이 작품은 건강의 국립 연구소 (DK097335 및 T32AI007260)와 아이오와 스테드 소아과의 대학을 통해 부분적으로 지원되었다.

모든 동물 절차는 아이오와 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (프로토콜 #8041401)에 의해 승인되었다. 모든 동물은 아이오와 대학에서 승인 된 실험실 동물 관리 (AALAC)의 평가 및 인증 협회에 보관되었습니다. 모든 마우스는 야생 형 균주 C57Bl/6J였다.
1. 임신 한 쥐에 FEMI의 설립
<ol><li>LPS 준비<ol>
<li>에샤리치아 대장균 O55:B5(재고 농도 2 mg/mL)에서 파생된 LPS를 사용하십시오.</li>
		<li>20 μg/mL의 작동 농도에 대한 멸균 식염수로 LPS 재고 농도 1:100을 희석합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>모계 LPS 주입<ol>
<li>임신 일 e15에 임신 한 댐을 주입하십시오. 이 시점은 뮤린 임신을 통해 약 75%이며, 이 모델은 초리암니온염으로 인한 조산의 대부분이 발생하는 인간 임신의 초기 세 번째 삼보격과 발달적으로 유사합니다.</li>
		<li>적절한 LPS 주입을 결정하기 위해 주사 직전에 임신 한 마우스를 무게.</li>
		<li>다음 공식을 사용하여 작업 농도의 용량을 계산합니다: 5 μL x 그램 체중(gbw), 100 μg/kg의 LPS의 총 용량. 제어 동물의 경우, 주사에 대한 일반 식염수의 동등한 볼륨을 사용합니다.</li>
		<li>소용돌이 LPS 용액은 각 주입 전에 높은 15 초 동안 세 번.</li>
		<li>LPS 볼륨을 1mL 주사기로 그립니다.</li>
		<li>스크러핑 기술로 임신 한 마우스를 억제하십시오. 등대 반수 위치에 잡고 주사를 수행합니다.<ol>
<li>30\u201240° 각도에서 복부의 오른쪽 아래 사분면(방광 및 복부 혈관을 피하기 위해)을 위에 30 게이지 8mm 바늘 벨을 삽입합니다. 바늘의 길이를 약 1/4 ~ 1/2로 삽입합니다.</li>
			<li>주사기 플런저에 다시 당겨 주입하기 전에 부정적인 압력을 보장합니다. 음압이 존재하는 경우 주사를 진행합니다.</li>
			<li>주사 후, 약 30 분 동안 마우스를 모니터링 한 다음 임신의 나머지 부분에 대한 케이지로 돌아갑니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 자손의 납품 및 관리, 장 수확
<ol><li>e20에서 질 전달을 통해 일반적으로 새끼를 전달합니다. 참고: 이 모델은 그림 1에서 볼 수 있는 예상 복용량 의존 태아 손실 률을 가지고 있으며 아래 결과에서 논의 됩니다.</li>
	<li>새끼가 어머니와 함께 남아 광고 리비툼 피드를받을 수 있습니다.</li>
	<li>수확당일, 일반적으로 산후 14일(P14)은 기관 동물 관리 및 사용 위원회 프로토콜에 따라 자궁 경부 탈구를 통해 새끼를 안락사시합니다.</li>
	<li>가위와 집게를 사용하여 복부의 중간선 아래로 수직 절개를 하고, 피부와 복막을 통해 복부의 전체 길이를 만듭니다. 가위로 소장을 위장에서 cecum에 게 이 음 하 고 집게와 장간을 제거 합니다.</li>
	<li>소장의 1/3(인간 일루를 대표하는 부분)를 분리하고 유지하여 근위 소장, cecum 및 결장을 폐기한다.</li>
	<li>가위를 사용하여 일레움 부분을 반으로 나눕니다.</li>
	<li>이후 RNA 정량화를 위해 RNA 안정화 용액에 근위 절반을 놓는다.</li>
	<li>슬라이드 준비를 위해 10% 중립 버퍼링 포름틴에 탈반 절반을 배치합니다.</li>
</ol>3. 장 부상 득점
<ol><li>섹션 파라핀 은 5 μm 두께의 슬라이스에 조직을 내장하고 유리 슬라이드에 마운트. 참고: 우리는 파라핀 포함, 단면 및 슬라이드에 장착을 위한 히스토로지 코어로 표본을 보냅니다.</li>
	<li>표준 절차에 따라 슬라이드를 분리합니다.</li>
	<li>표준 절차에 따라 헤마톡슬린과 에신을 가진 얼룩 섹션.</li>
	<li>앞서 설명한 바와 같이 장 내 부상에 대한 3점 척도의 점수섹션은 42,43.<ol>
<li>경현미경검사를 사용하여, 지하멤브레인(43)으로부터의 고루 무결성 및 분리를 평가하는 3점 척도에서 2명의 별도 맹목적인 수사관에 의한 일반화된 장 손상을 평가한다(보충도1). 장 내 부상은 20배율 및 수치 조리개 0.50에서 가장 잘 평가됩니다.</li>
