Bu araştırma için fon Florida State Üniversitesi Tıp Fakültesi ve FSU Biyolojik Bilimler Bölümü&#39;nden destek Neuroscience Ödülü bir Programı tarafından sağlanmıştır. Ek Finansman bir Grant-in-Aid Alkollü İçki Üretici Araştırma Fonu tarafından sağlanmıştır.

Flybar 1. Meclisi Gerekçe ve bakış: sistem sinekler alkol buharının kontrollü yüzdeleri yönetmek için tasarlanmıştır. Not: Şekil 1, şematik bir incelemesini sunar Flybar kurulum üç aşamada (hava akışının düzeneği, alkol ve su şişeleri kurulumu ve gözlem şişelerin montaj), aşağıda tarif edildiği gibi. Kısacası, sürekli bir hava akımı, sırasıyla alkol ve su fokurdatıldı karıştırılmış ve 4 gözlem şişelerine tatbik edilmektedir iki fraksiyon ayrılır. <ol><li> Hava akışı montajı <ol><li> Esnek silikon tüp bina hava veya bir y-konnektörü kullanılarak tutarlı bir hava akımı ve bölünme oluşturmak için bir akvaryum perlatör birine kısa bir parça bağlayın. Sistemin (4 gözlem şişeler için, tipik olarak 1,000 ml / dakika) üzerinden toplam hava miktarını kontrol hava akış regülatörüne ilk dalı bağlayın. </li><li> Ikinci tüp içinde bir hızlı konektör kaydedinhava akımı, hava akımı kalibre etkilemeden Deneyin başında kesildi, böylece. Bir Y-bağlantı ekleyin ve hava akış regülatörüne her dallanma tüp bağlayın. </li><li> Hava akımı düzenleyiciler için boru bağlayın ve daha sonra iki hava akımı metre bağlayın. </li></ol></li><li> Alkol ve damacanaların Set-up <ol><li> Hava akışı metre çıkışında esnek borular ekleme ve boru uzunluğunun her ucuna bir 90 ° &#39;lik dirsek ile ince bir cam tüp (1 ml bir cam pipetler bölümlerinin) yerleştirin. Bu su ve alkol şişeleri içine giren hava akışını olarak görev yapacak. </li><li> Alkol ve su ile doldurulmuş şişelerin içine içlerinden 2 delikli kauçuk tıpa yerleştirin. Bir su banyosu kullanılarak dış hava sıcaklığından daha yüksek bir sabit sıcaklık 2 ° C &#39;de hem de şişe tutun. Su banyosu 27 ° C &#39;de iken Deneylerde, çevresel odası, 25 ° C&#39; de muhafaza edilir </li><li> A için düz cam pipet takınir lastik tıpadan bir girişine ve şişenin tabanından yaklaşık 1 cm kadar sıvı içine uzanır. </li><li> Camın ucu şişe içinde durdurucunun alt ile aynı hizaya gelene kadar kauçuk tıpa içinde kalan deliğe cam pipet bir dirsek bölümü yerleştirin. Bir başka boru uzunluğunda bu hava çıkış yerleştirin. </li><li> Bir y-konnektör kullanarak hava akışlarını yeniden birleştirecek ve iki delikli lastik tıpa ile yerleştirilen kavisli cam pipet bölümleri ile boş bir karıştırma şişesi veya şişenin içinden hava akışını yönlendirmek için silikon tüp başka bir uzunluk kullanın. Çıkış karışık hava akımı için silikon tüp başka bir uzunluk kullanın. </li></ol></li><li> Gözlem Vial&#39;e Meclisi <ol><li> Birden çok gözlem şişeler, her bir deney kullanılabilir, böylece hava, 4 veya 8 küçük akışları elde etmek için karıştırma şişe 2-3x çıkan çıkış hava dalgasının ayrıldı. Gözlem şişelerine esnek silikon boru bağlayın. </li><li> Görünen kaydetme kurmakCam tüpler alkol buhar için bir giriş ve bir çıkış sağlayan, üzerinden iki delik içeren lastik bir tıpa ile kapatılmış boş şişeler kullanılarak şişeler üzerinde. </li><li> Örgü ile birinci cam borunun ucunu Kapak ve esnek bir plastik boru, bir parça kullanarak yerine örgü tutun. Bu şişe yaklaşık yarısı uzunluğu kadar uzanan birinci delikten bu tüp yerleştirin. Gerekirse, bir rahat uyum elde etmek için teflon bant kullanımı. </li><li> Bu lastik bir tıpa iç kenarı ile aynı hizaya gelene kadar örgü kapsadığı ucu, ikinci cam tüp yerleştirin. </li><li> Loş kırmızı ışık koşulları altında sinekler ile kontrast maksimize etmek için yatay beyaz bir kâğıt parçası üzerinde şişeleri yerleştirin. </li><li> Hava akımının içinde karıştırın Uygun fraksiyonlar alkol fokurdatıldı ve hava akımı su fokurdatıldı. Sürekli hava basıncı izleme ve hava akımlarının arzu karışmasını sağlamak için gerekli ayarlamaları yapmak. Not: Sürekli çalışanküçük bir oda içinde paralel olarak ya da tek bir deneyde çok Fly Bar deneylerinin alkol buharı gözle görülür bir birikimine yol açabilir. Potansiyel olarak kapalı bir odada araştırmacı etkileyebilir alkol buharı sürekli salınımını önlemek için, uygun bir sistem yeterli deney sırasında oluşturulan alkol buharı kaldırır yerine koymak gerekmektedir. , Alkol buharları çıkarmak her şişeye çıkıntılı ikinci cam tüpün üzerine bir boru 6-12 inç parçası bağlamak, onları paket ve bir huni-vakum sistemine yönlendirmek için. Araştırmacılar ayrıca deneysel test odası yeterince havalandırılmış olduğundan emin olmanız gerekir. </li></ol></li></ol> Deney Hayvanlarının 2. Hazırlanması Gerekçe ve genel bakış: Özgün kültür ve sineklerin konut verileri değişkenlik azaltacaktır. Bu sinekler yaşadığı stres standardizasyonu ve azaltılması ile elde edilir. Bu nedenle, hiçbir anestezi (CO 2 veya alternatifleri) Duri kullanılırng protokol aşağıdaki adımları herhangi biridir. Ayrıca, sinekler, öğrenme ve hafıza deneyleri 17 dahil olmak üzere diğer davranışsal analizler için standart olarak değişkenliği en aza indirmek için deneyler ve zaman noktaları arasında uyumlu yaş olmalıdır. Farklı aydınlık: karanlık koşullar etanole davranışsal yanıt olarak sirkadyen saatin çalışmasını araştırmak için kullanılabilir. Bir gündüz ritim olup olmadığını belirlemek için, deneyler belirli Zeitgeber Times (ZT) performansı ölçmek için bir tanımlanmış LD döngüsü altında yapılabilir. ZT 12 kez ışıklar 12:12 saat LD döngüsü ile kapalı iken ZT 0, şafak temsil ve LD çevrimleri altında ışıkların süre olarak tanımlanır. Sabit şartlar altında, sirkadiyen zaman (CT) çevre sinyalleri örneğin, serbest çalışma süresi yokluğunda hayvan için zaman ölçer ve bir önceki LD kenetleme döngüsü ile ilgilidir. Vahşi tip Drosophila olarak, CT ilk birkaç günü için önceki ZT yansıtırsabit serbest çalışan sirkadiyen dönemi olarak koşullarda ve ritimler s ~ 24 saat vardır. Karanlık döngüleri ve sonra deneylerden önce sürekli karanlık koşullarda (DD) aktarıldı: sirkadiyen modülasyonu ölçmek ve davranışları üzerinde akut ışık etkilerini ortadan kaldırmak için, sinekler ışığa sürüklenir. Sirkadiyen deneyler belirli sirkadiyen Times (BT) de performansını ölçmek için DD ikinci gününde yapılır. Drosophila, sürekli ışık (LL) koşulları çekirdek sirkadiyen genler ve aritmik lokomotor aktivite 18-21 ve aritmik kısa-süreli hafıza 17 kanıtladığı gibi davranışsal sirkadiyen ritmin bozulması nemli veya kaldırılmış moleküler salınımlar ile sirkadiyen bozukluğuna neden. Protokol sirkadiyen çalışmaları için optimize edilmiştir ve diğer deneyler için basitleştirilebilir. Tüpler 12 inç kullanılan küçük kırmızı ışıklar; Tüm sirkadiyen deneyler loş kırmızı ışık (ortam havai kırmızı ışık &lt;tezgah üstüne 1 lux kullanılarak yürütülmüştür~ 1 lux ışık). <ol><li> 12:12 saat ışık altında 25 ° C&#39;de arka sinekler: koyu sürüklenme koşulları (LD). </li><li> Gün 1 ve gün ışığı süresinin sonunda taze eclosed sinekleri toplayın ve gıda yapışkanlığını en aza indirmek için, yüksek agar konsantrasyonu gıda küçük bir miktarını ihtiva eden küçük şişeler tutan LD koşullar altında 24 saat için saklayın. Not: Sağlıklı, normal gelişmiş sinekler toplanır sağlamak için, eclosion bir kültür şişe başladıktan sonra sadece ilk gün içinde toplanan sinekler kullanın. </li><li> Yaklaşık 30 (25-35) toplu halde toplayın bir ışık döneminin sonuna doğru günde 2 aspiratör, ve taze tutma şişelere transfer kullanarak uçar. </li><li> Şişenin kadar sonuna kadar sinekleri yönlendirmek için güçlü bir ışık kaynağı kullanın. Davranışsal gözlemler her deney sonunda sayılmıştır sinekler sayısı ile yüzde olarak rapor edildiği gibidir, bu aralık içinde, her bir küçük şişe içinde sinekler tam sayısı kritik değildir. </li><li> 25 ° C&#39;de fo DD koşullarda sinekler koruyuniki gün r. </li><li> Deney gününde, farklı koşullar ya da deney öncesinde en az 1 saat için oda deneysel davranış oda dışında kuluçka içinde yer tüm sinekler yerleştirin. Acclimation nedeniyle sıcaklık ve nem değişikliklerine değişkenliği azaltır. </li><li> Davranış sirkadiyen modülasyonu için test etmek amacıyla, altı zaman noktalarında bir gün (CT 1, 5, 9, 13, 17 ve 21) gözlemler olun. </li><li> Deneysel tasarım dayanıklılığını arttırmak ve tek bir deneye değişkenlik özgü en aza indirmek için davranışsal deneyler tek bir set içinde birden çok kez puan karşılaştırın. Ters ışık-karanlık programları ile iki kuluçka sürüklenme için kullanılır Örneğin, CT 1 ve CT 13 gözlemleri aynı anda elde edilebilir. Not: yukarıdaki prosedür, sürekli karanlıkta sirkadyan durumda gerçekleştirilen deneyleri için deney hayvanlarının hazırlanmasını tarif etmektedir. Farklı ışık: karanlık koşulları saatin çalışmasını araştırmak için kullanılabiliralkol davranışsal yanıtların. Bir gündüz ritim deneyler belirli Zeitgeber Times (ZT) performansı ölçmek için bir LD döngüsü altında yapılabilir olup olmadığını belirlemek için. Ek olarak, iletişim kuralı deneyler test sirkadiyen fonksiyon bozukluğu için sürekli ışık altında ortaya