e água, respectivamente, misturados e administrados a 4 frascos de observação. <ol><li> Assembleia da Airflow <ol><li> Conecte um pequeno pedaço de tubo de silicone flexível a qualquer edifício de ar ou um aerador de aquário para gerar um fluxo de ar consistente e divisão por meio de conector y. Ligue o primeiro ramo do regulador de fluxo de ar que controla a quantidade total de ar através do sistema (normalmente de 1.000 ml / min durante 4 frascos de observação). </li><li> Insira um conector de engate rápido no segundo tubode modo que o fluxo de ar pode ser interrompido no começo do ensaio, sem afectar o fluxo de ar calibrado. Adicionar um conector y e conectar cada tubo de ramificação para o regulador de fluxo de ar. </li><li> Conecte tubulação para os reguladores de fluxo de ar e, em seguida, conectar dois metros de fluxo de ar. </li></ol></li><li> Set-up das garrafas de álcool e água <ol><li> Adicionar tubo flexível para a saída dos medidores de fluxo de ar e inserir um tubo de vidro fino (secções de 1 ml de pipetas de vidro) com um ângulo de 90 ° para dentro da extremidade de cada troço de tubo. Isto servirá como o fluxo de ar de entrada para as garrafas de água e álcool. </li><li> Coloque tampas de borracha com 2 buracos através deles para as garrafas cheias de álcool e água. Manter ambos os frascos a uma temperatura constante da temperatura de 2 ° C acima da temperatura do ar ambiente, utilizando um banho de água. Nas nossas experiências, o quarto meio ambiente é mantida a 25 ° C, enquanto que o banho de água é a 27 ° C. </li><li> Insira a pipeta de vidro direto para o umri admissão através da rolha de borracha e se estender para o fluido até cerca de 1 cm a partir do fundo da garrafa. </li><li> Insira uma secção em cotovelo de uma pipeta de vidro para dentro do buraco remanescente na rolha de borracha até à extremidade do vidro é nivelada com o fundo da rolha para dentro da garrafa. Insira esta saída de ar em outro comprimento da tubulação. </li><li> Reunir as correntes de ar usando um conector-Y e usar um outro comprimento de tubagem de silicone para dirigir o fluxo de ar através de um frasco de mistura vazio ou garrafas com secções de pipetas de vidro dobradas inseridos através de uma rolha de borracha de dois furos. Use outro pedaço de tubo de silicone para a corrente de ar misturado tomada. </li></ol></li><li> Assembleia da Observação Vial <ol><li> Dividir a corrente de ar de saída que emerge a partir da mistura de frasco 2-3x obter quatro ou oito fluxos de ar mais pequenas, de modo que vários frascos de observação pode ser utilizado em cada experiência. Conecte o tubo de silicone flexível para os frascos de observação. </li><li> Configure o observatiem frascos utilizando frascos vazios fechados com uma rolha de borracha que contém dois orifícios através dos quais os tubos de vidro proporcionam uma entrada e uma saída para o vapor de álcool. </li><li> Cobrir a extremidade do primeiro tubo de vidro com rede e manter a rede no lugar, usando uma pequena peça de tubagem de plástico flexível. Inserir este tubo através do primeiro furo, até que se estende até cerca de metade do comprimento do tubo. Se necessário, use fita de teflon para obter um ajuste confortável. </li><li> Insira o segundo tubo de vidro também com o fim coberto por compensação até que ela fique nivelada com a borda interna da tampa de borracha. </li><li> Colocar os tubos na horizontal em um pedaço de papel branco para maximizar o contraste com as moscas sob fracas condições de luz vermelha. </li><li> Misture fracções apropriadas da corrente de ar borbulhada através de álcool e a corrente de ar borbulhada através de água. Monitorar a pressão de ar de forma contínua e fazer os ajustes necessários para manter a mistura desejada dos fluxos de ar. Nota: O funcionamento contínuode vários ensaios Fly Bar em paralelo ou mesmo um único ensaio em uma pequena sala pode levar a uma acumulação considerável de vapor de álcool. Para evitar a libertação contínua de vapor de álcool que pode potencialmente afetar o pesquisador em uma sala fechada, um sistema adequado precisa ser colocado no lugar que remove adequadamente vapor de álcool gerado durante o experimento. Para remover vapores de álcool, ligar um pedaço de tubo de 6-12 polegadas para o segundo tubo de vidro salientes de cada frasco, e empacotá-los directamente para um sistema de vácuo em forma de funil. Os investigadores devem também assegurar que a sala de ensaio experimental é adequadamente ventilado. </li></ol></li></ol> 2. Preparação de Animais Experimentais Fundamentação e visão geral: a cultura adequada e habitação das moscas vai reduzir a variabilidade nos dados. Isto é conseguido através da normalização e minimização do esforço experimentado pelas moscas. Por esse motivo, sem anestesia (CO 2 ou alternativas) é usado during de qualquer um dos seguintes passos do protocolo. Além disso, as moscas deve ser a mesma faixa etária em todo experiências e pontos de tempo para minimizar a variabilidade como é padrão para outras análises comportamentais, incluindo experiências de aprendizagem e memória 17. Luz diferente: condições de escuridão pode ser usado para sondar a função do relógio circadiano em resposta comportamental de etanol. Para determinar se um ritmo diurno existe, os experimentos podem ser realizados no âmbito de um ciclo LD definido para medir o desempenho em específico Zeitgeber Times (ZT). ZT 0 representa madrugada e é definido como o tempo de luzes acesas em ciclos LD, enquanto ZT 12 é as luzes de tempo estão desligados com um ciclo CE 12:12 h. Sob as condições constantes, o tempo circadiano (CT) mede o tempo para que o animal, na ausência de sinais do ambiente, ou seja, o tempo de funcionamento livre, e é relacionada com o ciclo LD arrastamento anterior. Em tipo selvagem Drosophila, CT reflete a ZT anterior pela primeira vários diass em condições constantes como o período circadiano free-running e ritmos são ~ 24 horas. Para medir a modulação circadiano e eliminar efeitos de luz agudas sobre o comportamento, as moscas são arrastadas para claro e escuro e, em seguida, transferido para constantes condições de pouca luz (DD) antes de experimentos. Experimentos circadianos são realizadas no segundo dia de DD para medir o desempenho em específico circadiano Times (CT). Em Drosophila, luz contínua (LL) condições resultar em disfunção circadiana com oscilações moleculares umedecido ou abolida de genes circadianos centrais e perturbação dos ritmos circadianos comportamentais como evidenciado pela atividade locomotora arrítmico 18-21 e memória arrítmico de curto prazo 17. O protocolo é otimizado para estudos circadianos e pode ser simplificada para outros experimentos. Todos os experimentos circadianos são realizados utilizando pouca luz vermelha (sobrecarga ambiente luz vermelha &lt;1 lux em bancada; pequenas luzes vermelhas usadas em 12 polegadas de tubos~ 1 lux de luz). <ol><li> Traseiros as moscas a 25 ° C sob 0:12 hr luz: as condições de arrastamento escuros (LD). </li><li> Recolhe moscas recém eclosed no final do período de luz do dia, no dia 1 e armazená-los durante 24 horas sob condições de LD em segurando frascos contendo uma pequena quantidade de alimento de alto concentração agar, para minimizar a viscosidade dos alimentos. Nota: Para garantir saudáveis, moscas normalmente desenvolvidos são coletados, apenas usar moscas coletadas nos primeiros dias após a eclosão começa em um frasco de cultura. </li><li> Recolhe lotes de cerca de 30 (25-35) opera através de um aspirador no dia 2, para o fim do período de luz, e transferência para ampolas de detenção frescos. </li><li> Use uma fonte de luz forte para dirigir