		<li>일반 점막을 설명하기 위해 점수0을 할당합니다.</li>
		<li>1의 점수를 할당하는 것은 부피 그루엔하겐의 공간, vacuolization 또는 빌리의 팁에 국한 된 피상적 인 리프팅의 개발을 포함하는 가벼운 부상을 설명합니다.</li>
		<li>심한 부상을 설명하기 위해 2의 점수를 할당, 상피 리프팅 및 바이크 올무의 절반 이상 큰 vacuolization에 의해 표시, 빌리 왜곡, 또는 점막 궤양 및 라미나 프로프리아의 붕괴.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 창과 잔 세포의 정량화
<ol><li>deparaffinization 다음, 알시안 블루/주기산 쉬프 얼룩을 가진 단계 2.8에서 조직 섹션의 얼룩 슬라이드는 이전에 설명된 바와 같이 잔과 창세포 모두를 나타내기 위하여44,45 다음 단계에 따라. 참고: 알시안 블루/주기성 산 쉬프 얼룩은 창이나 잔 세포에 만연하지 않지만, 우리의 경험에서, 맹목적인 숙련 된 조사자는 세포 표적 항체에 비해이 얼룩을 사용하여 동등한 세포 정량화를 가지고 있으며, 훨씬 적은 배경 염색46.</li>
	<li>다음과 같이 탈수 슬라이드를 분리, 얼룩 및 탈수합니다.<ol>
<li>자일렌에 있는 슬라이드를 10분 동안 두 번 잠급합니다. 주의: 자일렌은 연기 후드에 사용해야합니다.</li>
		<li>100% EtOH로 헹구는 다.</li>
		<li>3분 동안 100% EtOH로 슬라이드를 3분 동안 100% EtOH, 3분 동안 90% EtOH, 3분 동안 70% EtOH, 마지막으로 3분 동안 50%의 EtOH를 침수합니다.</li>
		<li>흐르는 수돗물 에서 5 분 동안 씻으시면 하십시오. 주의: 티슈 샘플의 손실을 방지하기 위해 흐르는 물에서 멀리 부분을 가리킵니다.</li>
		<li>표준 커피 필터로 알시안 블루 스테인 솔루션을 필터링합니다.</li>
		<li>알시안 블루 스테인에서 15분 동안 스테인슬라이드를 한 다음 흐르는 수돗물 아래에서 2분 간 세척합니다.</li>
		<li>이중 증류수 200mL에 1 mg의 주기산을 희석합니다. 이 솔루션의 슬라이드를 5분 동안 잠수합니다. 그런 다음 흐르는 수돗물 에서 1 분 동안 씻으릅니다.</li>
		<li>10 분 동안 쉬프의 시약으로 얼룩. 흐르는 수돗물 에서 5 분 동안 씻으시면 하십시오.</li>
		<li>헤마톡슬린으로 슬라이드를 1분 동안 묻은 다음 흐르는 수돗물 에서 2분 동안 세척합니다.</li>
		<li>산성 알코올 (1 mL의 염산 혼합 99 mL에서 70 % EtOH)에 1 분 동안 담급니다.</li>
		<li>스콧의 수돗물(수돗물에 NaHCO3 농도 0.1%)에 1분 동안 담근 다음 흐르는 수돗물 에서 1분 동안 세척합니다.</li>
		<li>슬라이드를 탈수합니다.<ol>
<li>각 슬라이드를 70% EtOH로 10회 찍어 90% EtOH에서 10회, EtOH100%로 10회 찍어 보세요.</li>
			<li>10분 동안 100% EtOH로 슬라이드를 잠그고, 신선한 자일렌에 두 번 잠급하여 각각 3분 동안 잠급됩니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>시편에 장착 용지 한 방울을 놓고 덮개 슬립을 위에 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>잔 세포 계산<ol>
<li>가벼운 현미경 검사를 사용하여 잔 세포를 계산합니다(보충 도 2). 장 조직의 각 조각에 대 한, 잔 세포의 수를 계산 하 고 500 상피 세포 와 표현 잔 세포 비율을 100 상피 세포 당 비율로. 잔 세포는 20배율 및 수치 조리개 0.5에서 가장 잘 계산됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>창세포 계수<ol>
<li>가벼운 현미경 검사를 사용하여창세포(보충도 2)를계산합니다. 장 조직의 각 조각에 대 한, 창 자 지하실 당 창 세포의 비율로 표현. 장 조직의 각 조각당 100개의 장 내 지하실을 계산합니다. 창세포는 20x-60x 배율 및 수치 조리개 0.50-1.30으로 가장 잘 계산됩니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

