이 비디오는 상세 설명, 직교 오른쪽 뒷다리, 중간 허벅지 이식 쥐를 수행하는 방법을 제공합니다. 기증자 쥐 오른쪽 뒷사지는 허벅지 중간 수준에서 절단 된 다음 얼음에 저장됩니다. 수신자 쥐 오른쪽 뒷사지는 또한 허벅지 중간 수준에서 절단됩니다.
기증자 쥐 사지는 수신자 쥐에 부착됩니다. 우리는 뼈, 동맥, 정맥, 신경, 근육 및 피부 시스템을 다시 부착하는 방법을 설명합니다. 사지 이식, 더 구체적으로, 혈관 복합 동종 이식, VCA, 광범위한 치료 약속을 가지고있다.
그러나 현재 기술, 면역 억제 및 기능성 신경 운동 회복에 의해 제한됩니다. 우리의 모델은 손으로 바느질 한 혈관 해부학 및 신경 응착과 같은 세심한 시간 테스트 미세 수술 기술을 강조합니다. 우리는 1 년 이상에 있는 이 수술의 200 이상 을 수행했습니다.
초기 마이크로 외과 의사에 초기 학습 곡선이 있지만,이 비디오를 사용하여 우리의 방법과 헌신적 인 연습에 대한 헌신을 배우면 모든 마이크로 외과 의사가이 모델을 마스터 할 수 있습니다. 모든 실험은 국립 보건원, NIH의 실험실 동물의 치료 및 사용에 대한 가이드에 따라 수행되었으며 노스 웨스턴 대학 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 받았습니다. 특정 절차는 프로토콜 IS 00001663에서 수행되었습니다.
수술 시 8~16주 된 쥐를 선택하십시오. 쥐의 뒷다리 털을 다듬기 전에 기화기를 통해 5%의 이소플루란으로 전신 마취를 유도합니다. 코 콘을 사용하여 마취를 2~ 2.5% 아래에 히터로 작동 보드에 쥐를 배치합니다.
무모 피부를 70%의 마찰 알코올로 소독하고 멸균 거즈로 수술장을 보호합니다. 적절한 미세 수술 현미경과 여기에 표시된 미세 수술 기구를 사용하여 접근하기 쉬운 양극성 및 단일 극성 전기 코스터리와 함께 해부를 시작할 준비가됩니다. 가위를 사용하여 오른쪽 뒷다리 주위에 할례와 피부 절개를 하십시오.
인게날 인대와 거의 동일한 수준에서 즉시 잉게날 주름에서 시작하고 둘레 절개를 완료하기 위해 측면으로 등갈을 확장하십시오. 그리고 바로 절개 아래에 근육 층을 노출, 해부및 방금 만든 근위 피부 플랩에 근육 층에서 리드 피상 적 상복부 혈관을 소생. 근접 플랩을 잉게인 인대와 말단 피부 플랩에 초월적으로 반영하여 무릎에 열렬하게 반사합니다.
와이어 리트랙터 또는 압연 거즈를 사용하여 필드를 노출하십시오. 쥐의 음항제는 인간과 유사하다는 것을 관찰했습니다; 측면에서 내측에 신경, 동맥 및 정맥이 놓여 있습니다. 대퇴 신경을 해부하고, 가능하면 양면에 인대 근동을 급격히 나눕니다.
분열된 신경을 열등하게 철회하고, 촉촉한 거즈 아래에 덮여 있어 안전하게 방해하지 않습니다. 대퇴동맥과 정맥에 주의를 돌리면 4센티미터 길이의 7-0 실크 넥타이를 사용하여 직접 처리하는 대신 혈관을 외상적으로 철회합니다. 이제 세심한 주의를 기울이면 최종 해부학 적 결과가 향상됩니다.
7-0 실크 넥타이로 대퇴함의 모든 가지를 리게이트합니다. 나뭇가지를 관계 간에 나눕니다. 분열을 필요로 하는 동맥 및 정맥 가지에는 피상적인 일류 와 근육 혈관이 포함됩니다.
피상적 인 곡실 비강은 일반적으로 가장 크고 인간에서 profunda 대퇴와 마찬가지로 깊은 다이빙을 하는 것처럼 보이지만, profunda는 쥐에 없습니다. 대퇴혈관의 더 많은 단부, 예컨대 가장 높은 비낭 및 사페누스 가지는 일반적으로 분열을 필요로하지 않는다. 이제 대퇴동맥을 7-0 실크 타이로 가능한 한 인대와 동면으로 리게이트하고 동점을 나눕니다.
동맥과 유사하게 대퇴 정맥을 리게이트하고 나눕니다. 동맥과 정맥을 열등하게 반영하고, 안전하게 길에서 벗어나, 습한 거즈 아래에 덮여 있으며, 이전에 덮은 대퇴신경과 함께 덮입니다. 복부 근육 그룹을 해부, 발생하는 모든 눈에 보이는 혈관을 소생주의 복용.
hemostasis에 주의지금 나중에 재현 하는 동안 받는 사람 혈액 손실을 최소화 할 것 이다. 복부 근육 그룹에 깊은, 식별 하 고 날카롭게 그것의 가지에 상시 신경 근접성을 분할. 세 가지 는 모두 일반적으로 볼 수, 정경, 간내 및 sural.