sinek ile kullanılabilmektedir. Işık koşullarında muhafaza sinekler sınamak alternatif protokoller için, davranışsal deneyler hala karanlık koşullarda yapılmalıdır. Sinekler nedeniyle davranışı üzerindeki ışık akut etkilerine davranış değişkenliği en aza indirmek için deney öncesinde 1 saat boyunca karanlıkta içine transfer edilmelidir. </li></ol> 3.. Davranış Gözlemler Gerekçe ve genel bakış: Aşağıdaki alkol verilmesi protokol loş kırmızı ışık koşulunda gözlemler için optimize edilmiştir. İki davranışsal tedbirler lorr ve sedasyon sinek sarhoşluk iki farklı noktalarını temsil eder. Lorr kaybı o içeren sarhoşluk geç bir noktasını temsilf motor ve postural kontrol, zehirlenme sedasyon önlemler ise çok geç bir bitiş noktası. Genotip veya sirkadiyen modülasyon farklı bu iki önlemlerini etkileyebilecek; dolayısıyla bir iki incelemek isteyebilirsiniz. Kısacası, sinekler şişeler içinde yüklenir, lorr veya sedasyon gösteren sinekler sayısı alkol buhar uygulama boyunca her 5 dakika ve deney sonunda sayılmıştır sineklerin sayısı puanlanır. <ol><li> Deneye başlamadan önce, en az 10 dakika boyunca sistem (hava, su ve alkol şişeleri fokurdatıldı) üzerinden havayı çalıştırmak ve hava akımı ayarlamak için bu zaman kullanın. </li><li> Hava akışını durdurmak için hızlı serbest ayırın. Şişelerde sinekler yük ve hava akışını yeniden ve sayaçlarını başlar. Not: tepkisiz sinekler veya ölü sinekler tutma şişelerde bırakılırsa, bu stres koşulları göstergesi olabilir. Genel olarak, bu koşullar tutan şişelerde az sinekler konut veya hafif kullanan gıda yapışkanlık azaltarak hafifletilebilirYemek hazırlama sırasında daha yüksek ly agar konsantrasyonu. Optimum davranışsal analiz ve deneyler arasındaki minimal değişkenlik için, sinekler, deneylerden önce sağlıklı olmalıdır. </li><li> Doğru zaman tutmak için, alkol maruziyet toplam süre takip etmek için bir zamanlayıcı kullanın ve 5 dakikalık aralıklarla işaretlemek için ikinci bir sayım-geri zamanlayıcı kullanın. </li><li> Kontrastı artırmak ve görünürlük sinek, özellikle loş kırmızı ışık koşulları altında şişelere altında beyaz bir kağıt parçası yerleştirin. </li><li> Sabit düzeylerini korumak için bir deney sırasında düzenli hava akımını kontrol edin. Hava akımları stabilize kez Genel olarak, bu deney uzunluğu boyunca sabit kalır. </li><li> 1 saat süreyle her 5 dk sonra doğrulma refleksini kaybetmiş sinek sayısını. Alkol duyarlılık genotipler ve genetik arka arasında değişir gibi, daha sık değerlendirme yapmak ya da daha uzun bir süre için deney yapmak için istenebilecektir. </li><li> Şişe slightl kaldırınyüzeyden y ve şişe arkasında kağıt doğru bir kırmızı ışık el feneri gelen ışığı doğrudan. Loş kırmızı ışık koşullar altında tüm deneylerde 1 lux daha büyük bir ışık seviyesini korumak üzere deney şişesine, en az 12 inç arasında bir mesafede el fenerleri kırmızı tutun. </li><li> Tüm deneyler için standartlar oluşturmak için bir ışık ölçer kullanarak ışık düzeylerini ölçmek. </li><li> Flakon bir firma musluk uygulayarak doğrulma refleksini yitirmiş ve yaklaşık 4 saniye içinde kendilerini sağa başarısız kaç sinekler saymak var sinekler sayısını belirleyin. Lorr gösterilecek sinekler hala kendi ayakları ve kanatları hareket edebilir, ama dik kendilerini açamıyorum. </li><li> Seansının sonunda, her şişede sinekler sayısı. Not: Bazen, bir tek sinek yükleme deney şişeleri içine uçar tıpa ve tarafı arasında yakalanmış olabilir. Bu karanlıkta yapılır gibi, hali hazırda bu nedenle toplam uyuşmuş sayısı için gerekli olan fark edilmeyebilirdoğru yüzdeleri hesaplamak için deney sonunda sinekler er. </li></ol> Buna ek olarak, bu prosedür, aynı zamanda, farklı bir davranış gösteren bir bitiş noktası sinekler sedasyon, ölçmek için kullanılabilir. Sedasyon sinekler onların sağ refleksini kaybetmiş olsa da, sedasyon fazla alkol pozlama gerektirir. Davranışsal, sedasyon sinekler şişeye aa sağlam musluk sonra küçük şişe içinde hareketsiz kalan belirgin motor aktivitenin tam eksikliği ile karakterize edilebilir. Sedasyon, hareketsiz hiçbir bacak flakon sağlam bir musluğun aşağıdaki teslim sallayarak kalır sinek sayısını. Ayrıca, şişe bireysel sinekler hala kendi kapma refleksini korumak olmadığını belirlemek için yan yana rulo olabilir. 4.. Veri Analizi <ol><li> Her şişede sinekler toplam sayısına bağlı olarak değerlendirilen her zaman yüzde lorr belirler. </li><li> Calculati sirkadiyen zaman noktaları veya suşları arasındaki farklar Tahminisigmoid eğrinin lineer kısmı içinde kalan her bir örnek için% 50 lorr, (aşağıdaki Şekil 2) ng. </li><li> Alternatif istatistikleri: <ol><li> Genotipler arasında karşılaştırmalar planlanmıştır, bu fark (Şekil 3) post-hoc testi ile önemli olduğu zaman noktaları aralığını belirlemek için tekrarlanan ölçümler için ANOVAand kullanarak tüm zaman süreci analizi için tercih edilir. Bu testler için, 0.001 bir değerini kullanmayı tercih. Bu bireysel maruz zamanlarda farklılık eğrinin eğimi genotip arasındaki farklar hem de değerlendirilebilir sağlar. </li><li> Için duyarlılık farklılıklar, grafiğin doğrusal bölümü (Şekil 4) sedasyon gibi belirli bir tepki için alkol maruz belirli zamanlarda için belirlenebilir. </li><li> Suşları veya sirkadiyen zaman noktaları arasındaki farklar standart F-istatistikleri ve post-hoc testleri kullanılarak tahmin edilebilir. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Linde, K., Lyons, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+acute+alcohol+sensitivity+but+not+acute+tolerance+in+Drosophila.">Circadian modulation of acute alcohol sensitivity but not acute tolerance in Drosophila.</a> Chronobiol. Int. 28, 397-406 (2011).</li><li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+alcohol+reward.">A Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li><li>Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+deprivation+increases+ethanol+intake+in+Drosophila.">Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila.</a> Science. 335, 1351-1355 (2012).</li><li>Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fruit+fly:+A+model+organism+to+study+the+genetics+of+alcohol+abuse+and+addiction.">The fruit fly: A model organism to study the genetics of alcohol abuse and addiction.</a> Cell. 93, 909-912 (1998).</li><li>Guarnieri, D. J., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster,+a+genetic+model+system+for+alcohol+research.">Drosophila melanogaster, a genetic model system for alcohol research.</a> International Review of Neurobiology. 54, 203-232 (2003).</li><li>Scholz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intoxicated+fly+brains:+Neurons+mediating+ethanol-induced+behaviors.">Intoxicated fly brains: Neurons mediating ethanol-induced behaviors.</a> J. Neurogenet. 23, 111-119 (2009).</li><li>Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. Y., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+analysis+of+ethanol-induced+locomotor+stimulation+in+Drosophila.">High-resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila.</a> J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).</li><li>Schumann, G., Spanagel, R., Mann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candidate+genes+for+alcohol+dependence:+Animal+studies.">Candidate genes for alcohol dependence: Animal studies.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 27, 880-888 (2003).</li><li>Singh, C. M., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+acute+ethanol-induced+behaviors+in+Drosophila.">Genetic control of acute ethanol-induced behaviors in Drosophila.</a> Alcohol Clin Exp Res. 24, 1127-1136 (2000).</li><li>Perreau-Lenz, S., Zghoul, T., de Fonseca, F. R., Spanagel, R., Bilbao, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+regulation+of+central+ethanol+sensitivity+by+the+mPer2+gene.">Circadian regulation of central ethanol sensitivity by the mPer2 gene.</a> Addiction Biology. 14, 253-259 (2009).</li><li>Brager, A. J., Prosser, R. A., Glass, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+and+acamprosate+modulation+of+elevated+ethanol+drinking+in+mPer2+clock+gene+mutant+mice.">Circadian and acamprosate modulation of elevated ethanol drinking in mPer2 clock gene mutant mice.</a> Chronobiol. Int. 28, 664-672 (2011).</li><li>Sinclair, J. D., Geller, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+consumption+by+rats+under+different+lighting+conditions.">Ethanol consumption by rats under different lighting conditions.</a> Science. 175, 1143-1144 (1972).</li><li>Danel, T., Jeanson, R., Touitou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+pattern+in+consumption+of+the+first+drink+of+the+day+in+alcohol-dependent+persons.">Temporal pattern in consumption of the first drink of the day in alcohol-dependent persons.</a> Chronobiol. Int. 20, 1093-1102 (2003).</li><li>Kapfhamer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taok2+controls+behavioral+response+to+ethanol+in+mice.">Taok2 controls behavioral response to ethanol in mice.