Chorioamnionitis 영향 2\u20124% 기간의 및 25\u201230% preterm 납품의8,9. 그러나, 초리오암니온염의 영향은 태아와신생아10,11,12,13,14,15,16에중요한 영향을 미치는 것으로 나타났기 때문에 ?...

융경막은 포유류 임신에 필수적인 역할을 합니다. 그들은 여러 기능을 제공하는 초리온과 양상을 포함한다. 그들은 태아를 둘러싸고 보호하고, 모계와 태아 구획1사이의 파라크리니 신호를 용이하게하고, 파리오닉 멤브레인 내에서 로컬 피드백 루프를 생성하여 parturition1을시동하는 데 관여할 수 있다. 멤브레인의 현재 이해는 양막이 구조적 장벽 기능을 제공한다는 것을 나타내며, 초리온은 주로 모계 면역 계통2로부터발전하는 태아를 보호하기 위해 면역학적 완충제를 제공한다. 이 막의 염증은 chorioamnionitis로 알려져 있습니다. 역사적으로, 임상 초리오암니온염의 진단은 모계 열플러스 하나 이상의 태아 또는 모계 임상발견의존재에 따라 만들어졌으며3,4. 그러나, 이 정의는 임상적으로 유용하지만, 정밀도의 부족은 chorioamnionitis 연구를 도전하게 했습니다. 2015년, 진단을 명확히 하기 위해 유니스 케네디 슈리버 국립아동보건연구원의 전문가 패널 워크숍은 충야염염을 자궁내 염증 또는 감염 또는 둘 다(트리플 I)3로정의했다. 이러한 설명은 미생물 유도 감염이 자궁/양수 염증의 중요한 원인이지만 멸균 자궁/양수 염증5,6,7보다덜 일반적으로 발생하기 때문에 중요하다. 전반적으로, chorioamnionitis는 기간 납품의 2\u20124%와 조산 납품의 25\u201230%에서 볼 수 있듯이 중요한 공중 위생 문제점 남아 있습니다8,9.
Chorioamnionitis 태아와 신천에 중요 한 영향을 미칠 수 있습니다. 그것은 잘 충진성 측량 이형성증을 포함하여 미숙아의 많은 이환의 증가 리스크와 연관된다는 것을 문헌에서 잘 문서화되었습니다10,뇌백색 물질 상해11,정맥 내 출혈12,미숙아 출혈13의망막 출혈, 및 모두 의외및 신생아14, 14의초기확인. 미숙한 장내 부상 및 수리 메커니즘에 관심이 있기 때문에, 초리오암니온염은 또한 괴사장염(NEC)15,16의나중에 개발과 연관된다는 점에 유의하는 것이 중요하다. NEC는 염증 및 후속 장 괴사(17)에대한 난독증 숙주 반응을 초래하는 조산 유아의 치명적인 위장 질환이다. NEC는 매년 미국에서 4,000명 이상의 유아에게 영향을 미치고 있으며, 이들 유아의 3분의 1은18세질병으로 사망합니다. NEC의 발병기는 아마도 장 미성숙의 조합을 포함, 미성숙 면역 체계의 dysregulation, 장 염증, 세균성 전좌19,장 괴사의 최종 일반적인 경로에 절정. 중요한 것은, NEC의 개시는 수시로 출생 후에 주 및 chorioamnionitis에 잠재적인 노출을, chorioamnionitis와 NEC의 후속 발달 사이 기계론링크를 불분명하게만듭니다. chorioamnionitis가 NEC의 병리 생리학에 기여할 수 있는 1개의 잠재적인 기계장치는 모계 면역 계통의 강화 조절을 통해서, 그 후에 정상 태아 발달 패턴을 방해할 수 있는 강한 태아 선동반응을생성합니다(21,22,23).