세 가지 모두 기증자 사지에 보존되어야 합니다. 네 번째 분리 분기는 일반적으로 이 해부에서 볼 수 없습니다. 세심한 hemostasis와 중간 허벅지 수준에서 나머지 복부와 등쪽 근육 그룹을 분할 완료.
근육을 나누는 것을 완료하기 위해 사지를 내측으로 철회할 필요가 있을 수 있습니다. 핸드헬드 무선 회전 톱을 사용하여 중간 샤프트에서 대퇴골 뼈를 분리합니다. 사지는 이제 기증자로부터 자유롭습니다.
기증자에게서 사지 이식편을 제거한 후, 접목측 대퇴동맥과 정맥 그루터기에서 실크 묶인 끝을 잘라내어 혈관을 다시 열게 한다. 24 게이지 협착기를 이식 동맥 그루터기에 삽입하고 얼음처럼 차가운 정상 식염수 5 밀리리터에 희석 된 250 개의 국제 단위로 접목을 플러시하여 열린 정맥에서 흘러 나오는 것을 주의하십시오. 천천히, 약 3 분 동안 부드럽게 접목을 플러시.
과도한 강력한 플러싱은 내피를 손상시킬 수 있습니다. 이식이 이식될 때까지 얼음 양동이에 중첩된 차가운 식염수 접시에 접목을 놓습니다. 양자 투라코토미로 기증자 쥐를 안락사시.
수령인 수술은 기증자 수술과 유사하게 시작되며, 쥐를 마취하고, 모피를 다듬고, 피부 플랩을 반사하고, 대퇴 신경, 동맥 및 정맥을 해부합니다. 그리고 이전에 설명한 것과 동일한 분기 혈관을 계칭한다. 그러나, 이 작업 도중, 기증자를 위한 보다는 더 dismoreid를 대퇴신경을 분할합니다, 그러나 가능하면 양면에 근교로.
대퇴동맥과 정맥을 나누고 미세 수술 불독 클램프로 인게인의 수준에서 각각 클램프를 누비한다. 이전에 설명한 대로 수술을 계속, 세심한 hemostasis와 허벅지의 복부 지지 근육을 분할, 필요에 따라 내측 사지를 철회하면서. 좌골 신경 근위를 분기점으로 식별하고 나누고 회전톱을 사용하여 중간 축에서 대퇴골을 분리한다.
수령인의 오른쪽 뒷다리를 제거하고 지역 동물 관리 및 사용 위원회 지침에 따라 적절하게 폐기하십시오. 이 단계에서 는 코 콘을 통해 1 ~1.5 %로 이소플루란을 거절하는 것이 매우 중요합니다. 절차의 이 덜 고통스러운 부분 도중 너무 많은 마취는 쥐의 죽음으로 이끌어 낼 것입니다.
뼈를 함께 뭉울 때입니다. 핸드헬드 로터리 톱을 사용하여 기증자와 수령인 대퇴골 절단 단골 모두에서 부정행위를 제거하십시오. 18 게이지 바늘의 허브 끝을 잘라, 이는 대퇴골 내트럼질 막대가 될 것입니다.
뼈를 조작하기 전에, 재갈 과정에서 골수 출혈을 줄이기 위해 대퇴골 뼈의 끝을 절단 받는 사람에 소량의 뼈 왁스를 적용합니다. 기증자와 수령인 대퇴 뼈를 18 게이지 바늘을 관문 막대로 사용하여 동거하십시오. 어떤 힘은 필요하지만, 피질을 골절까지 어느 뼈중 하나를 ream하지 않습니다.
필요에 따라 바늘을 제거하고 두 뼈가 뼈 사이에 바늘이 보이지 않고 바늘 위에 부드럽게 맞도록 부적절한 길이로 다듬습니다. 거즈 패드 나 작은 바위 또는 기증자 사지 아래에 점토모델링과 같은 작은 지지대를 배치하여 긴장을 피하십시오. 8~10개의 단순 중단된 5-0 폴리글락틴 봉합사를 사용하여 복부 근육 그룹을 재약화하여 이식편이 대퇴골 바늘 주위를 회전시키지 않도록 합니다.
이것은 해부학에 대한 사지 안정성을 제공합니다. 이제 해부학을 시작합니다. 더 나은 시각화를 위해 얼음 차가운 식염수로 이식 및 외과 분야를 주기적으로 관개하고 허혈성 재관류 손상을 줄입니다.
기증자와 수령인 대퇴 동맥과 해부학을 단순 중단 된 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 엔드 투 엔드 방식으로 정렬하여 긴장과 반복을 모두 피하십시오. 동맥은 6 봉합사의 평균을 필요로한다. 동맥과 마찬가지로 기증자와 받는 사람 대퇴정맥을 종단 간 방식으로 해부학합니다.