moscas até o final do frasco. Dentro desta gama, o número exacto de moscas em cada frasco não é crítica como as observações comportamentais são relatados em percentagem com o número total de moscas contadas no fim de cada experiência. </li><li> Manter moscas sob condições DD a 25 ° C for dois dias. </li><li> No dia da experiência, coloca todas as moscas alojados em condições diferentes ou outras do que o quarto comportamento experimental no ambiente durante, pelo menos, 1 hora antes da experiência incubadoras. Aclimatação reduz a variabilidade devido a mudanças na temperatura ou umidade. </li><li> Fazer observações em pontos de tempo de seis por dia (CT 1, 5, 9, 13, 17 e 21), a fim de testar a modulação do comportamento circadiano. </li><li> Compare vários pontos de tempo dentro de um único conjunto de experimentos comportamentais para aumentar a robustez do desenho experimental e minimizar a variabilidade específica para um único experimento. Por exemplo, observações de um CT e CT 13 podem ser obtidos simultaneamente se duas incubadoras com horários claro-escuro opostos são usados ​​para o arrastamento. Nota: O procedimento anterior descreve a preparação dos animais experimentais para ensaios realizados em condições de escuridão constante circadiano. Luz diferente: condições de escuridão pode ser usado para sondar a função do relógionas respostas comportamentais ao álcool. Para determinar se existe um ritmo diurno os experimentos podem ser realizados no âmbito de um ciclo de LD para medir o desempenho em específico Zeitgeber Times (ZT). Além disso, o protocolo pode ser utilizado com moscas criadas sob condições de luz constante para testar experimentos disfunção circadiano. Para protocolos alternativos que testam moscas alojados em condições de luz, ensaios comportamentais ainda deve ser realizado sob condições de pouca luz. Moscas devem ser transferidas para o escuro durante 1 hora antes da experiência, para minimizar a variabilidade comportamental devido aos efeitos agudos de luz sobre o comportamento. </li></ol> 3. Observações comportamentais Fundamentação e visão: O seguinte protocolo de administração de álcool é otimizado para observações sob fraca condição de luz vermelha. O Lorr duas medidas comportamentais e sedação representam dois pontos distintos de mosca embriaguez. Lorr representa um ponto final de embriaguez incorporando a perda of do motor e controle postural, que as medidas de sedação um ponto final muito tarde de intoxicação. Genótipo ou modulação circadiano podem afetar estas duas medidas de forma diferente; portanto, pode-se desejar examinar ambos. Em suma, as moscas são carregados nos frascos, o número de moscas que exibem Lorr ou sedação estão marcados a cada 5 min durante exposição ao vapor de álcool, e o número total de moscas contadas no fim da experiência. <ol><li> Antes de iniciar a experiência, executar o ar através do sistema (ar borbulhado através de garrafas de água e álcool), durante pelo menos 10 minutos e usar esse tempo para calibrar os fluxos de ar. </li><li> Desligue a liberação rápida para parar o fluxo de ar. Coloque as moscas nos frascos, e volte a ligar o fluxo de ar e iniciar os temporizadores. Nota: Se as moscas que não respondem ou moscas mortas são deixados nos frascos de retenção, isso pode ser um indicativo de condições de estresse. Em geral, estas condições podem ser aliviados, alojando menos moscas nos frascos que prendem ou diminuir a viscosidade de alimentos usando um ligeiroly maior concentração de ágar durante a preparação de alimentos. Para as análises comportamentais ideais e variabilidade mínima entre os experimentos, as moscas deve ser saudável antes de experimentos. </li><li> Para manter o tempo exato, utilize um cronômetro para controlar o tempo total de exposição ao álcool e usar um segundo temporizador de contagem de volta para marcar os 5 minutos de intervalo. </li><li> Coloque um pedaço de papel branco sob os frascos para aumentar o contraste e visibilidade voar, especialmente sob condições de iluminação vermelha. </li><li> Verifique o fluxo de ar regularmente durante um experimento para manter níveis constantes. Geralmente, uma vez que os fluxos de ar ter estabilizado, que se mantêm estáveis ​​durante a duração da experiência. </li><li> Contar o número de moscas que perderam o reflexo de endireitamento uma vez a cada 5 min por um período hr 1. Como a sensibilidade do álcool varia entre os genótipos e origens genéticas, pode ser desejável para realizar avaliações mais frequentes ou a realizar o ensaio para um longo período de tempo. </li><li> Levante a slightl frascoy a partir da superfície, e dirigir a luz a partir de uma lanterna de luz vermelha para o papel por detrás do frasco. Mantenha as lanternas de mão vermelho a uma distância de pelo menos 12 polegadas para o frasco experimental para manter os níveis de luz não superiores a 1 lux para todos os experimentos sob condições de iluminação vermelha. </li><li> Medir os níveis de luz usando um medidor de luz para estabelecer padrões para todos os experimentos. </li><li> Determinar o número de moscas que perderam o reflexo de endireitamento, aplicando um toque firme para o frasco e contar quantas moscas não conseguem endireitar-se dentro de aproximadamente 4 segundos. Moscas que exibem Lorr ainda pode mover as pernas e asas, mas não pode transformar-se em pé. </li><li> No fim da sessão, contar o número total de moscas em cada frasco. Nota: Às vezes, uma única mosca pode ser preso entre a tampa eo lado quando a carga voa para os frascos experimentais. Como isto é feito no escuro, pode não ser facilmente notado por isso, é necessário contar o total de dormenteser de moscas no fim da experiência para calcular corretamente percentagens. </li></ol> Além disso, este procedimento também pode ser utilizado para medir a sedação de moscas, que representa um ponto de extremidade de comportamento diferente. Enquanto moscas sedados perderam seu reflexo direito, sedação exige uma maior exposição ao álcool. Em termos de comportamento, a sedação pode ser caracterizado pela completa falta de atividade motora aparente com moscas permanecendo imóvel no frasco seguinte empresa aa torneira para o frasco. Para sedação, contar o número de moscas que permanecer imóvel sem perna balançando após a entrega de um toque firme do frasco. Além disso, o frasco pode ser rolado lado para o outro para determinar se as moscas individuais ainda mantêm o seu reflexo agarrando. 4. Análise de Dados <ol><li> Determinar a percentagem LORR em cada tempo avaliado com base no número total de moscas em cada frasco. </li><li> Estimativa diferenças entre momentos de tempo circadiano ou estirpes por calculating a Lorr 50% para cada amostra, que cai dentro da porção linear da curva sigmóide (veja a Figura 2 abaixo). </li><li> Estatísticas alternativas: <ol><li> Se as comparações entre genótipos são planejadas, é desejável para analisar todo o curso do tempo usando medidas repetidas ANOVAand para determinar o intervalo de pontos no tempo que as diferenças são significativas com testes post-hoc (Figura 3). Para estes testes, é preferível utilizar um valor de 0,001. Isso permite que as diferenças de tempos de exposição individuais a serem avaliadas, bem como as diferenças entre os genótipos na inclinação da curva. </li><li> As diferenças na sensibilidade para pode ser determinada por períodos específicos de exposição do álcool para uma resposta específica, tais como a sedação a partir da porção linear do gráfico (Figura 4). </li><li> As diferenças entre estirpes ou pontos de tempo circadiano pode ser estimada utilizando padrão F-estatísticas e testes post-hoc. </li></ol></li></ol>