초리오암니온염의 다중 포유류 모델은 설치류 및 양24,25,26,27,28,29,30,31,32에존재한다. 그러나, 모성 염증에 대한 초암니염 유도 태아 노출(FEMI)에 이어 초기 신생아 기간을 넘어 장내 발병에 관한 몇 가지 데이터가 존재한다. FEMI와 미숙한 장의 부상의 후속 개발 사이의 관계를 탐구하기 위해, 우리는 리포 폴리사카라이드 (LPS)유도 FEMI 모델을 적응했다. 리포폴리사카라이드는 그람 음성 박테리아에 세포 외 표면의 주요 구성 요소이며 인간을 포함한 다중 진핵종의 타고난 면역 계통의 강력한자극제(33)이다. 모계 LPS 주사는 살아있는 박테리아의 혼동 효과 없이 멸균 염증 폭포를 초래하고, 조산34의유도를 위한 잘 확립된 모델일 뿐만 아니라 급성 초리암니온염 및 태아 염증 반응 증후군(FIRS)의 모델, 이는 가장 심한 형태의 초리오암니온염(24,35)이다. 또한 양모델(36)과 뮤린모델(37, 38,39,40)에서대뇌 백색 및 회색 물질 상해를 유도하는 것으로 나타났다. 그러나, 우리의 지식에, 우리는 chorioamnionitis와 FEMI의이 모델을 사용하여 출생 과거 위장의 발달에 미치는 영향을 조사하고, chorioamnionitis및 NEC41의나중에 개발 사이의 가능한 기계론적 링크를 조사하기위해.

<table><tbody><tr><td>10% neutral buffered formalin</td><td>Sigma</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Alcian blue stain</td><td>Newcomer supply</td><td>1003A</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl6/J mice</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon labs</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin stain</td><td>Leica</td><td>381562</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma</td><td>L2880</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ni-U Microscope</td><td>Nikon</td><td>2CE-MQVJ-1</td><td></td></tr><tr><td>Periodic Acid</td><td>ACROS</td><td>H5106</td><td>CAS# 10450-59-9</td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Thermofisher</td><td>Am7021</td><td></td></tr><tr><td>Schiff&#039;s reagent</td><td>Sigma</td><td>S5133</td><td></td></tr><tr><td>Secor Imager 2400</td><td>Meso Scale Discovery (MSD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V-Plex Assay</td><td>Meso Scale Discovery (MSD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sigma</td><td>534056</td><td></td></tr></tbody></table>

a murine model of fetal exposure to maternal inflammation to study the effects of acute chorioamnionitis on newborn intestinal development

