Name: corneal epithelial abrasion with ocular burr as a model for cornea wound healing
Uploaded: 2018-07-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing at JoVE.com

우리는 Kaisa Ikkala 나중에 우리의 중앙 연구 질문에 구현 하는 동안 뿐만 아니라 그녀의 귀중 한 기술 지원 및 통찰력이 도움이 때이 방법을 현실화에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리 또한 실험실 동물 센터와 안 나 Meller 수의학 작업의 지침을 계획 그녀의 도움에 감사 하 고 싶습니다.

모든 실험 국가 동물 실험 보드에 의해 승인 됩니다.
1입니다. 준비
<ol><li>모든 솔루션을 준비 하 고 실내 온도에서 달리 명시 하지 않는 한 계속. Dispose 사용 재료 및 솔루션 폐기물 처리 규정을 따릅니다.</li>
	<li>사용 NMRI와 ICR outbred 주식, 4-12 주 세 중 성별 사이의. C57BL/6 긴장을 사용 하 여 단계 1.3.2에서에서 케 타 민-medetomidine 준비 방법을 따르십시오. 다른 단계에 대 한 1.3.3.-1.3.5에 설명 된 지침을 따릅니다.</li>
	<li>신선 하 고 작업을 시작 하기 전에 시간에 수의학을 준비 합니다. Carprofen 나중에 사용 될 것입니다, 그리고 따라서 그것은 시점에서 그것을 준비 하는 데 필요한.<ol>
<li>혼합 0.375 mL 마 취에 대 한 마 취 제-medetomidine의 솔루션을 준비, (재고 농도 50 mg/mL) 0.25 mL와 케 타 민 (Ketaminol 수 의사)의 (농도 재고 1 mg/mL) medetomidine (Cepetor 수 의사)의 살 균 0.9%의 1.25 mL을 추가 하 고 NaCl. 0.15 mL/20 g 마우스 무게 (7.5 mg/kg, 케 타 민 1 mg/kg, medetomidine)의 관리.</li>
		<li>0.375 mL를 혼합 C57BL/6 마우스에 마 취에 대 한 마 취 제-medetomidine의 더 묽 게 한 해결책을 준비, (농도 재고 50 mg/mL)의 0.25 mL와 케 타 민 (농도 재고 1 mg/mL) medetomidine의 살 균 0.9%의 2.5 mL을 추가 NaCl. 0.15 mL/20 g 마우스 무게 (3.75 mg/kg, 마 취 제 및 0.5 mg/kg, medetomidine)의 관리. 참고: 이것은 성인 C57BL/6 쥐에 대해서만 대체 단계입니다.</li>
		<li>진통에 대 한 buprenorfin을 준비 하려면 추가 0.1 mL (재고 농도 0.3 mg/mL) 살 균 0.9%의 1.9 ml buprenorfin의 NaCl. 0.2 mL/20 g 마우스 무게 (0.15 mg/kg)를 관리 합니다.</li>
		<li>마 취를 중단에 대 한 atipamezole를 준비 하려면 0.1 mL을 추가 (농도 재고 5 mg/mL) atipamezole 4.9 ml의 0.9%의 NaCl. 0.15 mL/20 g 마우스 무게 (0.75 mg/kg)를 관리 합니다.</li>
		<li>후 마 취 동안 진통 carprofen을 사용 합니다. 0.1 mL를 추가 (재고 농도 50 mg/mL) carprofen 4.9 ml의 0.9%의 NaCl. 0.15 mL/20 g 마우스 무게 (7.5 mg/kg)의 관리.</li>
	</ol>
</li>
	<li>형광 성 얼룩 솔루션 준비<ol>
<li>코발트 블루 빛 (그림 1) 아래 마모를 시각화에 대 한 형광 솔루션을 사용 합니다. 벌금 규모와 fluorescein 소금의 첫 번째 측정 10 밀리 그램으로 0.1 %fluorescein 솔루션을 준비 하 고 인산 염 버퍼 염 (PBS) 10 mL를 추가.</li>
		<li>빛에서 fluorescein 솔루션을 보호 하 고 통에 5 분 동안 흔들어. 참고: fluorescein 솔루션은 빛에 민감한; 빛에서 포함 하는 솔루션을 유지. 이 솔루션은 2-3 일 동안 + 4 ° C에 저장할 수 있습니다. 사용을 위해 안 약에 사용 되는 스 포 이트 병 fluorescein 솔루션 에서도 도움이 됩니다. 살 균 필터를 사용 하 여 솔루션 스포이드 병에 이동할 때.</li>
	</ol>
</li>
	<li>사용; 전후 눈 버 팁 청소 먼저 PBS 그리고 70 %EtOH. 동일한 작업 중 여러 마우스 한 마모를 만드는 경우 각 마우스 사이 청소 단계를 수행.</li>
	<li>(+37 ° C)에 온수 접시를 놓고 그것에 종이 타월 장소.</li>
</ol>2. 각 막 마포
주의: 사용 보호 의류 (장갑, 랩 코트) 때 쥐를 처리. 체중 관리 하는 약물의 양을 견적 하는 마우스.
<ol><li>한 손으로 scruffing 메서드를 사용 하 여 마우스23처리 하. 케 타 민-medetomidine 혼합물을 intraperitoneally 관리 (i.p.) 왼쪽 낮은 복 부. 마우스를 개별 케이지를 놓고 잠들 때까지 기다립니다. 이 일반적으로 5 분 미만 걸립니다. 그런 다음, 첫 번째 buprenorfin 그리고 atipamezole i.p. 주사를 통해 관리 합니다. 동일한 처리 기술을 사용 합니다. 참고: 일단 마 취를 부여 프로토콜 해야 하지 일시 정지 됩니다 언제 든 지.</li>
	<li>계속 하기 전에 온수 접시 따뜻한 인지 확인 합니다. 온수에 마 취 마우스를 놓습니다. 마 취의 레벨은 꼬리 반사 이다 결 석, 하지만 발가락 반사는 존재 하는 경우에 좋다. 꼬리와 손가락 또는 집게와 모든 발가락을 곤란 하 게 하 여 이러한 반사를 확인 합니다. 과도 한 무력을 사용 하지 마십시오. 마 취는 지난 20-25 분을 것입니다.</li>
	<li>한 마모 청소 눈 버를 사용 합니다. 회전 하는 마모를 확인 하는 것이 필수적입니다 진동 설정에 버의 베이스. 버 제대로 작동 하는 때, 손에 진동 느낌.<ol>
<li>별도로 손가락으로 눈 꺼 풀을 눌러 한 번에 한쪽 눈을 엽니다. 단단히 각 막에 버 터치 그리고 눈 표면에 악기 뿐만 아니라 뒤로 및 앞으로 옆으로 이동 합니다. 버 진동 수행 처음; 누르면, 동요 하거나 마십시오 눈물 각 막. 중앙 각 막에서 표면에 움직임 abrading 20는 상처를 유발 하기에 충분. 에 버를 들어올린 침식 될 각 막의 영역에 체류 하려고 하지 마십시오. 표준 크기의 마모를 취득 실천의 여러 라운드를 요구할 것 이다.</li>
	</ol>
 참고: 각 막 무 균 상태 얻을 수 있습니다 전에 마모 betadine 안과 솔루션을 사용 하 여.</li>
</ol>3. 이미지는 마모
<ol><li>코발트 블루 펜 빛 (그림 1)과 fluorescein 솔루션을 사용 하 여 침식된 영역을 밝게. 안구 표면 주변광에 무색 나타납니다. Fluorescein 신청 후 침식된 지역 fluoresces 녹색에서 빛 펜으로 눈을 조명 하는 때.<ol>