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V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+ethanol+consumption+in+Drosophila+models+features+of+addiction.">Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction.</a> Current Biology. 19, 2126-2132 (2009).</li><li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addiction-like+behavior+in+Drosophila.">Addiction-like behavior in Drosophila.</a> Communicative &amp; Integrative Biology. 3, 357-359 (2010).</li><li>Rodan, A. R., Rothenfluh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+behavioral+alcohol+responses+in+Drosophila.">The genetics of behavioral alcohol responses in Drosophila.</a> International Review of Neurobiology. 91, 25-51 (2010).</li><li>Boothroyd, C. E., Young, M. W., Pfaff, D. W., Kieffer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+Biophysical+Mechanisms+of+Arousal,+Alertness,+and+Attention.">Molecular and Biophysical Mechanisms of Arousal, Alertness, and Attention.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1129, 350-357 (2008).</li><li>Nitabach, M. N., Taghert, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+circadian+control+circuit.">Organization of the Drosophila circadian control circuit.</a> Current Biology. 18, 84-93 (2008).</li><li>Sheeba, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+melanogaster+circadian+pacemaker+circuit.">The Drosophila melanogaster circadian pacemaker circuit.</a> J. Genet. 87, 485-493 (2008).</li><li>Cohan, F. M., Graf, J. -. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Latitudinal+cline+in+Drosophila+melanogaster+for+knockdown+resistance+to+ethanol+fumes+and+for+rates+of+response+to+selection+for+further+resistance.">Latitudinal cline in Drosophila melanogaster for knockdown resistance to ethanol fumes and for rates of response to selection for further resistance.</a> Evolution. , 278-293 (1985).</li><li>Moore, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+intoxication+in+Drosophila:+Genetic+and+pharmacological+evidence+for+regulation+by+the+cAMP+signaling+pathway.">Ethanol intoxication in Drosophila: Genetic and pharmacological evidence for regulation by the cAMP signaling pathway.</a> Cell. 93, 997-1007 (1998).</li><li>Berger, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+sensitivity+and+tolerance+in+long-term+memory+mutants+of+Drosophila+melanogaster.">Ethanol sensitivity and tolerance in long-term memory mutants of Drosophila melanogaster.</a> Alcohol Clin Exp Res. 32, 895-908 (2008).</li><li>Pohl, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+Genes+Differentially+Affect+Tolerance+to+Ethanol.">Circadian Genes Differentially Affect Tolerance to Ethanol.</a> in Drosophila. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. , (2013).</li><li>Bhandari, P., Kendler, K. S., Bettinger, J. C., Davies, A. G., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assay+for+evoked+locomotor+behavior+in+Drosophila+reveals+a+role+for+integrins+in+ethanol+sensitivity+and+rapid+ethanol+tolerance.">An assay for evoked locomotor behavior in Drosophila reveals a role for integrins in ethanol sensitivity and rapid ethanol tolerance.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 33, 1794-1805 (2009).</li><li>Rothenfluh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+behavioral+responses+to+ethanol+are+regulated+by+alternate+RhoGAP18B+isoforms.">Distinct behavioral responses to ethanol are regulated by alternate RhoGAP18B isoforms.</a> Cell. 127, (1016).</li></ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Os custos de abuso de álcool e alcoolismo para a sociedade é enorme, tanto em termos de custos humanos e econômicos 30,31 29. Drosophila como modelo oferece um sistema rápido e versátil para examinar rapidamente as respostas comportamentais de um grande número de indivíduos e, como tal, tem sido amplamente utilizado tanto para álcool 5,7,32-34 e pesquisa circadiano 35-37. Aqui, descrevemos um protocolo simples para a administração controlad...

