레트로 페리톤 림프절 전이와 이 VX2 자궁내막암 모델은 이미지 유도 수술을 위한 기술을 연구하는 데 사용될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 인간 자궁 내막암의 패턴을 모방 일관된 전이성 확산을 생성한다는 것입니다. 전반적으로 이것은 간단한 기술입니다.
그러나 모델을 만들기 전에 봉합을 연습하면 프로세스를 더 쉽게 만드는 데 도움이 됩니다. 이 기술의 시각적 데모는 모델 설립에 관련된 수술 단계를 입증하는 데 도움이되기 때문에 중요합니다. 할리 찬과 나는 릴리 딩, 우리의 실험실에서 기술자가 될 것입니다 와 절차를 시연.
주입을 위해 시험관외 전파 VX2 세포에서 준비하려면 VX2 세포의 냉동 바이알을 섭씨 37도 또는 수조로 1분 동안 따뜻하게 데우는 것으로 시작합니다. 세포가 해동되면 배양 배지의 10 밀리리터를 포함하는 15 밀리리터 튜브에서 세포 현탁액을 당깁니다. 원심분리에 의한 세포 침전.
중간 크기의 9 밀리리터에서 펠릿을 다시 중단합니다. 세포를 큰 배양소로 옮기면 37°C에서 잠양을 위해 몸을 흔들어 서 매일 세포를 확인하여 가벼운 현미경 검사법에 의한 합류를 확인합니다. 세포가 80%의 합류에 도달하면 플라스크에 0.2%의 트립신 3밀리리터를 추가하고 세포를 세포 배양 인큐베이터로 5분 동안 되돌려 보세요.
세포가 분리되면, 원심분리에 의해 세포를 수집하기 위해 원적 튜브로 세포 현탁액을 전달한다. 세척당 9밀리리터의 신선한 PBS로 셀 펠릿을 세 번 씻으십시오. 마지막 세척 후, 얼음에 새로운 원문 튜브에서 PBS 농도의 밀리리터 당 7 개의 VX2 세포에 4 회 10으로 희석하기 전에 계산에 대한 신선한 PBS에서 세포를 다시 중단합니다.
생체 전파 VX2 세포주입을 위해 준비하기 위해 1센티미터 VX2 종양 블록으로 냉동된 해동을 하고 메스를 사용하여 배양판에서 조직 샘플을 다진다. 조직 조각을 70 마이크로미터 필터로 옮기고 행크의 균형 잡힌 염용액(HBSS)의 최대 1밀리리터의 작은 알리쿼트를 추가하여 모든 세포가 여과기를 통과하도록 합니다. 그런 다음 세포 현탁액을 얼음에 멸균 튜브에 있는 HBSS 농도의 밀리리터 당 7개의 VX2 세포로 10번 으로 희석하기 전에 세포를 계산한다.
자극에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 수술대에 등색 위치에 마취 여성 흰색 뉴질랜드 토끼를 배치합니다. 골반과 복부에 머리를 잘라, 노출 된 피부를 청소하는 세 단계 수술 피부 준비를 사용합니다. 수술용 모자와 얼굴 마스크를 착용하고 소독제로 손을 문지르며 멸균 가운과 멸균 수술 용 장갑을 착용하십시오.
음모 뼈의 상단을 랜드 마크와 하복부 커튼으로 수술 필드를 드레이프, 노출 하 복부의 5 5 센티미터 영역을 떠나. 다음으로, 11번 메스 블레이드를 사용하여 피부와 피하 조직을 통해 심근증 에 대한 2.5센티미터 절개 1센티미터 두개골을 만듭니다. 정류 근막을 절개하고 정류 근육을 측면으로 해부하여 기본 복막이 노출됩니다.
밑면이 창자 또는 다른 복부 장기가 명확하지 않다는 것을 확인하십시오. 음낭을 확인하기 위해 회리동맥에 급격히 들어가 장갑을 낀 손가락을 우월하게, 후방, 그리고 측면으로 방광의 정점을 쓸어 자궁 뿔을 찾습니다. 복부 절개를 통해 자궁 뿔을 추출하여 복벽에 놓습니다.