<li>필요한 경우, 2.3에서 마찬가지로 침식된 눈 열고 fluorescein 솔루션의 한 방울 스포이드 병에서 관리 합니다. PBS와 0.9%에 한 번 눈을 씻고 NaCl을 줄이기 위해는 fluorescein의 배경. 점 적기 병 또는 한 피 펫을 사용 하 여 세탁. 소프트 삭제 기능으로 멀리 액체를 발음 하 고 필요한 경우는 속눈썹을 청소. 과잉 액체는 일반적으로 눈물 운하의 개통에 가까운 눈, 비 강 국경에 수집합니다. 주의: 약간의 찰과상이 유도 될 수 있습니다으로 cleaining 동안 각 막을 만지지 마십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>각 막 찰과상의 사진을 찍을.<ol>
<li>각 이미지 세션 동안 비슷한 이미지를 얻으려면 코발트 블루 펜 빛과 SLR 카메라 (그림 2)에 대 한 꾸준한 첨부 파일 도구를 사용 합니다. 이 프로토콜은 (그림 2)를 반복 하기 쉬운 설치를 제공 합니다.<ol>
<li>펜 라이트와 카메라 연결할 테이블 램프 유연한 팔과 클램프 및 조정 가능한 카메라 팔은 클램프와 함께 각각 사용 합니다. 케이블 넥타이 펜 마우스 눈 바로 위에 위치 하 고 테이블 램프에 빛. 빛을 다르게 위치는 마포의 시각화를 변경 될 수 있습니다. 이러한 도구를 위치에 대 한 제안 그림 2에 설명 되어 있습니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>SLR 카메라를 사용 하 여 눈의 사진을 찍을. 방 조명에 원하는 거리와 위치와 초점 카메라 (1:12)에 동물을 놓습니다. 그 후, 코발트 블루 펜 라이트를 제외 하 고 다른 모든 빛을 닫습니다. 참고: 아래 펜 라이트 핸들을 테이프 또는 이미징 동안 모든 시간에 빛을 유지 하는 고무 밴드를 사용. 이 이미지가 흐릿한 경우 도움이 될. 동료와 함께 이미징 단계를 수행 하는 것이 쉽습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 각 막 마포 후 깨어난
<ol><li>첫 번째 buprenorfin 그리고 atipamezole i.p. 주사를 통해 관리 합니다. 2.1에서 동일한 처리 기술을 사용 합니다.</li>
	<li>항균, fucidin 산 눈 연 고 (Isathal) 수 분 마 취 후 눈 표면 박테리아에서 청결 한 유지 하 침식 및 침식 비 눈 방울을 놓습니다.</li>
	<li>마우스는 온수에 5 ~ 20 분에 일어나 것 이다, 마 취 후 웨이크 업 기간 동안 마우스를 관찰 합니다. 때 모바일, 개별 감 금 소에. 참고: 깨어 오래 걸리면, 온수 패드 장에 마우스를 배치 또는 전체 케이지 온수 접시에 놓고 마우스를 정기적으로 모니터링 합니다. 마 취 기운이 떨어지기, 마우스 일반적으로 착취 하 고 앞쪽 시체와 함께 위쪽으로 도달. 이 문제는 3-4 시간에 정상으로 반환 해야 하 고 공유 감 금 소에 다시 마우스를 배치할 수 있습니다.</li>
	<li>2.2 단계에서 마찬가지로 마모 후 이틀 연속에 carprofen i.p. 진통와 눈 연 고에 대 한 관리. 그리고 4.2입니다.</li>
</ol>5. 상처 치유 하는 동안 이미징
<ol><li>이 프로토콜에서 사용 시간 상처 폐쇄를 관찰 하는 마모 후 18 h 및 72 h 포인트.<ol>
<li>연속 영상에 대 한 2.2에 설명 된 대로 쥐를 anesthetize.</li>
		<li>3에 설명 된 대로 사진을 찍을.</li>
		<li>Atipamezole i.p.와 동물 그리고 4.3에 설명 된 대로 시동 기간을 모니터링. 참고: 그렇지 않으면 계속 속 행, 5.1.2 후 바로 마우스를 안락사. 안락사는 6.1에 설명 되어 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. 각 막 컬렉션 및 파라핀 포함
<ol><li>마지막 시간 이후에, 동물을 희생. CO2로 채울 수 있는 챔버에 마우스를 놓습니다. CO 챔버 공기를 채워2. 동물 모바일 이면 꼬리의 기지에서 단단히 당기 및 동시에 누르고 목 지역 경관 척추를 탈 구. 주의: 항상 로컬 동물 복지 본문의 지침을 따르십시오.</li>
	<li>눈의 해 부가 위 피부에 개방을 절단 하 여 안구 전체를 수집 합니다. 안구에서가 위를 배치 하 고 궤도에서 안구 팝업 눈 신경 절단. 집게를 사용 하 여 눈 오지 않는 경우 밖으로 쉽게.<ol>
<li>눈 안에 솔루션의 무료 침투 수 있도록 26 G 바늘, 망막에 눈의 뒷면에 구멍을 확인 합니다. 참고: 눈 건조, 대신, PBS에 장소는 프로토콜 계속까지 못하게 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PBS 2 mL 튜브에 눈알을 수집 합니다. 실험을 일시이 시점에서 하지 않습니다.</li>
	<li>PBS를 제거 하 고 4-5 시간 + 4 ° C에서 4 %paraformaldehyde (PFA)에서 눈알을 수정.</li>
	<li>고정된 안구 조직 카세트 조직 처리에 대 한 이동 합니다. 조직 처리 기계 및 다음 프로그램을 사용:<ol>
<li>PBS와 린스.</li>
		<li>실 온에서 70% 에탄올에 2 x 45 분을 품 어.</li>
		<li>실 온에서 94% 에탄올에 2 x 1 h를 품 어.</li>
		<li>실 온에서 절대 에타 놀에서 3 x 45 분을 품 어.</li>
		<li>크 실 렌, 실내 온도 37 ° c.에 마지막 자일 렌에서 3 x 1 h을 품 어</li>
		<li>파라핀 왁 스 60 ° c.에 있는 3 x 1 h을 품 어</li>
	</ol>
</li>
	<li>조직 처리, 후 박을 안구 조직 포함 블록을 사용 하 여 액체 파라핀 (+ 60 ° C). 그것은 옆으로 보고와 주변 테두리를 위쪽으로 향하게 되도록 블록 내 눈을 놓습니다. 5-10 분 동안 차가운 접시에 응고 블록을 보자.</li>
</ol>7. 각 막의 파라핀 섹션
<ol><li>기관의 또는 제조업체의 지침에 따라 단면에 대 한 톰을 준비 합니다. 주의: 날카로운 톰 블레이드를 처리할 때는 주의 해야 합니다.</li>
	<li>실내 온도 톰 옆에 초순 장소 한 물 탕 다른 초순 + 50 ° c 온수</li>
	<li>안구의 5 µ m 두꺼운 섹션을 확인 합니다. 참고: 렌즈 쉽게 구분 하는 동안 휴식. 이 방지 하려면 절단 표면을 각 시간 섹션의 새로운 행이 시작 촉촉한 티슈로 닦아냅니다. 수돗물을 사용 하 여 조직 축.</li>
	<li>실내 온도 물 목욕에 서로 옆에 섹션을 놓고 뜨거운 물 목욕 유리 슬라이드의 도움으로 이동 합니다. 모든 주름이 이완 될 때까지 뜨거운 물 목욕 및 섹션 될 매트에 섹션을 스트레칭.</li>
	<li>+37 ° C에 하룻밤 단면도 유리 슬라이드를 건조</li>
	<li>슬라이드 + 60 ° C에 온수 접시에 1 분간 유지 하 여 슬라이드에 연결할 섹션 이 후, 섹션 수 수 직접 얼룩, immunohistological 방법에 대 한 처리 또는 + 4 ° C에 저장</li>
</ol>