정맥은 6 ~8 봉합사가 필요합니다. 넉넉한 차가운 식염수 관개, 외상성 혈관 취급 기술, 긴 꼬리를 방치하여 선박 회수를 위한 체류 봉합사 역할을 하는 것은 효과적인 미세 수술 해부학을 위한 중요한 도구입니다. 중간 정도의 혈전셀룰로오스 분말을 양상모에 놓고 정맥과 동맥에 근접 미세 수술 불독 클램프를 제거합니다.
좋은 육아와 흐름을 위해 양상모를 검사합니다. 면 봉면을 사용하여 정맥을 부드럽게 프로딩하고 두 해부학 모두에 좋은 혈안이 검사하십시오. 두 해부학모두 만족스러운 것으로 확인되면 남은 장기 봉합사 꼬리를 다른 것과 일치하도록 다듬습니다.
왼쪽 측면 탈큐비투스 위치로 쥐를 재배치, 어떤 재관류 근육 출혈의 세심한 hemostasis을 달성하기 위해 자유로운 전기 카운테리를 사용합니다. 주의는 근육 hemostasis가 보장되면 신경 해부학으로 바뀌습니다. 간단한 중단 5-0 폴리 글락틴 봉합사와 상시 신경 아래에 바로 거짓말 등산 근육 그룹을 다시 상종.
비정형으로 보이는 신경 절단 끝을 다시 트리밍합니다. 상추 신경을 10-0 나일론 봉합사로 상생시화하여 진신경성 바이트를 위해 노력합니다. 8 ~10 간단한 중단 봉합사는 일반적으로 충분합니다.
5-0 폴리글락틴 봉합사를 가진 나머지 등산 근육 단을 재평가합니다. 그런 다음 4-0 폴리글락틴 연속 실행 봉합사로 등쪽 피부를 닫습니다. 쥐를 척추 위치로 재배치하고, 대퇴 신경을 10-0 나일론 봉합사로 다시 상생시키고, 주신경성 물린 것을 위해 노력한다.
2 ~3 개의 간단한 중단 봉합사일반적으로 충분합니다. 등갈 피부와 같은 방식으로 나머지 복부 피부를 닫습니다. 일단 깨어 나면 쥐에 자극 될 수있는 여분의 봉합꼬리를 피하십시오.
동물이 수술 후 즉시 창 밖으로 일단, 그들은 신경 운동 복구에 대 한 테스트될 수 있습니다. Hargreaves 테스트는 열 감각을 테스트하는 데 사용됩니다. 쥐를 테스트 컨테이너에 넣고 20 분 동안 적응할 수 있었습니다.
장치 유리는 깨끗하게 확인되고, 열원은 조사관의 손가락으로 작동하는 것으로 확인된다. 테스트하기 전에 쥐가 깨어 있는지 확인하고 테스트 된 발이 적외선 모션 검출기 위에 배치됩니다. 강도 수준 90에서 열 에너지를 전송합니다.
열원에서 발을 멀리 이동하는 동물의 시간 지연이 기록됩니다. 20초 이내에 움직임이 발생하지 않으면 부상을 방지하기 위해 시험이 중단됩니다. 각 동물에 대한 평균 인출 대기 시간을 계산하기 전에 가장 높고 낮은 값을 제외하고 테스트 된 사지 당 5 번의 시험을 얻습니다.
여기에 만화 형식으로 묘사 된 수술 디자인입니다. 기증자와 수령쥐의 오른쪽 뒷사지는 상반절로 허벅지 중간 수준에서 절단됩니다. 대퇴동맥, 정맥 및 신경뿐만 아니라 상골 신경및 대퇴골 뼈는 수령인 수술에서 다시 연결되어야합니다.
이 모델은 면역 억제 및 이식 전략의 차동 생존 효과를 보여주기 위해 사용될 수 있습니다. 이 기술로 장기적인 생존은 달성 할 수 있습니다. 이 모델은 감각 신경 회복을 조사하는 데 사용할 수 있으며, 이는 수술 후 4주 동안 분명하게 드러날 수 있습니다.
또한 걸음걸이 분석 플랫폼을 사용하여 모터 기능을 심문할 수도 있습니다. 여기서, 우리는 유리한 생존 특성을 가진 쥐 모형 플랫폼을 제시했습니다, 우리는 진행 수치에서 보인 것과 같이 감각및 모터 복구를 탐구하기 위하여 이용합니다. VCA의 광범위한 범주에 따라 사지 이식, 혈관 구성 요소 동종 이식은 널리 적용 가능한 치료 약속은 아직 성취되지 않았습니다.
주요 장애물은 현재 면역 억제 및 신경 운동 복구 기술을 라인. 새로운 기술의 개발은 유연하고 견고하며 재현 가능한 동물 모델링에 달려 있습니다. 이 플랫폼을 사용하여, 조사관이 사지 이식의 여러 면을 발전시킬 수 있기를 바랍니다.
다음 단계에서 시청하고 행운을 빌어 주셔서 감사합니다.