</a> Genes, brain, and behavior. 12 (1), 87-97 (2012).</li><li>Lasek, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evolutionary+conserved+role+for+anaplastic+lymphoma+kinase+in+behavioral+responses+to+ethanol.">An evolutionary conserved role for anaplastic lymphoma kinase in behavioral responses to ethanol.</a> PLoS One. 6, 226-236 (2011).</li><li>Lasek, A. W., Giorgetti, F., Berger, K. H., Tayor, S., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lmo+genes+regulate+behavioral+responses+to+ethanol+in+Drosophila+melanogaster+and+the+mouse.">Lmo genes regulate behavioral responses to ethanol in Drosophila melanogaster and the mouse.</a> Alcohol Clin Exp Res. 35, 1600-1606 (2011).</li><li>Lyons, L. C., Roman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+short-term+memory+in+Drosophila.">Circadian modulation of short-term memory in Drosophila.</a> Learning &amp; Memory. 16, 19-27 (2009).</li><li>Hamblen-Coyle, M. J., Wheeler, D. A., Rutila, J. E., Rosbash, M., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+of+period-altered+circadian-rhythm+mutants+of+Drosophila+in+ligh-dark+cycles+(Diptera+Drosophilidae).">Behavior of period-altered circadian-rhythm mutants of Drosophila in ligh-dark cycles (Diptera Drosophilidae).</a> J. Insect Behav. 5, 417-446 (1992).</li><li>Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+behavior+associated+with+altered+homeostasis+and+photosensitivity+of+Drosophila+clock+mutants.">Reciprocal behavior associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants.</a> J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).</li><li>Power, J. M., Ringo, J. M., Dowse, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+period+mutations+and+light+on+the+activity+rhythms+of+Drosophila+melanogaster.">The effects of period mutations and light on the activity rhythms of Drosophila melanogaster.</a> Journal of Biological Rhythms. 10, 267-280 (1995).</li><li>Yoshii, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+cycles+drive+Drosophila+circadian+oscillation+in+constant+light+that+otherwise+induces+behavioural+arrhythmicity.">Temperature cycles drive Drosophila circadian oscillation in constant light that otherwise induces behavioural arrhythmicity.</a> Eur. J. Neurosci. 22, 1176-1184 (2005).</li><li>Berger, K. H., Heberlein, U., Moore, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+chronic:+two+distinct+forms+of+ethanol+tolerance+in+Drosophila.">Rapid and chronic: two distinct forms of ethanol tolerance in Drosophila.</a> Alcohol Clin Exp Res. 28, 1469-1480 (2004).</li><li>Scholz, H., Ramond, J., Singh, C. M., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+ethanol+tolerance+in+Drosophila.">Functional ethanol tolerance in Drosophila.</a> Neuron. 28, 261-271 (2000).</li><li>Kong, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol-regulated+genes+that+contribute+to+ethanol+sensitivity+and+rapid+tolerance+in+Drosophila.">Ethanol-regulated genes that contribute to ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila.</a> Alcohol Clin Exp Res. 34, 302-316 (2010).</li><li>Borycz, J., Borycz, J., Kubow, A., Lloyd, V., Meinertzhagen, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+ABC+transporter+mutants+white,+brown+and+scarlet+have+altered+contents+and+distribution+of+biogenic+amines+in+the+brain.">Drosophila ABC transporter mutants white, brown and scarlet have altered contents and distribution of biogenic amines in the brain.</a> J. Exp. Biol. 211, 3454-3466 (2008).</li><li>Sitaraman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+is+necessary+for+place+memory+in+Drosophila.">Serotonin is necessary for place memory in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5579-5584 (2008).</li><li>Bainton, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+modulates+acute+responses+to+cocaine,+nicotine+and+ethanol+in+Drosophila.">Dopamine modulates acute responses to cocaine, nicotine and ethanol in Drosophila.</a> Current Biology. 10, 187-194 (2000).</li><li>Kong, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pair+of+dopamine+neurons+target+the+D1-like+dopamine+receptor+DopR+in+the+central+complex+to+promote+ethanol-stimulated+locomotion+in+Drosophila.">A pair of dopamine neurons target the D1-like dopamine receptor DopR in the central complex to promote ethanol-stimulated locomotion in Drosophila.</a> Plos One. 5, (2010).</li><li>Xu, J., Kochanek, K. D., Murphy, S. L., Tejada-Vera, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Deaths: Final data for 2007. , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+National+Center+on+Addiction+and+Substance+Abuse.">The National Center on Addiction and Substance Abuse.</a> Shoveling up II: The impact of substance abuse on federal, state and local budgets. , (2009).</li><li>NIAAA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimated+economic+costs+of+alcohol+abuse+in+the+United+States.">Estimated economic costs of alcohol abuse in the United States.</a> , (1992).</li><li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+ethanol+consumption+in+Drosophila+models+features+of+addiction.">Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction.</a> Current Biology. 19, 2126-2132 (2009).</li><li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addiction-like+behavior+in+Drosophila.">Addiction-like behavior in Drosophila.</a> Communicative &amp; Integrative Biology. 3, 357-359 (2010).</li><li>Rodan, A. R., Rothenfluh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+behavioral+alcohol+responses+in+Drosophila.">The genetics of behavioral alcohol responses in Drosophila.</a> International Review of Neurobiology. 91, 25-51 (2010).</li><li>Boothroyd, C. E., Young, M. W., Pfaff, D. W., Kieffer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+Biophysical+Mechanisms+of+Arousal,+Alertness,+and+Attention.">Molecular and Biophysical Mechanisms of Arousal, Alertness, and Attention.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1129, 350-357 (2008).</li><li>Nitabach, M. N., Taghert, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+circadian+control+circuit.">Organization of the Drosophila circadian control circuit.</a> Current Biology. 18, 84-93 (2008).</li><li>Sheeba, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+melanogaster+circadian+pacemaker+circuit.">The Drosophila melanogaster circadian pacemaker circuit.</a> J. Genet. 87, 485-493 (2008).</li><li>Cohan, F. M., Graf, J. -. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Latitudinal+cline+in+Drosophila+melanogaster+for+knockdown+resistance+to+ethanol+fumes+and+for+rates+of+response+to+selection+for+further+resistance.">Latitudinal cline in Drosophila melanogaster for knockdown resistance to ethanol fumes and for rates of response to selection for further resistance.</a> Evolution. , 278-293 (1985).</li><li>Moore, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+intoxication+in+Drosophila:+Genetic+and+pharmacological+evidence+for+regulation+by+the+cAMP+signaling+pathway.">Ethanol intoxication in Drosophila: Genetic and pharmacological evidence for regulation by the cAMP signaling pathway.</a> Cell. 93, 997-1007 (1998).</li><li>Berger, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+sensitivity+and+tolerance+in+long-term+memory+mutants+of+Drosophila+melanogaster.">Ethanol sensitivity and tolerance in long-term memory mutants of Drosophila melanogaster.</a> Alcohol Clin Exp Res. 32, 895-908 (2008).</li><li>Pohl, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+Genes+Differentially+Affect+Tolerance+to+Ethanol.">Circadian Genes Differentially Affect Tolerance to Ethanol.</a> in Drosophila. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. , (2013).</li><li>Bhandari, P., Kendler, K. S., Bettinger, J. C., Davies, A. G., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assay+for+evoked+locomotor+behavior+in+Drosophila+reveals+a+role+for+integrins+in+ethanol+sensitivity+and+rapid+ethanol+tolerance.">An assay for evoked locomotor behavior in Drosophila reveals a role for integrins in ethanol sensitivity and rapid ethanol tolerance.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 33, 1794-1805 (2009).</li><li>Rothenfluh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+behavioral+responses+to+ethanol+are+regulated+by+alternate+RhoGAP18B+isoforms.">Distinct behavioral responses to ethanol are regulated by alternate RhoGAP18B isoforms.</a> Cell. 127, (1016).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Alkol ve toplum için alkolizm maliyetler de 29 insan ve ekonomik maliyetleri açısından, muazzam 30,31. Drosophila bir model olarak hızla bireylerin çok sayıda davranışsal tepkileri incelemek için hızlı ve çok yönlü bir sistem sunar ve gibi yaygın alkol 5,7,32-34 ve sirkadiyen araştırma 35-37 her ikisi için de kullanılmıştır. Burada, sirkadiyen koşullar altında yetişkin sinek alkol buharı kontrol uygulanması içi...