Drosophila melanogaster demonstrar respostas comportamentais bifásicos ao álcool 1, que são análogas às respostas humanas a este fármaco 2,3. Após a exposição inicial a baixas concentrações de álcool, moscas apresentam aumento da atividade locomotora, substituído por uma falta de coordenação motora, a perda de controle postural e reflexos de endireitamento (perda do reflexo de endireitamento: Lorr) e sedação (completa falta de atividade motora em resposta a estimulação mecânica) como a exposição ao álcool progride 4-9. O relógio circadiano endógeno é um forte modulador de álcool sensibilidade e toxicidade, como observado em ratinhos, ratos 10,11 12, 13 e os seres humanos. Os recentes avanços na pesquisa Drosophila mostraram o relógio circadiano modula a sensibilidade aguda de álcool, mas não de álcool tolerância 1. As poderosas abordagens genéticas disponíveis em Drosophila através de estudos mutantes e manipulações transgênicas de espaciale expressão gênica temporal, fornecer um sistema que permite um progresso rápido na identificação dos mecanismos celulares e moleculares subjacentes para comportamentos complexos. O uso de Drosophila como ferramenta de investigação tem permitido avanços substanciais na compreensão da neurobiologia de álcool que podem ser rapidamente convertidos em mamíferos 14-16. A fim de facilitar a compreensão dos mecanismos moleculares pelos quais o relógio circadiano modula a sensibilidade do álcool e para medir respostas comportamentais uniformemente em toda a pontos de tempo circadiano, um protocolo de administração do álcool apropriado para o uso em fracas condições de luz vermelha não é requerida. Para Drosophila, o álcool pode ser administrado por meio de suplementação alimentar para a exposição crônica ou de forma confiável através de administração de álcool na forma de vapor para exposições agudas. Aqui, descrevemos um protocolo de administração de álcool adequado para a avaliação da modulação circadiana da Loss-of-reflexo de endireitamento (Lorr) 1, bem comosedação. As moscas são arrastadas com 12 horas: 12 horas LD ciclos a uma temperatura constante e, em seguida, transferida para um regime de luz controlada durante 2-5 dias, dependendo da questão experimental. As moscas são expostas a vapor de etanol, em um aparelho conhecido como o Flybar. Neste dispositivo, quantidades controladas de ar são borbulhar na água e álcool; Os vapores são então misturados e dirigido para uma caixa de frasco, as moscas. Cada 5 min as moscas são marcados para o número que não consegue exibir corrigir reflexos ou tornaram-se sedado. Percentagens Lorr para cada ponto de tempo é calculado e comparado entre os pontos de tempo circadianos ou entre estirpes de moscas. A simplicidade e confiabilidade do fornecimento de álcool com a entrega de álcool Flybar combinado com opções de análise de comportamento proporciona um benefício significativo para os experimentos realizados circadianos em ambientes escuros.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="815">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Alcohol 190 proof</td>
			<td style="width:115px;">Various</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;"></td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Name of Material</td>
			<td style="width:115px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:296px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Aerator</td>
			<td style="width:115px;">Local pet store</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">We use Whisper 60</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Silicone tubing 1/8&#8221;</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">408060-0030</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">120&#176; Y Connector</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82017-256</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Quick disconnects</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">46600-048</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:285px;">Plastic tube clamps</td>
			<td style="width:115px;">Bell-art products</td>
			<td style="width:119px;">132250000</td>
			<td style="width:296px;">Either this or next</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Miniature Air Regulator</td>
			<td style="width:115px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">8727K11</td>
			<td style="width:296px;">Either this or previous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Miniature Air Regulator Mounting Bracket</td>
			<td style="width:115px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">9891K66</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Gilmont size 12 flow meter</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">29895-242</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Tool clips</td>
			<td style="width:115px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">1722A43</td>
			<td style="width:296px;">To hold flow meters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Vial</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89092-722</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Rubber stopper with two holes</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">59585-186</td>
			<td style="width:296px;">Fits in vials</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">5 mm Pyrex Glass tubes</td>
			<td style="width:115px;">Trikinetics</td>
			<td style="width:119px;">PGT5x65</td>
			<td style="width:296px;">Fits best in previous stopper.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Teflon tape</td>
			<td style="width:115px;">Hardware store</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">To achieve snug fit in stoppers if necessary</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Rubber stopper with two holes</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">59582-122</td>
			<td style="width:296px;">Fits our bottles</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Disposable glass pipets</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">53283-768</td>
			<td style="width:296px;">Cut to length and bend by heating</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Very fine nylon netting</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">Various</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">15 watt bulbs</td>
			<td style="width:115px;">Hardware store</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">Overhead red light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Photographic red safe light filters</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">Overhead red light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Mini Flashlights with red filters</td>
			<td style="width:115px;">Mag-light</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the flybar: administering alcohol to flies