Chorioamnionitis는 조산의 일반적인 침전물이고 괴사 장염 (NEC)을 포함하여 미숙아의 이환의 많은 것과 연관됩니다. 그러나, 이 두 조건 사이 기계적인 링크는 아직 발견되지 않았습니다. 우리는 모성 염증 (FEMI)에 리포 폴리삭차라이드 (LPS)유도 태아 노출을 포함하는 chorioamnionitis의 뮤린 모델을 채택했습니다. FEMI의 이 모형은 또한 임상 chorioamnionitis의 많은 경우에 존재하는 멸균 모계, 태반 및 태아 선동적인 폭포를 유도합니다. 살아있는 박테리아를 이용하고 더 정확하게 chorioamnionitis의 결과로 상승 감염의 병리 생리학을 모방하는 모형이 존재하더라도, 이 방법은 미숙한 창자 및 관련 개발 microbiome의 발달에 간접적인 효력을 일으키는 원인이 될 수 있습니다. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 LPS 유도 FEMI가 임신 손실및 조산에 있는 복용량 의존적인 증가, 뿐만 아니라 자손에 있는 일반적인 장 발달의 중단에 초래한다는 것을 보여주었습니다. 또한, 우리는 FEMI가 자손에 있는 장 상해 및 혈청 사이토카인을 현저하게 증가시키는 것을 보여주었습니다, 동시에 진보와 Paneth 세포를 감소시키면서, 둘 다 장 염증에 대하여 선천적인 면역의 첫번째 줄을 제공하는. LPS 유도 FEMI의 유사한 모형은 chorioamnionitis와 중추 신경계의 후속 이상 사이 협회를 모델링하기 위하여 이용되었지만, 우리의 지식에, 이 프로토콜은 chorioamnionitis와 NEC 사이 잠재적인 링크로 chorioamnionitis 및 NEC 사이 기계적인 링크를 해명하기 위하여 시도하는 첫번째입니다.

배아 일째에 FEMI에 노출15 임신의 용량 의존손실과 조산 노동의 투여 의존율로 이어집니다(그림 1)42. 실험을 위해, 우리는 중요한 선동적인 모욕에 태아를 드러내면서 임신 손실 및 미숙아 (미숙아와 자궁 내 태아 죽음 둘 다 사이 50% 손실)를 극소화하기 위하여 100 μg/kg의 LPS 복용량을 사용하기로 결정했습니다.
이 방법을 사용하여, 우리...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development at JoVE.com

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

우리는 살아있는 유기체의 합병증 없이 모계 염증에 태아 노출을 시뮬레이션하기 위하여 chorioamnionitis의 모형을 개발했습니다 자손의 창자 발달에 FEMI의 효력을 검토합니다. 이것은 chorioamnionitis 다음 장 상해의 발달을 위한 기계론적인 원인의 연구를 허용합니다.

신생아 장 발달에 급성 chorioamnionitis의 효력을 연구하기 위하여 모성 염증에 태아 노출의 Murine 모형

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

a-murine-model-fetal-exposure-to-maternal-inflammation-to-study

Research

JoVE Journal

Medicine

3.7K 조회수.  University of Iowa. 우리는 살아있는 유기체의 합병증 없이 모계 염증에 태아 노출을 시뮬레이션하기 위하여 chorioamnionitis의 모형을 개발했습니다 자손의 창자 발달에 FEMI의 효력을 검토합니다. 이것은 chorioamnionitis 다음 장 상해의 발달을 위한 기계론적인 원인의 연구를 허용합니다.

비디오: A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal features of the natural infection. This protocol describes procedures for the establishment and evaluation of systemic infection due to neuropathogenic Escherichia coli K1 in the neonatal rat. Colonization of the gastrointestinal tract leads to dissemination of the pathogen along the gut-lymph-blood-brain course of infection and the model displays strong age dependency. A strain of E. coli O18:K1 with enhanced virulence for the neonatal rat produces exceptionally high rates of colonization, translocation to the blood compartment and invasion of the meninges following transit through the choroid plexus. As in the human host, penetration of the central nervous system is accompanied by local inflammation and an invariably lethal outcome. The model is of proven utility for studies of the mechanism of pathogenesis, for evaluation of therapeutic interventions and for assessment of bacterial virulence.