Drosophila melanogaster bu ilaç 2,3 insan yanıtlarına benzer olan alkol 1 Bifazik davranışsal cevapları göstermektedir. Ve sedasyon (tepki motor aktivite eksikliği tamamlamak: alkol, düşük konsantrasyonlarda ilk maruz sonra, motor koordinasyon eksikliği, postural kontrolün kaybı ve doğrulma reflekslerinin (lorr düzeltilmesi refleks kaybı) yerine, sergi artan lokomotor aktivite uçar mekanik uyarıya) alkol maruz 4-9 ilerledikçe. Endojen sirkadiyen saat 10,11 fareler, sıçanlar 12 gözlenen gibi alkol duyarlılık ve toksisite güçlü bir modülatörü olan ve 13, insanlarda. Drosophila araştırma son gelişmeler sirkadiyen saat akut alkol duyarlılığı değil alkol toleransı 1 modüle göstermiştir. Mutant çalışmaları ve uzaysal transjenik manipülasyon yoluyla Drosophila mevcut güçlü genetik yaklaşımlarve zamansal gen ekspresyon karmaşık davranışların altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmaları belirlenmesinde hızlı bir ilerleme sağlayan bir sistem sağlar. Bir araştırma aracı olarak Drosophila kullanımı hızla memelilere 14-16 tercüme edilebilir alkol nörobiyoloji anlamada maddi gelişmeler izin verdi. Sirkadiyen saat alkol duyarlılık modüle, üzerinden moleküler mekanizmalar anlaşılmasını kolaylaştırmak ve muntazam bir sirkadiyen zaman noktalarındaki davranışsal tepkileri, loş kırmızı ışık koşullarında kullanım için uygun olan bir alkol yönetim protokol ölçmek için gereklidir. Drosophila, alkol kronik maruz kalma için güvenilebilir akut riskler için buhar şeklinde alkol idare yoluyla gıda takviyesi ile tatbik edilebilir. Burada, Kayıp-of-doğrulma refleksini (lorr) 1 sirkadiyen modülasyonu değerlendirilmesi yanı sıra uygun bir alkol yönetim protokolü açıklamaksedasyon. Sabit bir sıcaklıkta, 12 saat LD döngüler ve daha sonra deney söz bağlı olarak 2-5 gün için, kontrollü ışık rejimi aktarılır: Sinekler 12 saat ile sürüklenir. Sinekler flybar olarak bilinen bir cihaz etanol buharına maruz kalmaktadır. Bu cihazda, hava kontrollü miktarda bir su ve alkol fokurdatıldı edilir; buharlar, daha sonra bir şişe yuva sinekler karıştırılır ve yönlendirilir. Sinekler dk her 5 refleksleri doğrulma veya sedasyon haline gelmiş görüntülemek için başarısız numarası için puanlanır. Her zaman noktası için lorr yüzdeler sirkadiyen zaman noktaları arasında ya da sinek suşları arasında hesaplanmış ve karşılaştırılmıştır. Davranış analizi seçenekleri ile birlikte Flybar alkol teslim kullanılarak alkol teslimat basitliği ve güvenilirliği karanlık koşulları altında gerçekleştirilmiştir sirkadiyen deneyler için önemli bir fayda sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="815">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Alcohol 190 proof</td>
			<td style="width:115px;">Various</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;"></td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Name of Material</td>
			<td style="width:115px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:296px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Aerator</td>
			<td style="width:115px;">Local pet store</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">We use Whisper 60</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Silicone tubing 1/8&#8221;</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">408060-0030</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">120&#176; Y Connector</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82017-256</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Quick disconnects</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">46600-048</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:285px;">Plastic tube clamps</td>
			<td style="width:115px;">Bell-art products</td>
			<td style="width:119px;">132250000</td>
			<td style="width:296px;">Either this or next</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Miniature Air Regulator</td>
			<td style="width:115px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">8727K11</td>
			<td style="width:296px;">Either this or previous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Miniature Air Regulator Mounting Bracket</td>
			<td style="width:115px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">9891K66</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Gilmont size 12 flow meter</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">29895-242</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Tool clips</td>
			<td style="width:115px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">1722A43</td>
			<td style="width:296px;">To hold flow meters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Vial</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89092-722</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Rubber stopper with two holes</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">59585-186</td>
			<td style="width:296px;">Fits in vials</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">5 mm Pyrex Glass tubes</td>
			<td style="width:115px;">Trikinetics</td>
			<td style="width:119px;">PGT5x65</td>
			<td style="width:296px;">Fits best in previous stopper.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Teflon tape</td>
			<td style="width:115px;">Hardware store</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">To achieve snug fit in stoppers if necessary</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Rubber stopper with two holes</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">59582-122</td>
			<td style="width:296px;">Fits our bottles</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Disposable glass pipets</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">53283-768</td>
			<td style="width:296px;">Cut to length and bend by heating</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Very fine nylon netting</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">Various</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">15 watt bulbs</td>
			<td style="width:115px;">Hardware store</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">Overhead red light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Photographic red safe light filters</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;">Overhead red light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:285px;">Mini Flashlights with red filters</td>
			<td style="width:115px;">Mag-light</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the flybar: administering alcohol to flies