Moscas de frutas (Drosophila melanogaster) são um modelo estabelecido para a pesquisa de álcool e biologia circadiano. Recentemente, mostramos que o relógio circadiano modula sensibilidade ao álcool, mas não a formação de tolerância. Aqui, descrevemos nosso protocolo em detalhe. O álcool é administrado às moscas usando flybar. Nesta configuração, o vapor de álcool saturado é misturado com o ar umidificado em proporções definidas e administradas às moscas em quatro tubos simultaneamente. As moscas são criadas sob condições padronizadas, a fim de minimizar a variação entre as repetições. Três dias de idade moscas de diferentes genótipos ou tratamentos são utilizados para os experimentos, de preferência por moscas de dois pontos diferentes de tempo (por exemplo, CT 5 e CT 17) fazendo comparações diretas possível combinar. Durante a experiência, as moscas são expostos durante 1 hora a percentagem pré-determinada de vapor de álcool e o número de moscas que exibem a perda do reflexo de endireitamento (LORR) ou sedção são contados a cada 5 min. Os dados podem ser analisados ​​utilizando-se três abordagens estatísticas diferentes. A primeira é a de determinar o tempo em que 50% das moscas têm perdido o reflexo de endireitamento e usar uma análise da variância (ANOVA) para determinar se existem diferenças significativas entre pontos de tempo. O segundo é o de determinar as moscas percentuais que mostram Lorr após um determinado número de minutos, seguido de uma análise ANOVA. O último método é analisar toda a série vezes utilizando estatística multivariada. O protocolo também pode ser usado para as experiências não circadianos ou comparações entre genótipos.

