컬터 가능한 모델 유기체의 가용성은 많은 연구 분야의 발전에 근본적이었습니다. 이 프로토콜은 우리의 지식에, Doliolids를 배양할 수 있는 유일한 접근 방식입니다. 신뢰할 수 있는 Doliolid 배양 기술은 바다의 가장 생산적인 지역 중 일부에 중요하고 척추 동물의 초기 진화 조상을 나타내는 유기체를 연구하는 독특한 실험 모델을 제공합니다.
이 기술은 조류 식품 입자와 유기체가 자연에서 경험하는 컨테이너의 벽과 접촉하지 않고 물 기둥에 매달려 있기 때문에 독특합니다. 이 배양 방법은 다른 작은 젤라틴 및 갑각류 또는 플랑크톤 종의 배양에 적용 될 수있다. Doliolids는 복잡한 수명 주기를 가지고 있기 때문에 각 수명 단계의 요구를 이해하고 인식하는 것이 중요합니다.
라이프 사이클과 이를 인식하고 처리하는 방법을 배우는 것은 많은 연습을 합니다. 우리의 경험에서,이 배양 기술을 배울 수있는 유일한 방법은 그것을보고 그것을 하는 것입니다. 에린 아르네슨, 니콜라스 카스탈레인, 나탈리아 로페즈, 로렌 램보이, 브리아나 피어스, 아리아 로드리게스-산티아고, 테렐 스카버러 등 여러 프로젝트 참가자들도 이 영상에 짧게 나타났다.
실험실에서 Doliolid 배양을 확립하고 사육하기 전에, 심산수화 칼륨 을 심망가네이트 용액에 담그어 1.9 리터 와 3.8 리터 유리 배양 항아리를 청소하고 살균하십시오. 항아리가 하룻밤 사이에 몸을 담글 수 있도록 하십시오. 그런 다음 항아리를 비설피트 나트륨 용액으로 옮춥니까.
항아리가 하룻밤 사이에 몸을 담글 수 있도록 하십시오. 다음으로 산화된 물로 항아리를 완전히 헹구십시오. 항아리가 마르도록 합니다.
주식 문화를 유지하려면 엄격한 축 문화 기술을 사용하십시오. 2주마다 멸균 55 밀리리터 유리 배양 튜브에서 신선한 성장 매체의 25 밀리리터에 오래된 노화 배양의 0.5 밀리리터를 전송합니다. Doliolids를 먹이기 위한 더 많은 양의 식물성 플랑크톤을 준비하기 위해, 도끼 에서 500 밀리리터의 플라스틱 조직 배양 플라스크로 식물성 플랑크톤의 4 밀리리터를 1~50희석시 접종하도록 한다.
평방 미터당 65~85마이크로아인슈타인의 시원한 백색광 조명 아래 12~12시간 밝은 주기로 환경 인큐베이터 또는 워크인 환경 챔버에서 문화를 배양합니다. 평신도 문화 플라스크는 조명을 최대화합니다. 매일 부드럽게 배회합니다.
바다로 나가라. 대륙 선반에서 Doliolids를 찾으려면 수온, 염도 및 엽록소 A 형광을 프로파일링하여 Doliolids의 존재에 도움이되는 물 조건을 식별하기 위해 해양 기기 CTD를 배포하십시오. 특화된 플랑크톤 그물로 탐사 그물 견인을 수행하여 물 상태를 확인합니다.
또는, Doliolids를 검출하기 위하여 시투 프로파일링 화상 진찰 시스템을 이용하십시오. 이제 윈치를 작동하여 CTD를 검색합니다. CTD 로제트에 장착된 니스킨 병은 Doliolids가 있는 부지와 엽록소의 가장 높은 추정치를 포함하는 깊이에서 바닷물을 수집했습니다.
바닷물로 22리터 양동이 3개를 헹구고 바닷물로 채워서 절반 이상을 채웁니다. 그물 대구 끝을 바닷물로 완전히 채우고 대구 끝을 그물에 부착합니다. 그물을 배포합니다.
15~25도의 경사 견인 각도와 수직 배치 및 검색 속도를 분당 15m 이상유지하여 물 기둥을 통해 그물을 낮추고 들어올립니다. 그물이 보드에 있으면 대구 끝의 내용을 부드럽게 옮기고 사이트에서 수집한 표면 해수를 포함하는 플라스틱 양동이로 나눕니다. 넓은 보어 유리 파이펫을 사용하여 수직 및 수평 동작을 사용하여 비커의 내용과 피펫을 부드럽게 혼합합니다.