Meyve sinekleri (Drosophila melanogaster) alkol araştırma ve sirkadiyen biyoloji hem de kurulu bir modeldir. Son zamanlarda, sirkadiyen saat alkol hassasiyeti değil, tolerans oluşumu modüle gösterdi. Burada ayrıntılı olarak bizim protokol açıklar. Alkol flybar kullanarak sinekler uygulanır. Bu kurulumda, doymuş alkol buharı grubu oranlarda nemlendirilmiş hava ile karıştırılır ve aynı anda dört tüplerde sinekler uygulanmıştır. Sinekler çoğaltır varyasyonu en aza indirmek için, standart koşullar altında yetiştirilir. Farklı genotipleri ya da muamele maddelerinin üç günlük sinekler, tercihen doğrudan karşılaştırma yapmak mümkün bulunan iki farklı zaman noktalarında (örneğin, CT 5 ve CT 17) sinekleri eşleştirerek, deneyler için kullanılmıştır. Deney sırasında, sinekler refleks (lorr) düzeltilmesi en kaybı sergileyen alkol buharın önceden belirlenmiş bir yüzde ve sinekler sayısı 1 saat boyunca maruz veya sed ediliration her 5 dakikada sayılır. Veriler üç farklı istatistiksel yaklaşımlar kullanılarak analiz edilebilir. İlk sineklerin% 50&#39;si doğrulma refleksini yitirmiş olan süreyi belirlemek ve önemli farklılıklar zaman noktaları arasında var olup olmadığını belirlemek için, bir varyans analizi (ANOVA) kullanmaktır. İkinci bir varyans analizi ve ardından bir dakikalık belirtilen sayıda sonra lorr göstermektedir yüzdesi sinekler belirlemektir. Son yöntem değişkenli istatistikleri kullanarak bütün zamanlar serisi analiz etmektir. Bu protokol, aynı zamanda genotipler arasında olmayan sirkadiyen deneyleri ya da karşılaştırma için kullanılabilir.