Modulação circadiano de Álcool Sensibilidade usando o Lorr 50% como um marcador. Um exemplo representativo, mostrando a modulação circadiana na sensibilidade do álcool durante o dia é apresentada na Figura 2. LORR foi medida a seis pontos de tempo durante o 2o dia de DD em Canton-S e a 50% LORR foi determinada para cada ponto de tempo. A análise mostrou um efeito significativo da hora do dia (ANOVA: F 5,45 = 7.39, p &lt;0,001, N = 6-10 ...

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The FlyBar: Administering Alcohol to Flies

Drosophila surgiu como um sistema modelo importante para dissecar as bases celulares e moleculares de respostas comportamentais ao álcool. Aqui é apresentado um protocolo para a recolha de dados de sensibilidade do álcool em um contexto circadiano que pode ser facilmente aplicado a outros ensaios e é bem adequada para a pesquisa de graduação.

O Flybar: Administração álcool para Moscas

Fruit flies (Drosophila melanogaster) are an established model for both alcohol research and circadian biology. Recently, we showed that the circadian ...

the-flybar-administering-alcohol-to-flies

Research

JoVE Journal

Neuroscience

10.6K visualizações.  Florida State University.  Drosophila surgiu como um sistema modelo importante para dissecar as bases celulares e moleculares de respostas comportamentais ao álcool. Aqui é apresentado um protocolo para a recolha de dados de sensibilidade do álcool em um contexto circadiano que pode ser facilmente aplicado a outros ensaios e é bem adequada para a pesquisa de graduação. 

Vídeo: The FlyBar: Administering Alcohol to Flies

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and relapse. Various types of behavioral activity are commonly utilized as measures of drug motivation in animals. However, a crucial component of drug abuse relapse in abstinent cocaine users is "drug craving", which is difficult to model in animals, as it often occurs in the absence of overt behaviors. Yet, it is possible that a class of ultrasonic vocalizations (USVs) in rats may be a useful marker for affective responses to drug administration, drug anticipation and even drug craving. Rats vocalize in ultrasonic frequencies that serve as a communicatory function and express subjective emotional states. Several studies have shown that different call frequency ranges are associated with negative and positive emotional states. For instance, high frequency calls ("50-kHz") are associated with positive affect, whereas low frequency calls ("22-kHz") represent a negative emotional state. This article describes a procedure to assess rat USVs associated with daily cocaine self-administration. For this procedure, we utilized standard single-lever operant chambers housed within sound-attenuating boxes for cocaine self-administration sessions and utilized ultrasonic microphones, multi-channel recording hardware and specialized software programs to detect and analyze USVs. USVs measurements reflect emotionality of rats before, during and after drug availability and can be correlated with commonly assessed drug self-administration behavioral data such lever responses, inter-response intervals and locomotor activity. Since USVs can be assessed during intervals prior to drug availability (e.g., anticipatory USVs) and during drug extinction trials, changes in affect associated with drug anticipation and drug abstinence can also be determined. In addition, determining USV changes over the course of short- and long-term drug exposure can provide a more detailed interpretation of drug exposure effects on affective functioning.

Drug self-administration and ultrasonic vocalizations (USV) are used as behavioral assessments in animal research, but rarely in combination. The purpose of this article is to describe the advantages of recording USVs during drug self-administration procedures to assess affective responses to drug experience.

Avaliação de vocalizações ultra-som durante Drogas auto-administração em ratos

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Neurociência

A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

Uma maneira simples para medir a sensibilidade de etanol no Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of interest. This allows for examination of synaptic transmission under conditions where the extracellular and postsynaptic intracellular environments can be well controlled. A vibration-based technique without the use of proteases, known as vibrodissociation, is the most popular technique for mechanical isolation. A micropipette, with the tip fire-polished to the shape of a small ball, is placed into a brain slice made from a P1-P21 rodent. The micropipette is vibrated parallel to the slice surface and lowered through the slice thickness resulting in the liberation of isolated neurons. The isolated neurons are ready for study within a few minutes of vibrodissociation. This technique has advantages over the use of primary neuronal cultures, brain slices and enzymatically isolated neurons including: rapid production of viable, relatively mature neurons suitable for electrophysiological and imaging studies; superior control of the extracellular environment free from the influence of neighboring cells; suitability for well-controlled pharmacological experiments using rapid drug application and total cell superfusion; and improved space-clamp in whole-cell recordings relative to neurons in slice or cell culture preparations. This preparation can be used to examine synaptic physiology, pharmacology, modulation and plasticity. Real-time imaging of both pre- and postsynaptic elements in the living cells and boutons is also possible using vibrodissociated neurons. Characterization of the molecular constituents of pre- and postsynaptic elements can also be achieved with immunological and imaging-based approaches.

This report demonstrates a technique for mechanical isolation of individual viable neurons retaining attached presynaptic boutons. Vibrodissociated neurons have the advantages of rapid production, excellent pharmacological control and improved space-clamp without influence from neighboring cells. This method can be used for imaging of synaptic elements and patch-clamp recording.