<ol>
	<li>Yi, X., Wang, Y., Yu, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+epithelial+tight+junctions+and+their+response+to+lipopolysaccharide+challenge.">Corneal epithelial tight junctions and their response to lipopolysaccharide challenge.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41 (13), 4093-4100 (2000).</li><li>Wang, Y., Chen, M., Wolosin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ZO-1+In+Corneal+Epithelium;+Stratal+Distribution+and+Synthesis+Induction+by+Outer+Cell+Removal.">ZO-1 In Corneal Epithelium; Stratal Distribution and Synthesis Induction by Outer Cell Removal.</a> Experimental Eye Research. 57 (3), 283-292 (1993).</li><li>Sugrue, S. P., Zieske, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ZO1+in+Corneal+Epithelium:+Association+to+the+Zonula+Occludens+and+Adherens+Junctions.">ZO1 in Corneal Epithelium: Association to the Zonula Occludens and Adherens Junctions.</a> Experimental Eye Research. 64 (1), 11-20 (1997).</li><li>Jackson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+eye-pads+on+healing+of+simple+corneal+abrasions.">Effect of eye-pads on healing of simple corneal abrasions.</a> British Medical Journal. 2 (5200), 713 (1960).</li><li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals.">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).</li><li>Kalha, S., Shrestha, B., Sanz Navarro, M., Jones, K. B., Klein, O. D., Michon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bmi1++Progenitor+Cell+Dynamics+in+Murine+Cornea+During+Homeostasis+and+Wound+Healing.">Bmi1+ Progenitor Cell Dynamics in Murine Cornea During Homeostasis and Wound Healing.</a> Stem Cells. , (2018).</li><li>Nasser, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal-Committed+Cells+Restore+the+Stem+Cell+Pool+and+Tissue+Boundary+following+Injury.">Corneal-Committed Cells Restore the Stem Cell Pool and Tissue Boundary following Injury.</a> Cell Reports. 22 (2), 323-331 (2018).</li><li>Kaplan, N., Fatima, A., Peng, H., Bryar, P. J., Lavker, R. M., Getsios, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphA2/Ephrin-A1+Signaling+Complexes+Restrict+Corneal+Epithelial+Cell+Migration.">EphA2/Ephrin-A1 Signaling Complexes Restrict Corneal Epithelial Cell Migration.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (2), 936 (2012).</li><li>Bai, J. -. Q., Qin, H. -. F., Zhao, S. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+mouse+model+of+grade+II+corneal+alkali+burn.">Research on mouse model of grade II corneal alkali burn.</a> International Journal of Ophthalmology. 9 (4), 487-490 (2016).</li><li>Chan, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+matrix+metalloproteinase-12+following+corneal+injury.">Protective effects of matrix metalloproteinase-12 following corneal injury.</a> Journal of Cell Science. 126, 3948-3960 (2013).</li><li>Byeseda, S. E., Burns, A. R., Dieffenbaugher, S., Rumbaut, R. E., Smith, C. W., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ICAM-1+is+necessary+for+epithelial+recruitment+of+gammadelta+T+cells+and+efficient+corneal+wound+healing.">ICAM-1 is necessary for epithelial recruitment of gammadelta T cells and efficient corneal wound healing.</a> American Journal of Pathology. 175 (2), 571-579 (2009).</li><li>Amitai-Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+Lineage+Tracing+of+Corneal+Cells+Using+Multi-color+Fluorescent+Reporter+Mice.">A Method for Lineage Tracing of Corneal Cells Using Multi-color Fluorescent Reporter Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (106), e53370 (2015).</li><li>Amitai-Lange, A., Altshuler, A., Bubley, J., Dbayat, N., Tiosano, B., Shalom-Feuerstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Stem+and+Progenitor+Cells+of+the+Murine+Corneal+Epithelium.">Lineage Tracing of Stem and Progenitor Cells of the Murine Corneal Epithelium.</a> Stem Cells. 33 (1), 230-239 (2015).</li><li>Blanco-Mezquita, J. T., Hutcheon, A. E. K., Stepp, M. A., Zieske, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;V&#946;6+Integrin+Promotes+Corneal+Wound+Healing.">&#945;V&#946;6 Integrin Promotes Corneal Wound Healing.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 52 (11), 8505 (2011).</li><li>Blanco-Mezquita, J. T., Hutcheon, A. E. K., Zieske, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Thrombospondin-1+in+Repair+of+Penetrating+Corneal+Wounds.">Role of Thrombospondin-1 in Repair of Penetrating Corneal Wounds.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54 (9), 6262 (2013).</li><li>Gipson, I. K., Kiorpes, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+sheet+movement:+Protein+and+glycoprotein+synthesis.">Epithelial sheet movement: Protein and glycoprotein synthesis.</a> Developmental Biology. 92 (1), 259-262 (1982).