Bir Marker olarak% 50 lorr kullanarak Alkol Duyarlılık sirkadiyen modülasyonu. Gündüz alkol hassasiyeti sirkadiyen modülasyonu gösteren temsili bir örneği, Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. Lorr Canton-S DD, 2. gün boyunca altı zaman noktalarında ölçülmüştür ve% 50 lorr her bir zaman noktası için belirlendi. (: F 5,45 = 7.39, p &lt;0,001, N = 6-10 Nokta zaman başına ANOVA) Analizi günün önemli bir zaman etkisini göster...

Watch this Scientific Journal Video about The FlyBar: Administering Alcohol to Flies at JoVE.com

The FlyBar: Administering Alcohol to Flies

Drosophila alkole davranışsal yanıtların hücresel ve moleküler temellerini kesme için önemli bir model sistem olarak ortaya çıkmıştır. İşte biz kolayca başka deneylere uygulanabilir ve lisans araştırma için çok uygun bir sirkadiyen bağlamda alkol duyarlılık verilerinin toplanması için bir protokol mevcut.

Flybar: Sineklerin için Alkol yönetme

Fruit flies (Drosophila melanogaster) are an established model for both alcohol research and circadian biology. Recently, we showed that the circadian ...

the-flybar-administering-alcohol-to-flies

Research

JoVE Journal

Neuroscience

10.6K Görüntüleme.  Florida State University.  Drosophila alkole davranışsal yanıtların hücresel ve moleküler temellerini kesme için önemli bir model sistem olarak ortaya çıkmıştır. İşte biz kolayca başka deneylere uygulanabilir ve lisans araştırma için çok uygun bir sirkadiyen bağlamda alkol duyarlılık verilerinin toplanması için bir protokol mevcut. 