Vibrodissociation de neurônios de fatias do cérebro de roedores para estudar a transmissão sináptica e Imagem Terminais pré-sináptica

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This is mostly due to the difficulty of microdissection of fetal brains and their sectioning for determination of apoptotic cells caused by prenatal exposure to alcohol. The experiments described here provide visualized techniques from mice breeding to the identification of cell death in fetal brain tissue. This study used C57BL/6 mice as the animal model for studying fetal alcohol exposure and the role of trophic peptide against alcohol-induced apoptosis. The breeding consists of a 2-hr matting window to determine the exact stage of embryonic age. An established fetal alcohol exposure model has been used in this study to determine the effects of prenatal alcohol exposure in fetal brains. This involves free access to alcohol or pair-fed liquid diets as the sole source of nutrients for the pregnant mice.
The techniques involving dissection of fetuses and microdissection of fetal brains are described carefully, since the latter can be challenging. Microdissection requires a stereomicroscope and ultra-fine forceps. Step-by-step procedures for dissecting the fetal brains are provided visually. The fetal brains are dissected from the base of the primordium olfactory bulb to the base of the metencephalon.
For investigating apoptosis, fetal brains are first embedded in gelatin using a peel-away mold to facilitate their sectioning with a vibratome apparatus. Fetal brains embedded and fixed in paraformaldehyde are easily sectioned, and the free floating sections can be mounted in superfrost plus slides for determination of apoptosis or cell death.
TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick End Labeling; TdT: terminal deoxynucleotidyl transferase) assay has been used to identify cell death or apoptotic cells. It is noteworthy that apoptosis and cell-mediated cytotoxicity are characterized by DNA fragmentation. Thus, the visualized TUNEL-positive cells are indicative of cell death or apoptotic cells.
The experimental designs here provide information about the use of an established liquid diet for studying the effects of alcohol and the role of neurotrophic peptides during pregnancy in fetal brains. This involves breeding and feeding pregnant mice, microdissecting fetal brains, and determining apoptosis. Together, these visual and textual techniques might be a source for investigating prenatal exposure of harmful agents in fetal brains.

The experimental designs proposed here focus on studying the effects of alcohol exposure in apoptosis and the application of neurotrophic peptide during pregnancy in fetal brain. A detailed description from the breeding to the collection of fetal brains is described. Techniques for determination of apoptosis are also described in detail.

Métodos experimentais para testar os efeitos de Peptide Neurotrophic, ADNF-9, contra a apoptose induzida pelo álcool durante a gravidez em camundongos C57BL / 6

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This ...

Electroporation of the Hindbrain to Trace Axonal Trajectories and Synaptic Targets in the Chick Embryo

Electroporation of the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient for the expression of foreign genes into neuronal cells. In this manuscript we provide a method that demonstrates uniquely how to electroporate DNA into the avian hindbrain at E2.75 in order to specifically label a subset of neuronal progenitors, and how to follow their axonal projections and synaptic targets at much advanced stages of development, up to E14.5. We have utilized novel genetic tools including specific enhancer elements, Cre/Lox - based plasmids and the PiggyBac-mediated DNA transposition system to drive GFP expression in a subtype of hindbrain cells (the dorsal most subgroup of interneurons, dA1). Axonal trajectories and targets of dA1 axons are followed at early and late embryonic stages at various brainstem regions. This strategy contributes advanced techniques for targeting cells of interest in the embryonic hindbrain and for tracing circuit formation at multiple stages of development.

How neuronal networks are established in the embryonic brain is a fundamental question in developmental neurobiology. Here we combined an electroporation technique with novel genetic tools, such as Cre/Lox&#x2013;plasmids and PiggyBac-mediated DNA transposition system in the avian hindbrain to label dorsal interneurons and track their axonal projections and synaptic targets at various developmental stages.

Eletroporação do rombencéfalo rastrear Trajetórias axonal e Metas Synaptic no embrião de galinha

Electroporation of  the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient  for the expression of foreign genes into ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety of brain disorders1,2. To better understand the mechanisms by which brain circuits react to an animal's experience requires the ability to monitor the experience-dependent molecular changes in a given set of neurons, over a prolonged period of time, in the live animal. While experience and associated neural activity is known to trigger gene expression changes in neurons1,2, most of the methods to detect such changes do not allow repeated observation of the same neurons over multiple days or do not have sufficient resolution to observe individual neurons3,4. Here, we describe a method that combines in vivo two-photon microscopy with a genetically encoded fluorescent reporter to track experience-dependent gene expression changes in individual cortical neurons over the course of day-to-day experience. 
One of the well-established experience-dependent genes is Activity-regulated cytoskeletal associated protein (Arc)5,6. The transcription of Arc is rapidly and highly induced by intensified neuronal activity3, and its protein product regulates the endocytosis of glutamate receptors and long-term synaptic plasticity7. The expression of Arc has been widely used as a molecular marker to map neuronal circuits involved in specific behaviors3. In most of those studies, Arc expression was detected by in situ hybridization or immunohistochemistry in fixed brain sections. Although those methods revealed that the expression of Arc was localized to a subset of excitatory neurons after behavioral experience, how the cellular patterns of Arc expression might change with multiple episodes of repeated or distinctive experiences over days was not investigated. 
In vivo two-photon microscopy offers a powerful way to examine experience-dependent cellular changes in the living brain8,9. To enable the examination of Arc expression in live neurons by two-photon microscopy, we previously generated a knock-in mouse line in which a GFP reporter is placed under the control of the endogenous Arc promoter10. This protocol describes the surgical preparations and imaging procedures for tracking experience-dependent Arc-GFP expression patterns in neuronal ensembles in the live animal. In this method, chronic cranial windows were first implanted in Arc-GFP mice over the cortical regions of interest. Those animals were then repeatedly imaged by two-photon microscopy after desired behavioral paradigms over the course of several days. This method may be generally applicable to animals carrying other fluorescent reporters of experience-dependent molecular changes4.