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Here, a procedure is described for the establishment of systemic infection in the neonatal rat with cultures of Escherichia coli K1. This non-invasive procedure permits colonization of the gastrointestinal tract, translocation of the pathogen to the systemic circulation, and invasion of the central nervous system at the choroid plexus.

Neuropathogenic의 비 침습 모델<em&gt; 대장균</em&gt; 신생아 쥐에 감염

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

연구

면역학 및 감염병학

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; 높은</sup&gt; 면역 결핍 마우스에게 T 세포

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Development of an Antigen-driven Colitis Model to Study Presentation of Antigens by Antigen Presenting Cells to T Cells

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological mechanisms involved during the disease is the T cell transfer model of colitis. In this model, immunodeficient mice (RAG-/- recipients) are reconstituted with naive CD4+ T cells from healthy wild type hosts.
This model allows examination of the earliest immunological events leading to disease and chronic inflammation, when the gut inflammation perpetuates but does not depend on a defined antigen. To study the potential role of antigen presenting cells (APCs) in the disease process, it is helpful to have an antigen-driven disease model, in which a defined commensal-derived antigen leads to colitis. An antigen driven-colitis model has hence been developed. In this model OT-II CD4+ T cells, that can recognize only specific epitopes in the OVA protein, are transferred into RAG-/- hosts challenged with CFP-OVA-expressing E. coli. This model allows the examination of interactions between APCs and T cells in the lamina propria.

In this antigen-driven colitis model, OT-II CD4+ T cells expressing a red fluorescent protein were adoptively transferred into RAG-/- mice that express a green fluorescent protein in mononuclear phagocytes (MPs). The hosts were challenged with Escherichia coli (E.coli) expressing the ovalbumin protein (OVA) fused to a cyan fluorescent protein (CFP).

항원 중심의 성 대장염 모델의 개발은 항원이 T 세포에 세포를 제시하여 항원의 프리젠 테이션을 공부하기

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological ...

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best advance translational objectives and uncover new therapeutic strategies for brain injury associated with preterm birth, preclinical models of EoP must include similar mechanisms of prenatal global injury observed in humans and involve multiple components of the maternal-placental-fetal system. Ideally, models should produce a similar spectrum of functional deficits in the mature animal and recapitulate multiple aspects of the pathophysiology. To mimic human systemic placental perfusion defects, placental underperfusion and/or chorioamnionitis associated with pathogen-induced inflammation in early preterm birth, we developed a model of prenatal transient systemic hypoxia-ischemia (TSHI) combined with intra-amniotic lipopolysaccharide (LPS). In pregnant Sprague Dawley rats, TSHI via uterine artery occlusion on embryonic day 18 (E18) induces a graded placental underperfusion defect associated with increasing CNS damage in the fetus. When combined with intra-amniotic LPS injections, placental inflammation is increased and CNS damage is compounded with associated white matter, gait and imaging abnormalities. Prenatal TSHI and TSHI+LPS prenatal insults meet several of the criteria of an EoP model including recapitulating the intrauterine insult, causing loss of neurons, oligodendrocytes and axons, loss of subplate, and functional deficits in adult animals that mimic those observed in children born extremely preterm. Moreover, this model allows for the dissection of inflammation induced by divergent injury types.