Video: The FlyBar: Administering Alcohol to Flies

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and relapse. Various types of behavioral activity are commonly utilized as measures of drug motivation in animals. However, a crucial component of drug abuse relapse in abstinent cocaine users is "drug craving", which is difficult to model in animals, as it often occurs in the absence of overt behaviors. Yet, it is possible that a class of ultrasonic vocalizations (USVs) in rats may be a useful marker for affective responses to drug administration, drug anticipation and even drug craving. Rats vocalize in ultrasonic frequencies that serve as a communicatory function and express subjective emotional states. Several studies have shown that different call frequency ranges are associated with negative and positive emotional states. For instance, high frequency calls ("50-kHz") are associated with positive affect, whereas low frequency calls ("22-kHz") represent a negative emotional state. This article describes a procedure to assess rat USVs associated with daily cocaine self-administration. For this procedure, we utilized standard single-lever operant chambers housed within sound-attenuating boxes for cocaine self-administration sessions and utilized ultrasonic microphones, multi-channel recording hardware and specialized software programs to detect and analyze USVs. USVs measurements reflect emotionality of rats before, during and after drug availability and can be correlated with commonly assessed drug self-administration behavioral data such lever responses, inter-response intervals and locomotor activity. Since USVs can be assessed during intervals prior to drug availability (e.g., anticipatory USVs) and during drug extinction trials, changes in affect associated with drug anticipation and drug abstinence can also be determined. In addition, determining USV changes over the course of short- and long-term drug exposure can provide a more detailed interpretation of drug exposure effects on affective functioning.

Drug self-administration and ultrasonic vocalizations (USV) are used as behavioral assessments in animal research, but rarely in combination. The purpose of this article is to describe the advantages of recording USVs during drug self-administration procedures to assess affective responses to drug experience.

Sıçanlar İlaç Öz-yönetim sırasında Ultrasonik seslenmelere Değerlendirilmesi

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Nörobilim

A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

Sinekler Etanol Hassasiyet Tedbir Basit Yolu

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of interest. This allows for examination of synaptic transmission under conditions where the extracellular and postsynaptic intracellular environments can be well controlled. A vibration-based technique without the use of proteases, known as vibrodissociation, is the most popular technique for mechanical isolation. A micropipette, with the tip fire-polished to the shape of a small ball, is placed into a brain slice made from a P1-P21 rodent. The micropipette is vibrated parallel to the slice surface and lowered through the slice thickness resulting in the liberation of isolated neurons. The isolated neurons are ready for study within a few minutes of vibrodissociation. This technique has advantages over the use of primary neuronal cultures, brain slices and enzymatically isolated neurons including: rapid production of viable, relatively mature neurons suitable for electrophysiological and imaging studies; superior control of the extracellular environment free from the influence of neighboring cells; suitability for well-controlled pharmacological experiments using rapid drug application and total cell superfusion; and improved space-clamp in whole-cell recordings relative to neurons in slice or cell culture preparations. This preparation can be used to examine synaptic physiology, pharmacology, modulation and plasticity. Real-time imaging of both pre- and postsynaptic elements in the living cells and boutons is also possible using vibrodissociated neurons. Characterization of the molecular constituents of pre- and postsynaptic elements can also be achieved with immunological and imaging-based approaches.

This report demonstrates a technique for mechanical isolation of individual viable neurons retaining attached presynaptic boutons. Vibrodissociated neurons have the advantages of rapid production, excellent pharmacological control and improved space-clamp without influence from neighboring cells. This method can be used for imaging of synaptic elements and patch-clamp recording.

Kemirgen Beyin Dilimleri Nöronlar Vibrodissociation Sinaptik İletim ve Görüntü Presinaptik Terminalleri Eğitim

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This is mostly due to the difficulty of microdissection of fetal brains and their sectioning for determination of apoptotic cells caused by prenatal exposure to alcohol. The experiments described here provide visualized techniques from mice breeding to the identification of cell death in fetal brain tissue. This study used C57BL/6 mice as the animal model for studying fetal alcohol exposure and the role of trophic peptide against alcohol-induced apoptosis. The breeding consists of a 2-hr matting window to determine the exact stage of embryonic age. An established fetal alcohol exposure model has been used in this study to determine the effects of prenatal alcohol exposure in fetal brains. This involves free access to alcohol or pair-fed liquid diets as the sole source of nutrients for the pregnant mice.
The techniques involving dissection of fetuses and microdissection of fetal brains are described carefully, since the latter can be challenging. Microdissection requires a stereomicroscope and ultra-fine forceps. Step-by-step procedures for dissecting the fetal brains are provided visually. The fetal brains are dissected from the base of the primordium olfactory bulb to the base of the metencephalon.
For investigating apoptosis, fetal brains are first embedded in gelatin using a peel-away mold to facilitate their sectioning with a vibratome apparatus. Fetal brains embedded and fixed in paraformaldehyde are easily sectioned, and the free floating sections can be mounted in superfrost plus slides for determination of apoptosis or cell death.
TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick End Labeling; TdT: terminal deoxynucleotidyl transferase) assay has been used to identify cell death or apoptotic cells. It is noteworthy that apoptosis and cell-mediated cytotoxicity are characterized by DNA fragmentation. Thus, the visualized TUNEL-positive cells are indicative of cell death or apoptotic cells.
The experimental designs here provide information about the use of an established liquid diet for studying the effects of alcohol and the role of neurotrophic peptides during pregnancy in fetal brains. This involves breeding and feeding pregnant mice, microdissecting fetal brains, and determining apoptosis. Together, these visual and textual techniques might be a source for investigating prenatal exposure of harmful agents in fetal brains.

The experimental designs proposed here focus on studying the effects of alcohol exposure in apoptosis and the application of neurotrophic peptide during pregnancy in fetal brain. A detailed description from the breeding to the collection of fetal brains is described. Techniques for determination of apoptosis are also described in detail.

Alkole bağlı C57BL Hamilelik sırasında Apoptoz / 6 Fare Karşı, Nörotrofik Peptit, ADNF-9 Etkilerinin Test için Deneysel Yöntemler

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This ...

Electroporation of the Hindbrain to Trace Axonal Trajectories and Synaptic Targets in the Chick Embryo

Electroporation of the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient for the expression of foreign genes into neuronal cells. In this manuscript we provide a method that demonstrates uniquely how to electroporate DNA into the avian hindbrain at E2.75 in order to specifically label a subset of neuronal progenitors, and how to follow their axonal projections and synaptic targets at much advanced stages of development, up to E14.5. We have utilized novel genetic tools including specific enhancer elements, Cre/Lox - based plasmids and the PiggyBac-mediated DNA transposition system to drive GFP expression in a subtype of hindbrain cells (the dorsal most subgroup of interneurons, dA1). Axonal trajectories and targets of dA1 axons are followed at early and late embryonic stages at various brainstem regions. This strategy contributes advanced techniques for targeting cells of interest in the embryonic hindbrain and for tracing circuit formation at multiple stages of development.

How neuronal networks are established in the embryonic brain is a fundamental question in developmental neurobiology. Here we combined an electroporation technique with novel genetic tools, such as Cre/Lox&#x2013;plasmids and PiggyBac-mediated DNA transposition system in the avian hindbrain to label dorsal interneurons and track their axonal projections and synaptic targets at various developmental stages.