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Experience-dependent molecular changes in neurons are essential for the brain's ability to adapt in response to behavioral challenges. An in vivo two-photon imaging method is described here that allows the tracking of such molecular changes in individual cortical neurons through genetically encoded reporters.

Vivo em dois fótons de imagem de experiência dependentes de alterações moleculares em neurônios corticais

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

A Method to Make a Craniotomy on the Ventral Skull of Neonate Rodents

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain in adulthood and during development. Although most in vivo approaches use a craniotomy to study brain regions located on the dorsal side, brainstem regions such as the pons, located on the ventral side remain relatively understudied. The main goal of this protocol is to facilitate access to ventral brainstem structures so that they can be studied in vivo using electrophysiological and imaging methods. This approach allows study of structural changes in long-range axons, patterns of electrical activity in single and ensembles of cells, and changes in blood brain barrier permeability in neonate animals. Although this protocol has been used mostly to study the auditory brainstem in neonate rats, it can easily be adapted for studies in other rodent species such as neonate mice, adult rodents and other brainstem regions.

A surgical method is described to expose the ventral skull in neonate rats. Using this approach it is possible to open a craniotomy to perform acute electrophysiology and two-photon microscopy experiments in the brainstem of anesthetized pups.

Um método para fazer uma craniotomia no crânio ventral de neonatos Roedores

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain ...

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in their etiology. The fruit fly, Drosophila melanogaster, is a powerful model for exploring molecular-genetic mechanisms underlying alcohol-related behaviors and therefore holds great promise for identifying and understanding the function of genes that influence AUD. The use of the Drosophila model for these types of studies depends on the availability of assays that reliably measure behavioral responses to ethanol. This report describes an assay suitable for assessing ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies. Ethanol sensitivity measured in this assay is influenced by the volume and concentration of ethanol used, a variety of previously reported genetic manipulations, and also the length of time the flies are housed without food immediately prior to testing. In contrast, ethanol sensitivity measured in this assay is not affected by the vigor of fly handling, sex of the flies, and supplementation of growth medium with antibiotics or live yeast. Three different methods for quantitating ethanol sensitivity are described, all leading to essentially indistinguishable ethanol sensitivity results. The scalable nature of this assay, combined with its overall simplicity to set-up and relatively low expense, make it suitable for small and large scale genetic analysis of ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila.

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Straightforward assays for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila facilitate the use of this model organism for investigating these important ethanol-related behaviors. Here, a relatively simple, scalable assay for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies is described.

Um Ensaio Behavioral Barato, escalável para medição Ethanol Sedação sensibilidade e tolerância rápida em<em&gt; Drosophila</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

Um ensaio para medir os efeitos do etanol sobre a velocidade de Locomotion<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central nervous system. Changes in ENS function are a major cause of GI symptoms and disease and may contribute to GI symptoms reported in neuropsychiatric disorders including autism. It is well established that isolated colon segments generate spontaneous, rhythmic contractions known as Colonic Migrating Motor Complexes (CMMCs). A procedure to analyze the enteric neural regulation of CMMCs in ex vivo preparations of mouse colon is described. The colon is dissected from the animal and flushed to remove fecal content prior to being cannulated in an organ bath. Data is acquired via a video camera positioned above the organ bath and converted to high-resolution spatiotemporal maps via an in-house software package. Using this technique, baseline contractile patterns and pharmacological effects on ENS function in colon segments can be compared over 3-4 hr. In addition, propagation length and speed of CMMCs can be recorded as well as changes in gut diameter and contraction frequency. This technique is useful for characterizing gastrointestinal motility patterns in transgenic mouse models (and in other species including rat and guinea pig). In this way, pharmacologically induced changes in CMMCs are recorded in wild type mice and in the Neuroligin-3R451C mouse model of autism. Furthermore, this technique can be applied to other regions of the GI tract including the duodenum, jejunum and ileum and at different developmental ages in mice.

This article describes a video imaging technique and high-resolution spatiotemporal mapping to identify changes in the neural regulation of colonic motility in adult mice. Subtle effects on gastrointestinal (GI) function can be detected using this approach in isolated tissue preparations to advance our understanding of GI disease.

Vídeo Imagem e Mapas espaço-temporais para analisar Motilidade Gastrointestinal em Ratos

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...

Methods Article

O Flybar: Administração álcool para Moscas