</li><li>Danjo, Y., Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+&amp;#34;purse+string&amp;#34;+filaments+are+anchored+by+E-cadherin-mediated+adherens+junctions+at+the+leading+edge+of+the+epithelial+wound,+providing+coordinated+cell+movement.">Actin &amp;#34;purse string&amp;#34; filaments are anchored by E-cadherin-mediated adherens junctions at the leading edge of the epithelial wound, providing coordinated cell movement.</a> Journal of Cell Science. 111, 3323-3332 (1998).</li><li>Lyu, J., Joo, C. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt-7a+up-regulates+matrix+metalloproteinase-12+expression+and+promotes+cell+proliferation+in+corneal+epithelial+cells+during+wound+healing.">Wnt-7a up-regulates matrix metalloproteinase-12 expression and promotes cell proliferation in corneal epithelial cells during wound healing.</a> Journal of Biological Chemistry. 280 (22), 21653-21660 (2005).</li><li>Nagata, M., Nakamura, T., Hata, Y., Yamaguchi, S., Kaku, T., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JBP485+promotes+corneal+epithelial+wound+healing.">JBP485 promotes corneal epithelial wound healing.</a> Science Reports. 5, 14776 (2015).</li><li>Stepp, M. A., Zhu, L., Cranfill, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+beta+4+integrin+expression+and+localization+in+vivo+in+response+to+corneal+epithelial+injury.">Changes in beta 4 integrin expression and localization in vivo in response to corneal epithelial injury.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 37 (8), 1593-1601 (1996).</li><li>Stepp, M. A., Zhu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+alpha+9+integrin+and+tenascin+during+epithelial+regeneration+after+debridement+in+the+cornea.">Upregulation of alpha 9 integrin and tenascin during epithelial regeneration after debridement in the cornea.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 45 (2), 189-201 (1997).</li><li>Pal-Ghosh, S., Tadvalkar, G., Jurjus, R. A., Zieske, J. D., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BALB/c+and+C57BL6+mouse+strains+vary+in+their+ability+to+heal+corneal+epithelial+debridement+wounds.">BALB/c and C57BL6 mouse strains vary in their ability to heal corneal epithelial debridement wounds.</a> Experimental Eye Research. 87 (5), 478-486 (2008).</li><li>. Lab Animal Research. Rodent Handling and Restraint Techniques Available from: <a target="_blank" href="https://www.jove.com/science-education/10221/rodent-handling-and-restraint-techniques">https://www.jove.com/science-education/10221/rodent-handling-and-restraint-techniques</a> (2018)</li><li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removal+of+the+basement+membrane+enhances+corneal+wound+healing.">Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing.</a> Experimental Eye Research. 93 (6), 927-936 (2011).</li><li>Suzuki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-matrix+and+cell-cell+interactions+during+corneal+epithelial+wound+healing.">Cell-matrix and cell-cell interactions during corneal epithelial wound healing.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 22 (2), 113-133 (2003).</li><li>Sato, Y., Seo, N., Kobayashi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+background+differences+between+FVB+and+C57BL/6+mice+affect+hypnotic+susceptibility+to+pentobarbital,+ketamine+and+nitrous+oxide,+but+not+isoflurane.">Genetic background differences between FVB and C57BL/6 mice affect hypnotic susceptibility to pentobarbital, ketamine and nitrous oxide, but not isoflurane.</a> Acta Anaesthesiologica Scandinavica. 50 (5), 553-556 (2006).</li><li>Pajoohesh-Ganji, A., Pal-Ghosh, S., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=K14+++Compound+niches+are+present+on+the+mouse+cornea+early+after+birth+and+expand+after+debridement+wounds.">K14 + Compound niches are present on the mouse cornea early after birth and expand after debridement wounds.</a> Developmental Dynamics. 245 (2), 132-143 (2016).</li><li>Boote, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Assessment+of+Ultrastructure+and+Light+Scatter+in+Mouse+Corneal+Debridement+Wounds.">Quantitative Assessment of Ultrastructure and Light Scatter in Mouse Corneal Debridement Wounds.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (6), 2786 (2012).</li><li>Pal-Ghosh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MMP9+cleavage+of+the+&#946;4+integrin+ectodomain+leads+to+recurrent+epithelial+erosions+in+mice.">MMP9 cleavage of the &#946;4 integrin ectodomain leads to recurrent epithelial erosions in mice.</a> Journal of Cell Science. 124 (Pt 15), 2666-2675 (2011).</li><li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Brown, M., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+the+study+of+recurrent+corneal+epithelial+erosions:+alpha9beta1+integrin+implicated+in+progression+of+the+disease.">A mouse model for the study of recurrent corneal epithelial erosions: alpha9beta1 integrin implicated in progression of the disease.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (6), 1775-1788 (2004).</li></ol>