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

의학

Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult mouse models to neonatal diseases is limited. To better understand disease progression, host responses and long-term impact of interventions in neonates, a neonatal mouse model likely is a better fit. The sparse use of neonatal mouse models can in part be attributed to the technical difficulties of working with these small animals. A neonatal mouse model was developed to determine the effects of probiotic administration in early life and to specifically assess the ability to establish colonization in the newborn mouse intestinal tract. Specifically, to assess probiotic colonization in the neonatal mouse, Lactobacillus plantarum (LP) was delivered directly into the neonatal mouse gastrointestinal tract. To this end, LP was administered to mice by feeding through intra-esophageal (IE) gavage. A highly reproducible method was developed to standardize the process of IE gavage that allows an accurate administration of probiotic dosages while minimizing trauma, an aspect particularly important given the fragility of newborn mice. Limitations of this process include possibilities of esophageal irritation or damage and aspiration if gavaged incorrectly. This approach represents an improvement on current practices because IE gavage into the distal esophagus reduces the chances of aspiration. Following gavage, the colonization profile of the probiotic was traced using quantitative polymerase chain reaction (qPCR) of the extracted intestinal DNA with LP specific primers. Different litter settings and cage management techniques were used to assess the potential for colonization-spread. The protocol details the intricacies of IE neonatal mouse gavage and subsequent colonization quantification with LP.

This study details the process of gavaging precise amounts of probiotics to neonatal mice. The experimental set-up was optimized to include but is not limited to probiotic dosing, methods of administration, and quantification of bacteria in the intestines.

Gavage를 사용 하 여 신생아 쥐에 있는 Probiotic 연구

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a protocol for studying the pathogenesis of E. coli O1:K1:H7, a serotype responsible for high mortality rates in neonates. Our method utilizes intravital imaging of neonatal pups at different time points during the progression of infection. This imaging, paralleled by measurement of bacteria in the blood, inflammatory profiling, and tissue histopathology, signifies a rigorous approach to understanding infection dynamics during sepsis. In the current report, we model two infectious inoculums for comparison of bacterial burdens and severity of disease. We find that subscapular infection leads to disseminated infection by 10 h post-infection. By 24 h, infection of luminescent E. coli was abundant in the blood, lungs, and other peripheral tissues. Expression of inflammatory cytokines in the lungs is significant at 24 h, and this is followed by cellular infiltration and evidence of tissue damage that increases with infectious dose. Intravital imaging does have some limitations. This includes a luminescent signal threshold and some complications that can arise with neonates during anesthesia. Despite some limitations, we find that our infection model offers an insight for understanding longitudinal infection dynamics during neonatal murine sepsis, that has not been thoroughly examined to date. We expect this model can also be adapted to study other critical bacterial infections during early life.

Infection of neonatal mice with bioluminescent E. coli O1:K1:H7 results in a septic infection with significant pulmonary inflammation and lung pathology. Here, we describe procedures to model and further study neonatal sepsis using longitudinal intravital imaging in parallel with enumeration of systemic bacterial burdens, inflammatory profiling, and lung histopathology.

그람 음성 세균 패혈증의 신생아 화상 진찰 모형

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus (GBS)

Group B Streptococcus (GBS) is one of the most common bacteria isolated during human pregnancy. It is a leading cause of placental infection/inflammation, termed chorioamnionitis. Chorioamnionitis exposes the developing fetus to a high risk of organ injuries, perinatal morbidity, and mortality, as well as life-long neurobehavioral impairments and other non-neurological developmental issues. The two most frequent subtypes of GBS isolates from maternal and fetal tissues are serotypes Ia (13%-23%) and III (25%-53%). Our lab has developed and characterized a rat model of GBS-induced chorioamnionitis to study subsequent impacts on the central nervous system of the developing fetus and to understand underlying mechanistic aspects. This article presents the design as well as uses of the preclinical rat model, which closely reproduces the hallmark of GBS-induced chorioamnionitis in humans. This article aims to help scientists reproduce the experimental design as well as to provide support through examples of troubleshooting. The present model may also contribute to potential discoveries through uncovering causes, mechanisms, and novel therapeutic avenues, which remain unsettled in many developmental impairments arising from chorioamnionitis. Furthermore, the use of this model may be extended to the studies of perinatal non-neurological common and severe morbidities affecting, for instance, the retina, bowel, lung, and kidney. The main interest of this research is in the field of GBS-induced fetal neurodevelopmental impairments such as cerebral palsy (CP), attention deficit hyperactivity disorder (ADHD), and autism spectrum disorder (ASD). The rationale supporting this model is presented in this article, followed by procedures and results.

