패혈증은 다기관 실패와 죽음으로 이끌어 낼 수 있습니다. 내독신은 그람 음성 박테리아의 기본 구성 요소입니다. 엔도독신의 높은 순환 수준은 더 가혹한 질병을 개발하기 위하여 고위험에 환자를 확인할 수 있습니다.
내독신 활동 분석체는 전신 내독소혈증의 간단하고 빠르며 신뢰할 수 있는 바이오마커로 사용할 수 있습니다. 이 독소의 조기 발견은 패혈증 쇼크로 환자를 치료하는 임상의를 도울 수 있습니다. 패혈증 쇼크를 가진 환자에서, 급속하게 진화하는 조건의 초기 확인은 잠재적으로 더 나은 결과로 이끌어 내는 더 빠르고 집중적인 생활 지원 치료를 자극할 수 있습니다.
이 절차를 보여주는 것은 리사 마티아센, 우리의 연구 그룹과 협력 분자 생물학자가 될 것입니다. 이 절차를 시작하려면 EA 테스트 키트를 설정하고 5 가지 종류의 튜브를 풀수 있습니다. 튜브 넘버원, 대조관튜브를 사용하여 특정 항체가 없는 경우 환자의 호중구의 비특이적 산화 버스트의 기저 활성을 측정한다.
LPS 항체 복합체에 반응하여 산화 버스트를 측정하기 위해 튜브 번호 2, 샘플 튜브를 사용합니다. 튜브 번호 3, 맥스 튜브를 사용하여 내독소의 과잉에 대한 응답으로 환자의 호중구의 최대 산화 파열을 측정합니다. 외인성 내독소의 원천으로서 튜브 번호 4, LPS 튜브를 사용합니다.
그리고 혈액 저장을 위해 튜브 번호 5, 알리 쿼트 튜브를 사용합니다. EDTA 항응고제가 함유된 멸균 관에 환자 혈액 샘플을 수집하고 EA 검사를 실행하기 전에 실온에서 저장합니다. 테스트를 시작하기 전에 케밀루미노미터와 인큐베이터 셰이커를 켜고 인큐베이터를 섭씨 37도로 데우십시오.
먼저 튜브 랙에 사용할 EA 튜브를 배치하고 캡을 제거합니다. 빗피펫을 사용하여 EA 시약1밀리리터를 튜브 1번, 2번, 3번으로 튜브 의 측면을 피펫으로 옮겨 보냅니다. 혈액 수집 튜브를 20번 부드럽게 반전하여 환자의 혈액 샘플을 혼합합니다.
이어서, 피펫 0.5 밀리리터의 환자 혈액은 튜브 번호 4및 튜브 번호 5로. 10초 동안 소용돌이 튜브 번호 4. 모든 EA 테스트 튜브가 있는 튜브 랙을 인큐베이터 셰이커에 넣습니다.
뚜껑을 닫고 섭씨 37도에서 10분 동안 배양합니다. 그 후 인큐베이터 뚜껑을 열고 셰이커에서 튜브 랙을 제거합니다. 소용돌이 튜브 번호 5.
멸균 팁을 사용하여, 피펫 40 마이크로 리터의 혈액은 튜브 번호 1과 2번으로 중복됩니다. 소용돌이 튜브 번호 4. 동일한 파이펫 팁을 사용하여 튜브 번호 4에서 튜브 번호 3로 혈액 40 마이크로리터를 중복으로 옮겨 냅니다.
6개의 최종 시험관을 하나씩 소용돌이시다. 튜브 랙을 인큐베이팅 셰이커에 다시 넣고 뚜껑을 닫습니다. 셰이커를 100rpm으로 설정하고 모션을 14분 동안 시작합니다.
EA 라벨칩카드를 케밀루미노미터에 삽입하고 시작을 누릅니다. 14분 잠복 후, 케밀루미노미터에 표시된 지침을 따릅니다. 각 튜브를 10초 동안 부드럽게 소용돌이치게 한 후 케밀루미노미터의 샘플 홀더에 놓습니다.
샘플 서랍을 열고 튜브 넘버 원을 샘플 홀더에 넣습니다. 그런 다음 샘플 서랍을 닫고 상대 광 단위 판독을 기다립니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 튜브 2개와 3개 및 모든 중복에 대해 이 읽기 프로세스를 반복합니다.
모든 튜브가 처리되면 EA 결과가 자동으로 계산되고 인쇄됩니다. 시험해야 하는 각 혈액 샘플에 대한 전체 분석 과정을 반복합니다. EA 분석 키트와 부품을 원래 밀봉 된 패키지에 보관하여 섭씨 2 ~25도 사이의 온도에서 보관하십시오.
이 연구에서는, 내독신 활동 분석은 중증 아픈 환자에서 전체 혈액 내독혈증을 검출하기 위하여 수행됩니다. 0.40 미만의 EA 단위의 EA 값은 낮은 내독소 활성 수준을 나타내며, 이는 중증 질환 상태로 진행될 위험이 낮다는 것을 나타낸다. 0.40과 0.59 EA 단위 사이의 결과는 중증 패혈증 및 패혈증 쇼크의 발달을 위한 중간 리스크를 나타내는 중간 내독신 활동 수준을 나타냅니다.
0.60 EA 단위와 동일하거나 더 큰 결과는 패혈증 쇼크 및 가난한 참을성 있는 결과를 위한 고리스크를 나타내는 높은 내독소 활동 수준을 나타냅니다. 튜브 번호 4와 5에서 혈액은 올바른 시험관과 혼합해야합니다. 프로토콜에 표시된 올바른 순서를 따르려면 추가주의해야 합니다.
모든 튜브는 중복으로 실행되어 잠재적으로이 단계에서 실수를 초래할 수 있습니다. 도입 후, EA 분석은 전신 저구주입 환자의 위험 계층화를 위한 바이오마커로 제안되었습니다. 또한, 고급 혈청화 치료 전략에 대한 환자를 선별하는 스크리닝 테스트로 연구되고 있다.