저자는 공개 없다.

부상 메서드는 각 막 항상성 및 병 리의 다양 한 측면을 공부 인기 있는 도구입니다. 마모 모델 안과에 관련 문제를 해결 하기 위해 잘 제어 방법을 제공 합니다. 그러나, 특정 중요 한 포인트는 프로토콜에서 강조 가치가 있다. 특히, 수의학, 상처 치유 타임 라인, 그리고 결과 관한 설명 내용을 outbred NMRI와 ICR 주식와 함께 사용 하기 위해 최적화 된 하지만 쥐26의 변종 마다 다를 ?...

수많은 기관의 상피 층 부상에 노출 됩니다. 그러나, 그들은 또한 상처 치유를 통해 조직의 손실을 보상 하는 기능을 포함. 각 막 상처 치유를 공부 하는 우수한 모델을 제공 합니다. 그것은 눈의 외부 표면에 형성 하 고 민감한 눈 기계에 대 한 보호 계층을 제공 합니다. 따라서, 각 막 병원 균과 감수를 물리적 장벽 역할을 합니다. 그것은 3 개의 층;으로 구성 상피, 기질 및 피입니다. 각 막의 상피 각 막의 가장 바깥쪽 레이어 최대 수 있습니다. 상피 세포는 단단한 접속점1,2,3통해 서로 엄격 하 게 준수 하 여 각 막의 장벽 기능을 유지 합니다. acellular 막 지하실 막, 보 먼의 막 내 화 keratocytes를 포함 하는 광범위 한 기질에서 상피를 분리 합니다. 기질에서 내 피 세포 영양분, 물, 그리고 산소는 상위 레이어를 채널.
각 막 찰과상은 병원4에서 아주 일반적 이다. 각 막에 상해 다양 하지만 크게 다른 이물질, 스크래치, 또는 모래, 먼지와 같은 작은 입자에 의해 발생. 프로토콜 설명 여기 임상 관련 유형의 각 막 상피 마모를 재현 하는 겨냥 했다. 이렇게,이 프로토콜에는 임상 및 각 막 과학자 들은 자신의 연구에서 구현 하는 제어 및 정액 방법을 제공 한다. 우리 murine 각 막에 무디게 눈 버, Algerbrush II와 조직 abrading 하 여 비보에 부상 수리 분석을 수행 했습니다. 여기, 우리가 대상 중앙 각 막 상피에만 마모 손상 없이 장기의 다른 부분을 떠나. 따라서, 마이그레이션, 확산 및 감 별 법 vivo에서5세포 프로토콜은 다시 epithelialization 동안 연구 각 막 상피 세포 역학 또는 지하실 멤브레인에 이상적 이다. 최근,이 모델 murine 각 막에도 다시 부상6,7후 각 막 줄기 세포 틈새에서 차별화 된 각 막 상피 세포의 용량을 공개로 조상 세포 역학 분석에 사용 되었다. 마모, 다음 각 막의 정상적인 투명성과 인장 강도를 반환합니다. 흥미롭게도, 생체 외에서 연구 표시는 다시 epithelialization 증가 세포 확산8없이 발생 합니다. 이 프로토콜 murine 각 막에 치료 중단의 타임 라인을 설명 합니다. 방법은 따라서 치료 패턴 및 속도에 약물의 효과 테스트에 적용 됩니다.
각 막 상처 치유 연구에 대 한 광범위 하 게 사용 되었습니다. 그러나, 많은 연구는 상해의 다른 모델에 의존 했습니다. 9각 막 표면 필터 종이 없이 각 막 상해의 잘 설립 모델 수산화 나트륨 (NaOH)을 적용 하 여 수행 되는 알칼리 화상 이다. 알칼리 성 노출 영향을 각 막 상피, 뿐만 아니라 뿐만 아니라 결 막 및 기질9,10크고 확산 부상에서 결과입니다. 강한 알칼리 솔루션 각 막 궤 양, opacification, 및9neovascularization 유도 하기 위해 표시 되었습니다. 염증 세포 6 h 이내 일반적으로 기질을 침략 하 고 24 h11까지 거기 남아 있다. 따라서, 알칼리 성 부상 stromal 활성화에 관련 된 연구에서 권장 방법입니다. 또 다른 유형의 화학 상해 각 막9,10에 디 메 틸 sulfoxide (DMSO)를 적용 하 여 쏜 수 있습니다. 다른 일반적으로 사용 되 부상 모델 기질14,15의 상단 부분에 제한 되는 기질 및 keratectomy 상처를 통해 침투 incisional 상처 포함 됩니다. 이 메서드는 또한 stromal 상처 치유에 관한 질문에 대답 하는 데 유용. 다른 부상 모형에는 그들의 자신의 장점과 단점 있다. 마모, 또는 각 막 상피의 debridement는 비보 전 각16에 무디게 scalpels 또는 블레이드를 사용 하 여 처음 개발 되었다. 이 방법은 사용 vivo에서 마우스, 쥐, 토끼17,18,19,20,,2122에 나중에 되었습니다. 우리는 상피의 나머지 영향을 받지 떠나는, 상피의 선택된 된 영역만 제거 눈 버 (그림 1)를 사용 하 여. 이러한 방법으로, 그것이 정확 하 게 각 막의 다른 부분에 상피 제거 대상으로 가능 합니다. 또한, 마모 크기 fluorescein 얼룩과 평가 될 수 있다. 또한, 여기에 우리가 치료 기간 동안 마모 폐쇄를 따르십시오.
이 메서드는 몇 가지 장점이 포즈, i)를 포함 하 여 화학 부상으로 불가능 하다, 마모 사이트의 정확한 위치 ii) 마모 수행, 빠른 이며 iii) 그것은 비 침략 적. 그러나 여기, 우리는이 마우스 유전자 모델의 광대 한 배열 뿐만 아니라 쥐와 토끼, 인간의 각 막 장애를 연구 하는 데 사용 하는 일반적인 모델에 적용 될 수 있었다 모델로, outbred NMRI 마우스를 사용 하 여 메서드를 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>NMRI mouse</td><td>Envigo</td><td>275</td><td></td></tr><tr><td>0.9% NaCl</td><td></td><td></td><td>use sterile</td></tr><tr><td>Medetomidine</td><td>Vetmedic</td><td>Vnr087896</td><td>Market name: Cepetor Vet</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Intervet</td><td>Vnr511485</td><td>Market name: Ketaminol Vet</td></tr><tr><td>Buprenorfin</td><td>Invidior</td><td>3015248</td><td>Market name: Temgesic</td></tr><tr><td>Atipamezol</td><td>Orion Pharma</td><td>Vnr471953</td><td>Market name: Antisedan Vet</td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Norbrook</td><td>Vnr027579</td><td>Market name: Norocarp Vet</td></tr><tr><td>1% fucidin acid eye ointment</td><td>Dechra</td><td>Vnr080899</td><td>Market name: Isathal</td></tr><tr><td>Fluorescein salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6377</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline solution</td><td></td><td></td><td>PBS</td></tr><tr><td>Algerbrush ii ocular burr (0.5 mm tip)</td><td>Algerbrush</td><td>6.39768E+11</td><td></td></tr><tr><td>Cobalt Blue pen light</td><td>SP Services</td><td>DE/003</td><td></td></tr><tr><td>Hot plate</td><td>Kunz Instruments</td><td>2007-0217</td><td></td></tr><tr><td>Digital SLR camera</td><td>Nikon</td><td>D80</td><td></td></tr><tr><td>Adjustable camera arm and clamp</td><td>Neewer</td><td>10086132</td><td>Height 28 cm</td></tr><tr><td>Table lamp with a flexible arm and a clamp</td><td>Prisma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soft wipe</td><td>KimtechScience</td><td>7552</td><td></td></tr><tr><td>CO2 chamber</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissection toolset</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syringes</td><td>Beckton Dickinson</td><td>303172</td><td></td></tr><tr><td>26G needles</td><td>Beckton Dickinson</td><td>303800</td><td></td></tr><tr><td>2 mL Eppendorf tube</td><td>Sarstedt</td><td>689</td><td></td></tr><tr><td>Tissue casette</td><td>Sakura Finetech</td><td>4118F</td><td></td></tr><tr><td>Tissue processing machine ASP200S</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>VWR</td><td>UN1307</td><td></td></tr><tr><td>Paraffin wax</td><td>Millipore</td><td>K95523361</td><td></td></tr><tr><td>Tissue embedding mold 32 x 25 x 6 mm</td><td>Sakura Finetech</td><td>4123</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Microm</td><td>HM355</td><td></td></tr><tr><td>Water bath for sectioning</td><td>Orthex</td><td>60591</td><td></td></tr><tr><td>Water bath for sectioning</td><td>Leica</td><td>HI1210</td><td></td></tr><tr><td>Microtome blade</td><td>Feather</td><td>S35</td><td></td></tr><tr><td>Glass slide</td><td>Th.Geyer GmbH &amp;amp; Co.</td><td>7,695,019</td><td></td></tr><tr><td>Ultrapure water</td><td>Millipore</td><td>MPGP04001</td><td>MilliQ</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td>PFA</td></tr></tbody></table>