3-0 편조 흡수 봉합사를 사용하여 각 자궁 뿔의 단일 봉합사 결합을 수행하고, 약 1.5 ~ 2 센티미터의 자궁 부신을 수행하고 자궁 동맥에 내다식하십시오. 그런 다음 봉합사를 아늑하게 묶어 서 경적을 포함합니다. 이전에 준비된 VX2 세포 현탁액으로 심근을 접종하기 위해 1 밀리리터 의 셀이 장착된 1밀리리터 주사기를 적재합니다.
봉합사와 자궁 경부 사이의 봉합사 부위에 각 자궁 경전 근면에 1분 이상 세포 현탁액의 0.5 밀리리터를 천천히 주입한다. 그런 다음 세포 누출을 최소화하기 위해 심근 주사 부위에 30초 동안 압력을 가합니다. 자궁 뿔을 복부에 다시 넣기 전에 주사제 및 봉합사 부위를 검사합니다.
깊은 복벽 폐쇄의 경우 복막 절개 의 정점을 식별하고 외과 용 클램프를 사용하여 복막 직사각형 근육과 근막을 잡습니다. 3-0 흡수성 폴리필라멘트 봉합사를 배치하여 봉합사를 고정하고, 절개 한 정점에 피상적이며, 다른 쪽은 피상적 깊숙한 위치에 놓습니다. 부착된 봉합사를 사용하여, 복벽의 층을 통해 절개에 수직으로 달리는 바늘을 만들고, 봉합사를 묶고 느슨한 끝을 자르기 전에 좌우로 절개를 따라 단계적으로 작동합니다.
피상적 복부 벽 폐쇄의 경우, 묻혀 있는 3-0 흡수성 폴리필라멘트 봉합사를 사용하여 절개 한쪽에 깊은 피상화와 피상적 인 봉합사를 다른 쪽 깊숙이 대접하십시오. 봉합사를 매듭낸 후, 고정된 봉합사를 사용하여 진피 층에서 실행 바늘을 절개에 평행하게 만들고, 좌우절을 따라 단계적으로 작업한다. 봉합사를 묶고 느슨한 끝을 제거합니다.
닫힌 절개에 수술 접착제를 적용하여 피부 가장자리를 제거합니다. 그런 다음 동물이 경계하고 독립적으로 앉을 수 있을 때까지 산소와 모니터링이 있는 따뜻한 담요에 동물을 놓습니다. 이 모델을 확립할 때, 자궁 경전당 7개의 세포에 2회 10의 투여량은 4마리토끼에서 성공했고, 평균 45일 동안 접종부터 실험까지, 따라서 배양된 VX2 모델에 대한 최적의 주사 용량으로 결정되었다.
생체 내 전파 VX2 모델의 경우, 접종부터 29일의 실험까지평균 시간으로 16마리토끼에서 성공적으로 만들어졌으며, 5회 10~6개의 세포가 최적의 주사 용량으로 결정되었다. 모든 모델은 레트로 페리톤 림프절의 성공적인 전이성 변환을 초래했습니다. 또한, 배양된 VX2 세포로부터의 종양 및 전이성 림프절은 조직분석에 의한 생체 전파 VX2 세포로부터종양과 유사한 것으로 나타났으며, 뎅시향토생린 염색 세포는 침입된 근육에서 관찰되고 많은 병리학적 신비학적 수치를 가진 구조와 같은 선 형성을 가졌다.
혈관 천자에서 출혈을 피하기 위해 자궁 동맥에 봉합봉을 놓고 자궁 내막 구멍이 아닌 근막 구멍에 세포를 침투하는 데 주의를 기울이십시오. 수술 후 감염을 방지하고 수술 중 바륨 재료로 자신을 보호하기 위해 모델 생성 중에 적절한 멸균 기술을 사용하십시오.