검지 손가락을 사용하여 모세관 흡입을 만들어 Doliolids를 캡처하고 전송합니다. 비커에 혼합 식물 플랑크톤에서 돌리오리드를 캡처합니다. Doliolids의 추가 후에, 밀리리터 당 네 번째 세포에 3-10에 약 5 시간 10의 최종 농도에 항아리에 로도모나스 문화를 추가합니다.
돌리오리드의 소화관의 색상을 확인하십시오. 붉은 색은 Doliolids가 적극적으로 먹이를 주고 있음을 결정합니다. Doliolids가 공기 용수 인터페이스에 갇히지 않도록하기 위해 머리 공간을 피하기 위해 여과되지 않은 입자가 풍부한 바닷물로 항아리를 완전히 채웁니다.
항아리 개구부 위에 플라스틱 랩 을 놓습니다. 동물을 손상시킬 수 있는 기포를 만들지 마십시오. 조심스럽게 항아리에 모자를 나사와 거품이 존재하는지 확인하기 위해 항아리를 부드럽게 반전.
거품이 있는 경우 더 많은 바닷물을 채우면 제거하십시오. 항아리가 뚜껑으로 다시 밀봉하고 항아리 의 외부에서 여분의 물을 닦아 후. 각 항아리를 고무 튜브로 덮인 수직 금속 막대와 스테인레스 스틸 호스 클램프 사이에 배치하여 플랑크톤 휠에 장착하십시오.
항아리 뒤쪽이 고무 튜브에 대해 쿠션되어 있는지 확인합니다. 나사를 조정하여 항아리 주위의 호스 클램프를 조입니다. 항아리가 0.3 rpm에서 회전하여 Doliolids를 서스펜션상태로 유지하도록 허용합니다.
실험실 조건에 3일 간의 적응 후 100~150밀리리터의 배양물을 항아리에서 샘플 용기로 이송하고 쿨터 카운터를 이용하여 조류 농도를 측정한다. 조류 농도의 추정에 기초하여, 리터당 40~95마이크로그램의 배양 항아리의 농도를 가져오기에 충분한 조류를 첨가한다. Doliolids가 배양에 추가할 조류의 빈도와 얼마나 많은 의 결정을 안내하기 위하여 공급된 후에 조류 농도를 감시하기 위하여 입자 카운터를 사용합니다.
리터당 40~95마이크로그램의 배양 항아리에 식물성 플랑크톤 농도를 유지한다. Doliolids를 배양하려면 복잡한 수명 주기를 통해 이를 지원해야 합니다. 애벌레와 oozooids 및 초기 간호사를 개발.
간호사의 투석기에서 최소 8개의 트로포주이드가 보이면 적어도 4명의 간호사를 새로운 배양 병으로 옮기게 됩니다. 포로주이드의 크기가 3밀리미터에 도달하면 항아리에 있는 동물의 수를 줄입니다. phorozooids가 5 밀리미터 보다 커지고 고노주이드 클러스터를 개발했을 때 4 개의 phorozooids를 제외한 모든 것을 제거합니다.
이 프로토콜은 Dolioletta gegenbauri 수집 및 재배 접근 방식에 대한 개요를 제공합니다. 조류 통관 속도는 리터 당 탄소의 20 에서 60 마이크로 그램의 농도에서 유사하 고 음식 농도 증가 로 감소. D.gegenbauri 성장을 지지하는 온도 범위에 비해 통관 률이 비례적으로 증가했습니다.
온도 및 식품 가용성의 기능으로 하루 0.1에서 0.7 밀리미터에 이르는 성장률이 관찰되었습니다. Doliolids의 재배는 성공적으로 해양 조건을 복제하고 복잡한 수명 주기 동안 동물의 요구를 수용에 달려 있습니다. 따라서 포획, 격리 및 축산 중에 동물을 부드럽게 다루어야 합니다.
음식 농도를 자주 모니터링하고 조정해야 합니다. 이것은 개발 애벌레와 oozooid 생활 단계 동안 특히 사실이다. 이 방법은 특별히 해양 식품 웹의 기지에서 작은 동물 플랑크톤 종의 사육을 위해 설계되었습니다.
이 방법은 예를 들어 기후 변화에 대한 동물 플랑크톤 반응을 조사하는 데 유용할 것입니다. 개발 이후, 이 기술은 동물 플랑크톤 생태학자들이 Doliolids의 실험실 기반 공급, 성장 및 재생 률을 결정할 수 있는 길을 열었습니다. 또한이 방법은 자연에서 Doliolid 규정식의 혁신적인 분자 기지를 둔 조사를 위한 도로를 포장했습니다.
나는 유리 청소 프로토콜이 호흡기 자극제이며 통풍이 잘되는 지역에서 사용되어야하는 시약을 포함한다는 것을 상기시키고 싶습니다. 바다에서 일하는 것도 위험할 수 있으므로 선박 안전 규칙을 따르십시오.