corneal epithelial abrasion with ocular burr as a model for cornea wound healing

Murine 각 막 상처 치유를 공부 하는 우수한 모델을 제공 합니다. 각 막, 눈의 가장 바깥쪽 레이어 이며 따라서 부상으로 첫 번째 방어 이다. 사실, 눈 부상 클리닉에서 발견의 가장 일반적인 유형은 각 막 마포 이다. 여기, 우리는 인 제거는 각 막 상피에 vivo에서 쥐를 마 취에 한 마모를 유발 하는 눈 버를 활용 합니다. 이 메서드는 타겟과 재현 상피 중단, 그대로 다른 지역에 대 한 수 있습니다. 또한, 우리 fluorescein 얼룩과 침식된 상피의 시각화를 설명 하 고 각 막이 침식된을 시각화 하는 방법에 구체적인 조언을 제공. 다음, 우리는 상처는 상처는 다시 epithelialized 때까지 0, 18, 및 72 h 마모, 후 치유의 타임 라인을 따른다. 상해 각 막의 상피 마모 모델 상피 세포 증식, 마이그레이션 및 각 막 층의 재 epithelialization에 대 한 연구에 이상적입니다. 그러나,이 방법은 아니다 상처 치유, 동안 stromal 활성화 연구 최적의 눈 버 stromal 세포 층에 침투 하지 않습니다 때문에. 이 메서드는 또한 임상 응용, 약물 효과의 예, 전 임상 시험에 적합.

이 프로토콜 마우스 각 막에 마포 상해를 입힐 수 있는 모델을 설명 하 고 따라 하 고 마모 후 치유 과정을 시각화 방법을 제시. 최근에, 우리는 상처 치유6동안 각 막 상피 조상 세포의 역할을 연구 하기 위해이 메서드를 고용. 설정된 도구를 사용 하 여 성공적인 마모 실험에 열쇠 이다. 우리는, 그리고 다른 찰과상6,,<sup ...

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Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

각 막에 대 한 모델로 눈 버와 각 막 상피 마모 상처 치유

이 프로토콜, 마우스의 눈 표면에 마모를 및 상처 치유 과정 그 후에 따라 메서드를 설명 합니다. 프로토콜은 부분적으로 anaesthetized 쥐에서 눈의 표면 상피를 제거 하는 눈 버 합니다.

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

corneal-epithelial-abrasion-with-ocular-burr-as-model-for-cornea

Research

JoVE Journal

Medicine

20.3K 조회수.  University of Helsinki. 이 프로토콜, 마우스의 눈 표면에 마모를 및 상처 치유 과정 그 후에 따라 메서드를 설명 합니다. 프로토콜은 부분적으로 anaesthetized 쥐에서 눈의 표면 상피를 제거 하는 눈 버 합니다.