<meta charset="utf8"></head><body>그룹 B 연쇄상 구균 GBS에 의해 유발된 융모양염의 전임상 동물 모델의 제왕절개

The goal of this protocol is to describe a preclinical animal model of Group B Streptococcus (GBS)-induced chorioamnionitis. The study is designed to investigate mechanistic processes, potential causal links with developmental impairments, and finally to develop translational anti-inflammatory placento- and neuro-protective treatments.

그룹 B 연쇄상구균 (GBS)에 의해 유발된 융모양막염의 전임상 동물 모델의 제왕절개

Group B Streptococcus (GBS) is one of the most common bacteria isolated during human pregnancy. It is a leading cause of placental infection/inflammation, ...

Assessment of Intestinal Transcytosis of Neonatal Escherichia coli Bacteremia Isolates

Newborns ingest maternal E. coli strains that colonize their intestinal tract around the time of delivery. E. coli strains with the ability to translocate across the gut invade the newborn's bloodstream, causing life-threatening bacteremia. The methodology presented here utilizes polarized intestinal epithelial cells grown on semipermeable inserts to assess the transcytosis of neonatal E. coli bacteremia isolates in vitro. This method uses the established T84 intestinal cell line that has the ability to grow to confluence and form tight junctions and desmosomes. After reaching confluence, mature T84 monolayers develop transepithelial resistance (TEER), which can be quantified using a voltmeter. The TEER values are inversely correlated with the paracellular permeability of extracellular components, including bacteria, across the intestinal monolayer. The transcellular passage of bacteria (transcytosis), on the other hand, does not necessarily alter the TEER measurements. In this model, bacterial passage across the intestinal monolayer is quantified for up to 6 h post-infection, and repeated measurements of TEER are made to monitor the paracellular permeability. In addition, this method facilitates the use of techniques such as immunostaining to study the structural changes in tight junctions and other cell-to-cell adhesion proteins during bacterial transcytosis across the polarized epithelium. The use of this model contributes to the characterization of the mechanisms by which neonatal E. coli transcytose across the intestinal epithelium to produce bacteremia.

Assessment of Intestinal Transcytosis of Neonatal Escherichia coli Bacteremia Isolates

Escherichia coli&#160;causes sepsis in neonates who ingest the bacteria around the time of birth. The process involved in&#160;E. coli&#8217;s&#160;ability to travel from the enteric tract to the bloodstream is poorly understood. This&#160;in vitro&#160;model assesses the ability of&#160;E. coli&#160;strains to travel through the intestinal epithelial cells.

신생아 대장균 균 혈증 분리물의 장 트랜스사이토시스 평가

Newborns ingest maternal E. coli strains that colonize their intestinal tract around the time of delivery. E. coli strains with the ability to translocate ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

괴사 장염의 신생아 BALB/c 마우스 모델

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...

신생아 장 발달에 급성 chorioamnionitis의 효력을 연구하기 위하여 모성 염증에 태아 노출의 Murine 모형

요약

더 많은 비디오 탐색

Neuropathogenic의 비 침습 모델

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도

항원 중심의 성 대장염 모델의 개발은 항원이 T 세포에 세포를 제시하여 항원의 프리젠 테이션을 공부하기

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

Gavage를 사용 하 여 신생아 쥐에 있는 Probiotic 연구

그람 음성 세균 패혈증의 신생아 화상 진찰 모형

그룹 B 연쇄상구균 (GBS)에 의해 유발된 융모양막염의 전임상 동물 모델의 제왕절개

그룹 B 연쇄상구균 (GBS)에 의해 유발된 융모양막염의 전임상 동물 모델의 제왕절개

신생아 대장균 균 혈증 분리물의 장 트랜스사이토시스 평가

괴사 장염의 신생아 BALB/c 마우스 모델