Civciv Embriyo aksonal Yörüngeler ve Synaptic Hedefler Trace için Beyin elektroporasyon

Electroporation of  the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient  for the expression of foreign genes into ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety of brain disorders1,2. To better understand the mechanisms by which brain circuits react to an animal's experience requires the ability to monitor the experience-dependent molecular changes in a given set of neurons, over a prolonged period of time, in the live animal. While experience and associated neural activity is known to trigger gene expression changes in neurons1,2, most of the methods to detect such changes do not allow repeated observation of the same neurons over multiple days or do not have sufficient resolution to observe individual neurons3,4. Here, we describe a method that combines in vivo two-photon microscopy with a genetically encoded fluorescent reporter to track experience-dependent gene expression changes in individual cortical neurons over the course of day-to-day experience. 
One of the well-established experience-dependent genes is Activity-regulated cytoskeletal associated protein (Arc)5,6. The transcription of Arc is rapidly and highly induced by intensified neuronal activity3, and its protein product regulates the endocytosis of glutamate receptors and long-term synaptic plasticity7. The expression of Arc has been widely used as a molecular marker to map neuronal circuits involved in specific behaviors3. In most of those studies, Arc expression was detected by in situ hybridization or immunohistochemistry in fixed brain sections. Although those methods revealed that the expression of Arc was localized to a subset of excitatory neurons after behavioral experience, how the cellular patterns of Arc expression might change with multiple episodes of repeated or distinctive experiences over days was not investigated. 
In vivo two-photon microscopy offers a powerful way to examine experience-dependent cellular changes in the living brain8,9. To enable the examination of Arc expression in live neurons by two-photon microscopy, we previously generated a knock-in mouse line in which a GFP reporter is placed under the control of the endogenous Arc promoter10. This protocol describes the surgical preparations and imaging procedures for tracking experience-dependent Arc-GFP expression patterns in neuronal ensembles in the live animal. In this method, chronic cranial windows were first implanted in Arc-GFP mice over the cortical regions of interest. Those animals were then repeatedly imaged by two-photon microscopy after desired behavioral paradigms over the course of several days. This method may be generally applicable to animals carrying other fluorescent reporters of experience-dependent molecular changes4.

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Experience-dependent molecular changes in neurons are essential for the brain's ability to adapt in response to behavioral challenges. An in vivo two-photon imaging method is described here that allows the tracking of such molecular changes in individual cortical neurons through genetically encoded reporters.

Kortikal Nöronlar In Vivo İki foton Of Görüntüleme Deneyimi bağımlı Moleküler Değişiklikler

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

A Method to Make a Craniotomy on the Ventral Skull of Neonate Rodents

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain in adulthood and during development. Although most in vivo approaches use a craniotomy to study brain regions located on the dorsal side, brainstem regions such as the pons, located on the ventral side remain relatively understudied. The main goal of this protocol is to facilitate access to ventral brainstem structures so that they can be studied in vivo using electrophysiological and imaging methods. This approach allows study of structural changes in long-range axons, patterns of electrical activity in single and ensembles of cells, and changes in blood brain barrier permeability in neonate animals. Although this protocol has been used mostly to study the auditory brainstem in neonate rats, it can easily be adapted for studies in other rodent species such as neonate mice, adult rodents and other brainstem regions.

A surgical method is described to expose the ventral skull in neonate rats. Using this approach it is possible to open a craniotomy to perform acute electrophysiology and two-photon microscopy experiments in the brainstem of anesthetized pups.

Yenidoğan Kemirgenlerin Ventral Kafatası kranyotomi olun Bir Yöntem

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain ...

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in their etiology. The fruit fly, Drosophila melanogaster, is a powerful model for exploring molecular-genetic mechanisms underlying alcohol-related behaviors and therefore holds great promise for identifying and understanding the function of genes that influence AUD. The use of the Drosophila model for these types of studies depends on the availability of assays that reliably measure behavioral responses to ethanol. This report describes an assay suitable for assessing ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies. Ethanol sensitivity measured in this assay is influenced by the volume and concentration of ethanol used, a variety of previously reported genetic manipulations, and also the length of time the flies are housed without food immediately prior to testing. In contrast, ethanol sensitivity measured in this assay is not affected by the vigor of fly handling, sex of the flies, and supplementation of growth medium with antibiotics or live yeast. Three different methods for quantitating ethanol sensitivity are described, all leading to essentially indistinguishable ethanol sensitivity results. The scalable nature of this assay, combined with its overall simplicity to set-up and relatively low expense, make it suitable for small and large scale genetic analysis of ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila.

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Straightforward assays for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila facilitate the use of this model organism for investigating these important ethanol-related behaviors. Here, a relatively simple, scalable assay for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies is described.

Etanol sedasyon Hassasiyet ve hızlı Hoşgörü Ölçüm Ucuz bir, Ölçeklenebilir Davranış Deneyi<em&gt; Drosophila</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central nervous system. Changes in ENS function are a major cause of GI symptoms and disease and may contribute to GI symptoms reported in neuropsychiatric disorders including autism. It is well established that isolated colon segments generate spontaneous, rhythmic contractions known as Colonic Migrating Motor Complexes (CMMCs). A procedure to analyze the enteric neural regulation of CMMCs in ex vivo preparations of mouse colon is described. The colon is dissected from the animal and flushed to remove fecal content prior to being cannulated in an organ bath. Data is acquired via a video camera positioned above the organ bath and converted to high-resolution spatiotemporal maps via an in-house software package. Using this technique, baseline contractile patterns and pharmacological effects on ENS function in colon segments can be compared over 3-4 hr. In addition, propagation length and speed of CMMCs can be recorded as well as changes in gut diameter and contraction frequency. This technique is useful for characterizing gastrointestinal motility patterns in transgenic mouse models (and in other species including rat and guinea pig). In this way, pharmacologically induced changes in CMMCs are recorded in wild type mice and in the Neuroligin-3R451C mouse model of autism. Furthermore, this technique can be applied to other regions of the GI tract including the duodenum, jejunum and ileum and at different developmental ages in mice.

This article describes a video imaging technique and high-resolution spatiotemporal mapping to identify changes in the neural regulation of colonic motility in adult mice. Subtle effects on gastrointestinal (GI) function can be detected using this approach in isolated tissue preparations to advance our understanding of GI disease.

Video Görüntüleme ve Spatiotemporal Haritalar Fare Gastrointestinal Motilite Analiz

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...