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Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to follow and manipulate the wound response ex vivo in an environment that closely mimics that of epithelial tissue injury in vivo. This issue was addressed by creating a clinically relevant epithelial ex vivo injury-repair model based on cataract surgery. In this culture model, the response of the lens epithelium to wounding can be followed live in the cells&#8217; native microenvironment, and the molecular mediators of wound repair easily manipulated during the repair process. To prepare the cultures, lenses are removed from the eye and a small incision is made in the anterior of the lens from which the inner mass of lens fiber cells is removed. This procedure creates a circular wound on the posterior lens capsule, the thick basement membrane that surrounds the lens. This wound area where the fiber cells were attached is located just adjacent to a continuous monolayer of lens epithelial cells that remains linked to the lens capsule during the surgical procedure. The wounded epithelium, the cell type from which fiber cells are derived during development, responds to the injury of fiber cell removal by moving collectively across the wound area, led by a population of vimentin-rich repair cells whose mesenchymal progenitors are endogenous to the lens1. These properties are typical of a normal epithelial wound healing response. In this model, as in vivo, wound repair is dependent on signals supplied by the endogenous environment that is uniquely maintained in this ex vivo culture system, providing an ideal opportunity for discovery of the mechanisms that regulate repair of an epithelium following wounding.

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Described here is the establishment of a clinically relevant ex vivo mock cataract surgery model that can be used to investigate mechanisms of the injury response of epithelial tissues within their native microenvironment.

임상 적으로 구축<em&gt; 전의 VIVO</em기본 미세 환경에서 상피 상처 복구 조사를위한&gt; 모의 백내장 수술 모델

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

연구

발생학

Investigating Scarless Tissue Regeneration in Embryonic Wounded Chick Corneas

Chick embryonic corneal wounds display a remarkable capacity to fully and rapidly regenerate, whereas adult wounded corneas experience a loss of transparency due to fibrotic scarring. The tissue integrity of injured embryonic corneas is intrinsically restored with no detectable scar formation. Given its accessibility and ease of manipulation, the chick embryo is an ideal model for studying scarless corneal wound repair. This protocol demonstrates the different steps involved in wounding the cornea of an embryonic chick in ovo. First, eggs are windowed at early embryonic ages to access the eye. Second, a series of in ovo physical manipulations to the extraembryonic membranes are conducted to ensure access to the eye is maintained through later stages of development, corresponding to when the three cellular layers of the cornea are formed. Third, linear cornea wounds that penetrate the outer epithelial layer and the anterior stroma are made using a microsurgical knife. The regeneration process or fully restored corneas can be analyzed for regenerative potential using various cellular and molecular techniques following the wounding procedure. Studies to date using this model have revealed that wounded embryonic corneas display activation of keratocyte differentiation, undergo coordinated remodeling of ECM proteins to their native three-dimensional macrostructure, and become adequately re-innervated by corneal sensory nerves. In the future, the potential impact of endogenous or exogenous factors on the regenerative process could be analyzed in healing corneas by using developmental biology techniques, such as tissue grafting, electroporation, retroviral infection, or bead implantation. The current strategy identifies the embryonic chick as a crucial experimental paradigm for elucidating the molecular and cellular factors coordinating scarless corneal wound healing.

The present protocol demonstrates the different steps involved in wounding the cornea of an embryonic chick in ovo. The regenerating or fully restored corneas can be analyzed for regenerative potential using various cellular and molecular techniques following the wounding procedure.&#160;

배아 상처 병아리 각막의 흉터없는 조직 재생 조사

Chick embryonic corneal wounds display a remarkable capacity to fully and rapidly regenerate, whereas adult wounded corneas experience a loss of ...

A Simple Mechanical Procedure to Create Limbal Stem Cell Deficiency in Mouse

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with conjunctiva. Patients suffer from recurrent corneal defects, pain, inflammation, and loss of vision.
Previously, a murine model of LSCD was described and compared to two other models. The goal was to produce a consistent mouse model of LSCD that both mimics the phenotype in humans and lasts long enough to make it possible to study the disease pathophysiology and to evaluate new treatments. Here, the technique is described in more detail.
A motorized tool with a rotating burr has been designed to remove the rust rings from the corneal surface or to smooth the pterygium bed in patients. It is a suitable device to create the desired LSCD model. It is a readily available, easy-to-use tool with a fine tip that makes it appropriate for working on small eyes, as in mice. Its application prevents unnecessary trauma to the eye and it does not result in unwanted injuries, as often is the case with chemical injury models. As opposed to a blunt scraper, it removes the epithelium with the basement membrane. In this protocol, the limbal area was abraded two times, and then the whole corneal epithelium was shaved from limbus to limbus. To avoid stroma injury, care was taken not to brush the corneal surface once the epithelium was already removed.

The following article provides an easy, reproducible technique to effectively create a sustainable mouse model of limbal stem cell deficiency (LSCD). This animal model is useful in testing and comparing the efficacy of treatments for limbal stem cell diseases.

간단한 기계 절차 마우스에서 윤부 줄기 세포 결핍을 만드는 방법

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with ...

의학

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two dimensional (2D) and three dimensional (3D) culture has generated a wealth of information not only about corneal biology but also about wound healing, myofibroblast biology, and scarring in general. The goal of the protocol is an assay system for quantifying myofibroblast development, which characterizes scarring. We demonstrate a corneal organ culture ex vivo model using pig eyes. In this anterior keratectomy wound, corneas still in the globe are wounded with a circular blade called a trephine. A plug of approximately 1/3 of the anterior cornea is removed including the epithelium, the basement membrane, and the anterior part of the stroma. After wounding, corneas are cut from the globe, mounted on a collagen/agar base, and cultured for two weeks in supplemented-serum free medium with stabilized vitamin C to augment cell proliferation and extracellular matrix secretion by resident fibroblasts. Activation of myofibroblasts in the anterior stroma is evident in the healed cornea. This model can be used to assay wound closure, the development of myofibroblasts and fibrotic markers, and for toxicology studies. In addition, the effects of small molecule inhibitors as well as lipid-mediated siRNA transfection for gene knockdown can be tested in this system.

A protocol for an ex vivo corneal organ culture model useful for wound healing studies is described. This model system can be used to assess the effects of agents to promote regenerative healing or drug toxicity in an organized 3D multicellular environment.

Ex Vivo 막 기관 문화 모델에 대 한 상처 치유 연구

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its transparency. However, due to its external position, the cornea is highly susceptible to a wide variety of injuries that can lead to the loss of corneal transparency and eventual blindness. Efficient corneal wound healing in response to these injuries is pivotal for maintaining corneal homeostasis and preservation of corneal transparency and refractive capabilities. In events of compromised corneal wound healing, the cornea becomes vulnerable to infections, ulcerations, and scarring. Given the fundamental importance of corneal wound healing to the preservation of corneal transparency and vision, a better understanding of the normal corneal wound healing process is a prerequisite to understanding impaired corneal wound healing associated with infection and disease. Toward this goal, murine models of corneal wounding have proven useful in furthering our understanding of the corneal wound healing mechanisms operating under normal physiological conditions. Here, a protocol for creating a central corneal epithelial abrasion in mouse using a trephine and a blunt golf club spud is described. In this model, a 2 mm diameter circular trephine, centered over the cornea, is used to demarcate the wound area. The golf club spud is used with care to debride the epithelium and create a circular wound without damaging the corneal epithelial basement membrane. The resulting inflammatory response proceeds as a well-characterized cascade of cellular and molecular events that are critical for efficient wound healing. This simple corneal wound healing model is highly reproducible and well-published and is now being used to evaluate compromised corneal wound healing in the context of disease.

Here, a protocol for creating a central corneal epithelial abrasion wound in the mouse using a trephine and a blunt golf club spud is described. This corneal wound healing model is highly reproducible and is now being used to evaluate compromised corneal wound healing in the context of diseases.

각막 상처 치유를 연구하기위한 상피 마모 모델

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its ...

Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium

Corneal injury to the ocular surface, including chemical burn and trauma, may cause severe scarring, symblepharon, corneal limbal stem cells deficiency, and result in a large, persistent corneal epithelial defect. Epithelial defect with the following corneal opacity and peripheral neovascularization result in irreversible visual impairment and hinder future management, especially keratoplasty. Since the animal model can be used as an effective drug development platform, models of corneal injury to the mouse and alkali burn to rabbit corneal epithelium are developed here. New Zealand white rabbit is used in the alkali burn model. Different concentrations of sodium hydroxide can be applied onto the central circular area of the cornea for 30 s under intramuscular and topical anesthesia. After copious isotonic normal saline irrigation, residual loose corneal epithelium was removed with corneal burr deep down to the Bowman's layer within this circular area. Wound healing was documented by fluorescein staining under Cobalt blue light. C57BL/6 mice were used in the traumatic model of murine corneal epithelium. The murine central cornea was marked using a skin punch, 2 mm in diameter, and then debrided by a corneal rust ring remover with a 0.5 mm burr under a stereomicroscope. These models can be prospectively used to validate the therapeutic effect of eye drops or mixed agents such as stem cells, which potentially facilitate corneal epithelial regeneration. By observing corneal opacity, peripheral neovascularization, and conjunctival congestion with stereomicroscope and imaging software, therapeutic effects in these animal models can be monitored.

Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium

Here, animal models based on mouse and rabbit are developed for mechanical and chemical injury of corneal epithelium to screen new therapeutics and the underlying mechanism.

각막 상피의 기계적 및 화학적 손상에 대한 Ex Vivo 및 In Vivo 동물 모델

Corneal injury to the ocular surface, including chemical burn and trauma, may cause severe scarring, symblepharon, corneal limbal stem cells deficiency, ...

축삭 재생 연구를 위한 각막 감각 섬유 손상 프로토콜

Three Strategies to Induce Neurotrophic Keratitis and Nerve Regeneration in Murine Cornea

The cornea is a transparent tissue that covers the eye and is crucial for clear vision. It is the most innervated tissue in the body. This innervation provides sensation and trophic function to the eye and contributes to preserving corneal integrity. The pathological disruption of this innervation is termed neurotrophic keratitis. This can be triggered by injury to the eye, surgery, or disease. In this study, we propose three different protocols for inflicting damage on the innervation in ways that recapitulate the three types of cases generally encountered in the clinic.
The first method consists in making an abrasion of the epithelium with an ophthalmic burr. This involves the removal of the epithelial layer, the free nerve endings, and the subbasal plexus in a manner similar to the photorefractive keratectomy surgery performed in the clinic. The second method&#160;only targets the innervation by sectioning it at the periphery with a biopsy punch, maintaining the integrity of the epithelium. This method is similar to the first steps of lamellar keratoplasty and leads to a degeneration of the innervation followed by regrowth of the axons in the central cornea. The last method damages the innervation of a transgenic mouse model using a multiphoton microscope, which specifically localizes the site of cauterization of the fluorescent nerve fibers. This method inflicts the same damage as photokeratitis, an overexposure to UV light.
This study describes different options for investigating the physiopathology of corneal innervation, particularly the degeneration and regeneration of the axons. Promoting regeneration is crucial for avoiding such complications as epithelium defects or even perforation of the cornea. The proposed models can help test new pharmacological molecules or gene therapy that enhance nerve regeneration and limit disease progression.

저자 스포트라이트: 혁신적인 모델을 통한 각막 신경 분포 연구의 발전 

Here, we propose three different methods of damaging the sensory fibres innervating the cornea. These methods facilitate the study of axon regeneration in mice. These three methods, which are adaptable to other animal models, are ideal for the study of corneal innervation physiology and regeneration.

쥐 각막의 신경 영양성 각막염 및 신경 재생을 유도하는 세 가지 전략

The cornea is a transparent tissue that covers the eye and is crucial for clear vision. It is the most innervated tissue in the body. This innervation ...

신경과학

Mongolian Gerbils as an Animal Model of Wound Healing

Corneal wound healing studies have been conducted for a long time and have helped to reduce suffering and develop treatments that contribute to improving patients' eye health. Historically, corneal healing has been studied in rodents such as mice and rats, but these models might not completely mimic human disorders. However, information on other rodents such as Mongolian gerbils (Meriones unguiculatus) is scant in corneal research.
Here, we describe a technique to develop a novel animal model for studying corneal healing after photorefractive keratectomy. Due to the limited literature available on the cornea of M. unguiculatus, we also describe a histological analysis of the normal cornea. These research techniques can also be employed in the study of eye diseases because of the similarity between the corneas of Mongolian gerbils and humans in terms of genetics, anatomy, and physiology.

This article describes a new animal model developed to study the anatomy and histology of the cornea and its healing processes. This new animal model uses the Mongolian gerbil, which has a cornea with many similarities to the human cornea.

상처 치유의 동물 모델로서의 몽골 저빌

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